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    熱休克蛋白27、60和90在胃癌中的表達(dá)及其臨床價(jià)值

    2016-03-26 03:56:10周高見中信湘雅生殖與遺傳專科醫(yī)院湖南長(zhǎng)沙410078
    關(guān)鍵詞:胃癌

    周高見(中信湘雅生殖與遺傳??漆t(yī)院,湖南長(zhǎng)沙410078)

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    熱休克蛋白27、60和90在胃癌中的表達(dá)及其臨床價(jià)值

    周高見
    (中信湘雅生殖與遺傳??漆t(yī)院,湖南長(zhǎng)沙410078)

    摘要:目的探討熱休克蛋白(HSP-27)、HSP-60和HSP-90在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)66例胃癌組織HSP-27、HSP-60和HSP-90的表達(dá),并結(jié)合臨床病理特征、腫瘤增殖能力和患者生存期,分析3種熱休克蛋白(HSPs)表達(dá)的臨床意義。結(jié)果HSP-27、HSP-60和HSP-90在胃癌組織中異常高表達(dá)。HSP-27表達(dá)與腫瘤大小、器官轉(zhuǎn)移及病理分期相關(guān),而HSP-27染色強(qiáng)度與淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。HSP-60表達(dá)與患者性別相關(guān),而HSP-60染色強(qiáng)度與患者年齡和腫瘤病理組織學(xué)分級(jí)相關(guān)。HSP-90染色強(qiáng)度與腫瘤大小顯著相關(guān)(P=0.020)。單因素分析表明,HSP-90高表達(dá)與生存期更長(zhǎng)顯著相關(guān),多因素分析證實(shí)HSP-90高表達(dá)是胃癌獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論HSP-27、HSP-60和HSP-90與具有治療胃癌療效評(píng)估價(jià)值的臨床病理參數(shù)相關(guān)。HSP-90高表達(dá)是胃癌的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

    關(guān)鍵詞:胃癌;熱休克蛋白;預(yù)后

    熱休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)是在所有物種中廣泛存在、高度保守的蛋白,通常由熱休克、環(huán)境變化及生理病理壓力誘導(dǎo)引起,HSPs由幾種不同基因產(chǎn)物組成,通常根據(jù)其分子質(zhì)量命名[1]。HSPs的主要功能是作為分子伴侶,能夠維持其他多肽穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)移功能,熱休克蛋白的這一功能在保持正常細(xì)胞完整性和在惡性細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用十分重要。沒有外界壓力時(shí),HSPs與熱休克轉(zhuǎn)錄因子形成復(fù)合物,維持失活狀態(tài)[2];壓力狀態(tài)下,HSPs抑制分子伴侶,與錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)連接,通過蛋白激酶C和絲氨酸/酪氨酸激酶等蛋白激酶磷酸化使熱休克轉(zhuǎn)錄因子激活[3]。由此,熱休克轉(zhuǎn)錄因子在胞漿內(nèi)形成同源三聚體結(jié)構(gòu),并與熱休克元素結(jié)合,激活熱休克誘導(dǎo)基因。

    除了應(yīng)答熱休克、化學(xué)或物理因素刺激,HSPs在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌和前列腺癌等多種人類腫瘤中過表達(dá)[4]。多種HSPs表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖和分化、多種類型腫瘤中凋亡相關(guān)分子調(diào)控密切相關(guān)。目前,已有數(shù)種針對(duì)HSPs的抗腫瘤藥物在進(jìn)行臨床前期實(shí)驗(yàn)。例如,靶向HSP-90藥物17AAG和SNX2112能夠選擇性抑制表達(dá)HSP-90的腫瘤細(xì)胞,而影響正常細(xì)胞功能[5]。

    胃癌是中國(guó)及其他亞洲國(guó)家發(fā)病率較高的消化道惡性腫瘤。幽門螺旋桿菌感染和吸煙被認(rèn)為是胃癌發(fā)生的環(huán)境因素。近來有研究表明,HSPs與胃腫瘤密切相關(guān)[6]。但是關(guān)于HSPs表達(dá)與胃癌治療和患者預(yù)后相關(guān)性的研究較為少見。

    本研究主要評(píng)估胃癌組織中HSP-27、HSP-60 和HSP-90的表達(dá),并探討其與胃癌患者臨床參數(shù)和生存期的相關(guān)性。

    1 資料與方法

    1.1研究對(duì)象

    選取2007年1月-2008年12月于湘雅醫(yī)院普外科接受外科手術(shù)治療的66例原發(fā)性胃腺癌患者納入本研究。其中,男性47例,女性19例;年齡34~86歲,中位年齡56歲?;颊咝g(shù)前經(jīng)胃鏡活檢病理、CT或MRI檢查確診,臨床和病理資料完整。接受胃癌根治術(shù)者31例,接受非根治性手術(shù)者35例。同時(shí)選擇胃癌組織和癌旁正常胃黏膜組織作為對(duì)照組。

    1.2免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)

    HSP-27、HSP-60和HSP-90抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司,免疫組織化學(xué)試劑[PV6000和二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine,DAB)顯色液]購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。主要實(shí)驗(yàn)步驟:石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化,用3%雙氧水H2O2。去離子水孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。微波抗原熱修復(fù)后,滴加一抗,置入4℃冰箱保存過夜。滴加二抗,37℃保溫箱孵育15 min。滴加DAB溶液顯色、復(fù)染、脫水、封片,光鏡下觀察。以磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer saline,PBS)代替一抗為陰性對(duì)照,以出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒的細(xì)胞作為陽(yáng)性細(xì)胞,HSP-27、HSP-60和HSP-90陽(yáng)性部位在細(xì)胞漿。陽(yáng)性強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)判斷按光鏡下觀察陽(yáng)性染色的細(xì)胞比例(5個(gè)高倍視野下的均數(shù)):①染色細(xì)胞數(shù)<10%為陰性;②染色細(xì)胞數(shù)10%~50%為陽(yáng)性;③染色細(xì)胞數(shù)>50%為強(qiáng)陽(yáng)性。顯微攝像并用圖像分析儀進(jìn)行光密度值檢測(cè)。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,用單因素方差分析(One-way,ANOVA)HSP-27、HSP-60和HSP-90蛋白表達(dá)水平與性別、年齡、癌細(xì)胞分化程度及臨床分期等各臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性;對(duì)胃癌HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)進(jìn)行分層比較,用單因素和多因素分析研究各因素對(duì)預(yù)后的影響,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1免疫組織化學(xué)結(jié)果

    HSP-27、HSP-60和HSP-90在胃癌中的表達(dá)明顯高于正常組織。HSP-27、HSP-60和HSP-90典型免疫染色見圖1A~C。

    2.2HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)的臨床意義

    HSP-27表達(dá)平均值為52%,而在胃癌組織中HSP-27高表達(dá)(50%)。HSP-27的免疫染色強(qiáng)度分為輕度20例(30%)、中度40例(61%)及重度6例(9%)。HSP-27表達(dá)與腫瘤大小、器官轉(zhuǎn)移及病理分期相關(guān)(P=0.026、0.046和0.041)。HSP-27染色強(qiáng)度與淋巴結(jié)陽(yáng)性顯著相關(guān)(P=0.042)。見表1。

    HSP-60表達(dá)平均值為52%,而在胃癌組織中HSP-60高表達(dá)(55%)。HSP-60免疫染色強(qiáng)度分為輕度21例(32%)、中度32例(48%)及重度13例(20%)。HSP-60表達(dá)與患者性別(P=0.011)相關(guān)。HSP-60染色強(qiáng)度與患者年齡及腫瘤組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)(P=0.027和0.031)。見表2。

    圖1 HSP-27、HSP-60和HSP-90在胃癌組織中的表達(dá)(×200)

    表1 66例胃癌患者HSP-27表達(dá)、染色強(qiáng)度和臨床病理特點(diǎn) 例(%)

    表2 66例胃腺癌患者的HSP-90表達(dá)、染色強(qiáng)度和臨床病理特點(diǎn) 例(%)

    續(xù)表1

    HSP-90表達(dá)平均值為48%,而胃癌組織中HSP-90高表達(dá)(55%)。HSP-90免疫染色強(qiáng)度分為輕度30例(45%)、中度31例(47%)及重度5例(8%)。HSP-90表達(dá)與本研究所分析的臨床病理參數(shù)無關(guān)。HSP-90染色強(qiáng)度與腫瘤大小顯著相關(guān)(P= 0.020)。見表3。

    表3 66例胃癌患者的HSP-90表達(dá)、染色強(qiáng)度和臨床病理特點(diǎn) 例(%)

    2.3胃癌HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)的相關(guān)性

    本研究采用斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)系數(shù)評(píng)估HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果表明,HSP-27表達(dá)與HSP-60和HSP-90表達(dá)呈正相關(guān)(rs1=0.47,P1=0.000;rs2=0.32,P2=0.008),HSP-60和HSP-90表達(dá)程度也呈正相關(guān)(rs=0.25,P=0.044)。見表4。

    表4 66例胃癌患者的HSP-27、HSP-60和HSP-90蛋白質(zhì)表達(dá)程度的斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)性

    2.4胃癌中HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)的預(yù)后意義

    Kaplan-Meier生存曲線分析表明,胃癌中HSP-27、HSP-60表達(dá)與患者總體生存期無關(guān)(P =0.478和 0.953),而單因素分析表明,HSP-90高表達(dá)與低表達(dá)胃癌患者生存率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033)(見圖2A),多元回歸分析也證實(shí)HSP-90表達(dá)具有預(yù)后意義(P=0.026)。HSP-27、HSP-60和HSP-90免疫染色強(qiáng)度與患者生存率無關(guān)(P=0.577、0.094和0.299)。多元回歸分析還發(fā)現(xiàn),淋巴結(jié)陰性胃癌患者(pN0)HSP-90高表達(dá)與生存率相關(guān)(P =0.042)(見圖2B);高度及中度分化(G1/G2)胃癌患者HSP-90高表達(dá)與較長(zhǎng)整體生存時(shí)間顯著相關(guān)(P =0.036)(見圖2C)。未發(fā)生臟器轉(zhuǎn)移的胃癌患者(pM0)HSP-90高表達(dá)與較長(zhǎng)生存時(shí)間顯著相關(guān)(P=0.027)(見圖2D),多因素分析證實(shí)HSP-90高表達(dá)是胃癌患者獨(dú)立預(yù)后因素(P=0.032)。

    圖2 HSP-90表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

    3 討論

    HSPs在多種人類腫瘤細(xì)胞中過表達(dá),本研究進(jìn)一步證實(shí)HSP-27、HSP-60和HSP-90表達(dá)在胃癌發(fā)展中的臨床意義。本研究結(jié)果表明,HSP-27、HSP-60和HSP-90在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)。TAKANO[7]和KAPRANOS等[8]研究表明HSP-27的發(fā)生率分別為52.4%(22/42)和62.7%(54/86)。另外,HSP-70和HSP-40在胃癌中陽(yáng)性染色百分率分別為67.9%(55/81)和22.2%(18/81)。

    本研究發(fā)現(xiàn),胃癌組織中HSP-27、HSP-60和HSP-90的陽(yáng)性表達(dá)率分別52%、52%和48%。一項(xiàng)僅含10例胃癌標(biāo)本的蛋白質(zhì)組學(xué)研究分析表明,HSP-60、HSP-70及含TCP1伴侶蛋白亞基1(chaperonin containing TCP1,CCT)在胃癌組織中呈過表達(dá),CCT屬于HSP-60家族成員。該研究表明,HSP-60、HSP-70和CCT過表達(dá)可能是由惡性轉(zhuǎn)化期間細(xì)胞的脅迫應(yīng)答和自我保護(hù)機(jī)制引起[9]。

    研究發(fā)現(xiàn),HSP-27表達(dá)程度與HSP-60和HSP-90蛋白質(zhì)的表達(dá)程度呈正相關(guān)(斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)),并得出HSP-60與HSP-90的表達(dá)有較低的相關(guān)性(斯皮爾曼等級(jí)相關(guān))。本研究發(fā)現(xiàn),HSP-27表達(dá)及免疫染色強(qiáng)度與患者治療時(shí)重要臨床病理特征存在相關(guān)性。本結(jié)果與之前的一項(xiàng)證據(jù)一致,該研究在86例人類胃癌樣本中證實(shí)HSP-27表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性[8]。本研究也發(fā)現(xiàn),HSP-27強(qiáng)度與免疫染色表達(dá)和淋巴腺狀態(tài)分別存在著顯著及邊界相關(guān)性。另外,HSP-27表達(dá)與器官轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)、腫瘤大小和病理分期顯著相關(guān)。然而,HSP-27表達(dá)和染色強(qiáng)度與患者生存不相關(guān)。Isomoto[10]和Maehara等[11]也都未發(fā)現(xiàn)HSP表達(dá)與患者生存的任何相關(guān)性。事實(shí)上,組織病理分化與HSP-70的表達(dá)顯著相關(guān),然而HSP-70和HSP-40表達(dá)對(duì)任何推測(cè)預(yù)后及生存的因素都沒有影響。

    HSP-60表達(dá)與患者性別顯著相關(guān),而與Ki-67標(biāo)記指數(shù)反映的腫瘤病理組織學(xué)分級(jí)和增殖能力僅有邊界相關(guān)性。事實(shí)上,女性患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的HSP-60表達(dá)要高于男性患者,而不良分化腫瘤中HSP-60的表達(dá)頻率則高于高度和中度分化腫瘤。另外,HSP-60的染色強(qiáng)度與患者年齡及腫瘤病理組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)。

    根據(jù)本研究結(jié)果,HSP-90與臨床病理特征無關(guān)。然而,HSP-90免疫染色強(qiáng)度與腫瘤大小顯著相關(guān),與病理組織學(xué)類型邊界相關(guān)??傮w來說,已經(jīng)在幾種類型癌癥中對(duì)HSP-90表達(dá)值進(jìn)行檢測(cè);關(guān)于胃癌,F(xiàn)landrin等[13]報(bào)告HSP-90α與淋巴轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性。

    目前,尚無關(guān)于胃癌中HSP-90表達(dá)預(yù)后價(jià)值的研究報(bào)道。本研究為檢查胃腺癌患者預(yù)后方面HSP-90表達(dá)的臨床意義的第一份報(bào)道。單因素生存分析中,較高的HSP-90蛋白質(zhì)表達(dá)與較長(zhǎng)的整體生存時(shí)間相關(guān)。另外,單因素生存分析顯示,HSP-90蛋白質(zhì)表達(dá)對(duì)于胃腺癌患者是一個(gè)重要并獨(dú)立的預(yù)后因素。在淋巴結(jié)陰性的不同臨床亞組中,高度和中度分化、器官轉(zhuǎn)移陰性和HSP-90高蛋白質(zhì)表達(dá)與預(yù)后良好相關(guān)。此外,HSP-90表達(dá)和免疫染色強(qiáng)度顯示出在腸型中與整體生存時(shí)間相關(guān)的趨勢(shì),但該趨勢(shì)并不存在于彌漫型胃癌病例中。彌漫型和腸型胃癌患者之間對(duì)立的HSP-90過表達(dá)預(yù)后值可以歸因于腫瘤微環(huán)境和每個(gè)腫瘤病理組織學(xué)類型的個(gè)體細(xì)胞特點(diǎn)所產(chǎn)生的不同信號(hào)。這樣明顯的不同能夠觸發(fā)腫瘤樣細(xì)胞來上調(diào)或下調(diào)與腫瘤病理組織學(xué)類型相關(guān)的HSP-90信號(hào)??傊?,HSP-27、HSP-60和HSP-90與部分胃癌臨床病理參數(shù)有關(guān),該參數(shù)對(duì)評(píng)估胃腺癌患者的療效具有重要價(jià)值。HSP-90高表達(dá)是胃腺癌患者的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。

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    (申海菊編輯)

    Expression of HSP-27, 60 and 90 in gastric cancer and its clinical significance

    Gao-jian Zhou
    (Reproductive and Genetic Hospital of China International Trust and Investment Company-Xiangya, Changsha, Hunan 410078, China)

    Abstract:Objetives To evaluate the clinical significance of heat shock protein (HSP)-27, HSP-60 and HSP-90 expression in gastric carcinoma.Methods HSP-27, HSP-60 and HSP-90 expression was assessed immunohistochemically in tumoral samples of 66 gastric adenocarcinoma patients and was statistically analyzed in relation to various clinicopathological characteristics, tumor proliferative capacity and patients' survival.Results HSP-27, HSP-60, HSP-90 were abundantly expressed in the gastric adenocarcinoma tissues.HSP-27 expression was significantly associated with tumor size, the presence of organ metastases and pathological stage, while HSP-27 staining intensity was significantly correlated with nodal status.HSP-60 expression was significantly correlated with patients' sex, while HSP -60 staining intensity with patients' age and tumor histopathological grade.HSP-90 expression was not associated with any of the clinicopathological parameters examined; however, HSP-90 staining intensity was significantly associated with tumor size.High HSP-90 expression was significantly associated with longer overall survival time in univariate analysis, and was also identified as an independent prognostic factor in multivariate analysis.Conclusions HSP-27, HSP-60 and HSP-90 are correlated with certain clinicopathological parameters which are crucial for the management of gastric adenocarcinoma patients.HSP-90 expression may also be an independent prognostic indicator in gastric adenocarcinoma patients.

    Keywords:gastric cancr; heat shock protein; prognosis

    收稿日期:2015-10-16

    文章編號(hào):1005-8982(2016)01-0069-07

    中圖分類號(hào):R735.2

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

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