消炎散質(zhì)量控制研究

藍(lán)獻(xiàn)麗，巫玲玲，藍(lán) 彬，植國(guó)繁，羅春水，蔣敏捷，蔣偉哲，孔曉龍

（廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

消炎散質(zhì)量控制研究

藍(lán)獻(xiàn)麗，巫玲玲，藍(lán) 彬，植國(guó)繁，羅春水，蔣敏捷，蔣偉哲，孔曉龍

（廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

目的 建立消炎散的質(zhì)量控制方法。方法 用薄層色譜（TLC）法進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定大黃素和大黃酚的含量。結(jié)果 薄層色譜斑點(diǎn)清晰集中，大黃素進(jìn)樣量在 0．018 6～0．127 6 g（r＝0．999 6），大黃酚進(jìn)樣量在 0．041 0～0．406 0 g（r＝1．000 0）范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。大黃素與大黃酚平均回收率分別為 100．37%，91．41%，RSD分別為3．57%，1．95%（n＝6）。結(jié)論 薄層色譜定性鑒別準(zhǔn)確，HPLC法準(zhǔn)確度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于消炎散的質(zhì)量控制。

大黃素；大黃酚；消炎散；高效液相色譜法；薄層色譜法；質(zhì)量控制

消炎散是在臨床經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制開(kāi)發(fā)而成的 具有民族特色的壯藥復(fù)方制劑，由卡?。[節(jié)風(fēng)）、棵蒙

廣西壯族自治區(qū)西南特色民族藥物開(kāi)發(fā)工程研究中心項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：桂教科研[2013]8號(hào)－3。秒（腎茶）、大黃、棵烘（大青葉）、冰片等5味中藥材組方，具有清熱解毒、消腫祛瘀、散結(jié)止痛功效，臨床通過(guò)透穴療法外用于咽喉疼痛、牙齦腫痛、皮膚軟組織感染、附件炎、尿路感染、痔瘡發(fā)炎等各種淺、中度炎癥性疼痛，有良好的抗菌消炎、鎮(zhèn)痛作用。

壯藥透穴療法是在傳統(tǒng)療法的基礎(chǔ)上結(jié)合廣西壯藥發(fā)展起來(lái)的創(chuàng)新性特色療法，是將壯藥貼敷于人體特定穴位上，以增強(qiáng)藥物療效而達(dá)到治療目的的方法，所選用的藥物和穴位、部位應(yīng)視具體疾病和病情而定。消炎散主要取穴于關(guān)元、中極等穴位，多數(shù)炎性疼痛外用1次痛減，2～4次可治愈。此方中腫節(jié)風(fēng)為君藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛功效，對(duì)金黃色葡萄球菌（包括耐藥菌株）、甲型鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等均有一定的抑制作用[1]。腎茶、大黃及大青葉為臣藥，腎茶具有清利濕熱、排石通淋功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于治療腎炎、膀胱炎及尿道結(jié)石；大黃具有攻下導(dǎo)滯、瀉火解毒、祛瘀止血功效，對(duì)多種細(xì)菌有不同程度的抑制作用，尤其對(duì)葡萄球菌、鏈球菌最敏感，對(duì)白喉?xiàng)U菌、枯草桿菌也較敏感；大青葉具有清熱解毒、涼血止血、消斑功效，大青葉煎劑在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、甲型鏈球菌、腦膜炎雙球菌、肺炎鏈球菌等均有一定的抑制作用[1－2]。冰片為佐藥，具有開(kāi)竅醒神、散熱止痛、利咽明目功效[2]。

近年來(lái)，隨著抗菌藥物的使用日益廣泛，由此導(dǎo)致的抗菌藥物不合理應(yīng)用甚至濫用，正嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康[3]。消炎散的使用在一定程度上可避免或減少部分抗菌藥物的使用。此外，消炎散和傳統(tǒng)中藥比較，無(wú)需輸液、打針、吃藥，避免傳統(tǒng)給藥途徑造成的損害；費(fèi)用較低，患者易接受，醫(yī)療成本低，醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)極低?？梢?jiàn)，消炎散有較好的應(yīng)用和研究前景。至今，本品尚未有可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制其質(zhì)量。為此，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定大黃素和大黃酚的含量，旨在為消炎散的質(zhì)量控制及探索其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

EL204型電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；XS205DU型十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KQ－500DB型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；安捷倫1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）。

1．2 試藥

消炎散（市售品，批號(hào)分別為20150612，20150721，20150727）；大黃素對(duì)照品（批號(hào)為110756－200110，純度為100%），大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為110796－201319，含量以 99.6%計(jì)），大黃酸對(duì)照品（批號(hào)為 110757－200206），大黃對(duì)照藥材（批號(hào)為120984－201202），均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。硅膠H板（青島鼎康硅膠有限公司，批號(hào)為20150704）。乙腈、甲醇均為色譜純；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 性狀

本品為棕黃色粉末，具有輕微的芳香氣味。

2．2 薄層色譜(TLC)鑒別(大黃)

取本品粉末1.0 g，加甲醇20 mL，浸泡1 h，濾過(guò)，取濾液5 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.2 g和缺大黃陰性對(duì)照品1.0 g，同法分別制成大黃對(duì)照藥材溶液和缺大黃陰性對(duì)照品溶液。再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

照2015年版《中國(guó)藥典（四部）通則0502》薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 mm）下檢視。置氨氣中熏后，日光下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾；日光下，供試品溶液在與對(duì)照品和對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同紅色斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2．3 檢查

粒度檢查：取同一批供試品（批號(hào)為 20150612）3份，照2015年版《中國(guó)藥典（四部）通則0982單篩分法》粒度和粒度分布測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果通過(guò)七號(hào)篩的平均值為96.42%（＞95%）。

外觀均勻度檢查：取供試品適量，置光滑紙上，平鋪約5 cm，將其表面壓平，在明亮處觀察，結(jié)果消炎散色澤均勻，無(wú)花紋與色斑。

水分檢查：取同一批供試品（批號(hào)為 20150612）3份，照2015年版《中國(guó)藥典（四部）通則0982烘干法》水分測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果平均含水量為8.40%（＜9%）。

裝量差異：取消炎散10袋，按2015年版《中國(guó)藥典（四部）制劑通則10115散劑檢查》散劑檢查法測(cè)定，裝量差異小于5%，表明該散劑裝量差異符合規(guī)定。

2．4 含量測(cè)定

2．4．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1 大黃薄層色譜圖

色譜柱：Luna?5μm C18柱（250mm×4.6mm，4.6μm）；流動(dòng)相：乙腈－甲醇－0.1%磷酸（42∶23∶35）；流速：1 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。結(jié)果陰性對(duì)照對(duì)含量測(cè)定無(wú)干擾，目標(biāo)峰與相鄰色譜峰分離度均大于2．0，見(jiàn)圖2。

2．4．2 溶液制備

取本品粉末約0．75 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5 mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲（功率500W）處理2min，再加三氯甲烷10mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量超聲（功率500 W）處理1 min，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別稱(chēng)取大黃素對(duì)照品2．9 mg、大黃酚對(duì)照品5．1 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別制成每1 mL含大黃素58 μg、大黃酚101．59 μg的對(duì)照品溶液，作為貯備液。按消炎散的處方及工藝，制成不含大黃的陰性樣品，按供試品溶液方法制成陰性對(duì)照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2．4．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取0．8，1．5，2．5，3．5，4．5，5．5 mL大黃素對(duì)照品貯備液和1，2，4，6，8，10 mL大黃酚對(duì)照品貯備液，置25 mL容量瓶中，混勻，加甲醇定容至刻度，配成6個(gè)不同濃度的混合對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣2次，每次10 μL。以對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得大黃素線性回歸方程 Y＝4 110．834 9 X－9．574 9（r＝0．999 6），大黃酚線性回歸方程 Y＝5 587．482 6 X－2．479 6（r＝1．000 0）。結(jié)果表明，大黃素和大黃酚進(jìn)樣量分別在0．018 6～0．127 6 μg和0．041 0～0．406 0 μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一混合對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果大黃素、大黃酚峰面積的 RSD分別為0．37%，0．26%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為20150612）溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，在常溫下分別于0，2，4，6，8，10，12，14，16，18 h時(shí)進(jìn)樣，記錄大黃素、大黃酚峰面積。結(jié)果的 RSD分別為0．72%和0．74%(n＝10)，表明供試品溶液常溫下在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為20150612）適量，共6份，分別按2．4．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果大黃素、大黃酚的平均含量分別0．408 6 mg／g和1．177 4 mg／g，RSD分別為1．79%和1．10%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量（批號(hào)為20150612）的樣品（大黃素、大黃酚的含量分別為 0．408 6 mg／g，1．177 4 mg／g）粉末6份，分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為58 μg／mL）2．5 mL和大黃酚對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為71．71 μg／mL）6 mL，按2．4．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。見(jiàn)表1。

表1 大黃素及大黃酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2．4．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果顯示，本品每1 g含大黃以大黃素（C15H10O5）、大黃酚（C15H10O4）平均值計(jì)算，均不少于0．60 mg。

表2 消炎散中大黃素和大黃酚含量測(cè)定結(jié)果（mg／g，n＝3）

3 討論

3．1 檢查

TLC鑒別法斑點(diǎn)清晰、陰性無(wú)干擾，可用于消炎散中大黃的鑒別，粒度、外觀均勻度檢查、水分檢查及裝量差異皆符合《中國(guó)藥典》要求。

3．2 含量測(cè)定

參考《中國(guó)藥典》及文獻(xiàn)[4－7]，流動(dòng)相考察了甲醇－0．1%磷酸（85∶15）、甲醇－0．1%磷酸（82∶18）、甲醇－0．1%磷酸（80∶20）、甲醇－0．1%磷酸（78∶22），結(jié)果大黃素、大黃酚均出現(xiàn)較嚴(yán)重拖尾。參考文獻(xiàn)[8]將流動(dòng)相調(diào)為乙腈－甲醇－0．1%磷酸溶液（42∶23∶35），經(jīng)多次考察，選擇其為流動(dòng)相，分離度好，保留時(shí)間適宜，峰形較好。本試驗(yàn)中建立的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可作為消炎散質(zhì)量控制方法。

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Quality Control of Xiaoyan Powders

Lan Xianli，Wu Lingling，Lan Bin，Zhi Guofan，Luo Chunshui，Jiang Minjie，Jiang Weizhe，Kong Xiaolong
（Pharmaceutics College，Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Objective To establish the quality control method of Xiaoyan Powders．M ethods Xiaoyan Powders was identified by TLC and the contents of emodin and chrysophanold were determined by HPLC．Results TLC spots were clear．Emodin and Chrysophanold had a good linear relationship among 0．018 6－0．127 6 μg（r＝0．999 6）and 0．041 0－0．406 0 μg（r＝1．000 0）respectively．The average recovery rate of emodin and chrysophanold were 100．37% and 91．41%，the RSD were 3．57% and 1．95% （n＝6）．Conclusion The qualitative identification is accurate，the HPLC method is accurate and specific with good reproducibility．It can be used for quantity control of Xiaoyan Powders．

emodin；chrysophanold；Xiaoyan Powders；HPLC；TLC；quality control

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0016－04

藍(lán)獻(xiàn)麗（1989－），女，廣西貴港人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)樾滤庨_(kāi)發(fā)，（電子信箱）435522979＠qq．com；蔣偉哲（1968－），男，博士研究生，教授，研究方向?yàn)樾滤庨_(kāi)發(fā)，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱 ）jiangweizhe6812＠163．com；孔曉龍（1966－），男，碩士研究生，副教授，研究方向?yàn)樾滤庨_(kāi)發(fā)，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱）KXL192＠163．com。

2015－07－14；

2015－08－29)