楊干瘤潰瘍病原菌生態(tài)學(xué)測(cè)定及攜菌病苗造林后林間癥狀觀察初報(bào)

孫玉梅 孫玉鵬

摘要：通過揚(yáng)干瘤潰瘍病原菌生態(tài)學(xué)測(cè)定，該潰瘍病原菌與楊灰斑病病原茵是同一種真菌，楊棒盤孢菌（Coryneum populinum Bresad.）。用帶病菌的樹苗造林后林間癥狀觀察，證明楊干瘤潰瘍是楊灰斑病苗頂稍部的病灶造林成活后在林間發(fā)病的癥狀表現(xiàn)。

關(guān)鍵詞：楊干瘤潰瘍；楊棒盤孢菌

遼寧省朝陽(yáng)地區(qū)近年來(lái)?xiàng)顦淞殖霈F(xiàn)了一種在樹干上生出瘤狀物，瘤體流出樹液的病害（本文簡(jiǎn)稱為楊干瘤潰瘍）。病瘤多集中在樹干距離地面1.5m高度上下。發(fā)病癥狀一般是2年生樹初見小隆起，3年生樹隆起為瘤狀，樹皮微裂，內(nèi)皮外翻，4年生樹皮嚴(yán)重開裂，樹液外溢。隨著樹齡增加，樹瘤增大，樹液也增多，樹液顏色有變化，由無(wú)色逐漸變?yōu)楹稚?，后期呈現(xiàn)深褐色。由于潰瘍液下滲，瘤體隨之向下蔓延。6-7年后樹液外溢逐漸減少，樹勢(shì)明顯衰弱，枝條逐漸干枯，病瘤木質(zhì)外露，改變了圓形樹干形狀，凸凹龜裂，直致全株枯死。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2011年5月，在遼寧省朝陽(yáng)縣廿家子林場(chǎng)楊樹速生豐產(chǎn)林內(nèi)5年生北京楊品種樹干上取瘤狀病灶，取樣部位在病瘤與健康部位的交界處。

用解剖刀將樹皮和木質(zhì)淺層割下帶回室內(nèi)，在70%酒精中浸泡Imin，再放入1/4漂白粉溶液中浸泡3min，取出用蒸餾水洗3遍，放人4℃的冰箱中備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌檢測(cè)。將試驗(yàn)樣本切碎，再用沙布過濾，使病原菌進(jìn)入無(wú)菌水中，形成菌液，將菌液放在PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂）平板培養(yǎng)基上，27℃恒溫箱中懸滴培養(yǎng)。

1.2.2 過敏反應(yīng)測(cè)定。用旱煙苗過敏反應(yīng)測(cè)定。將旱煙苗的莖部表皮和葉肉劃破，同時(shí)將PDA平板培養(yǎng)基上的楊干瘤潰瘍病原菌菌株移接到煙苗劃痕部位。

1.2.3 水培養(yǎng)接種致病測(cè)定。將有過敏反應(yīng)的菌株用器械接入水培養(yǎng)的楊樹棒上。

1.2.4 病苗造林觀察林間癥狀試驗(yàn)。用楊灰斑病疫苗（黑脖子苗）造林連年觀察是否有楊干瘤潰瘍出現(xiàn)。

2 結(jié)果分析

2.1 病原菌檢測(cè)

PDA平板培養(yǎng)基在27℃恒溫下懸滴培養(yǎng)6h出現(xiàn)分生孢子萌發(fā)。初生分生孢子乳白透明，24h分生孢子呈綠灰色，48h呈綠褐色，150h出現(xiàn)黑褐色霉層，即分生孢子堆。

經(jīng)鏡下觀察，該菌分生孢子盤寬約40-160μm。分生孢子梗褐色，有1-2個(gè)橫隔。分生孢子大小約為（25-40）μm×（6-ll）μm.壁稍厚，呈褐色，具2-3個(gè)橫隔，梭形，一端呈鈍角形彎曲，上數(shù)第3個(gè)細(xì)胞稍大。 參考邵力平等《真菌分類學(xué)》和鞠國(guó)柱《中國(guó)森林病害》，楊樹灰斑病，楊干瘤潰瘍由東北球腔菌（My-cosphaerella mandshurica）引起。其無(wú)性孢子時(shí)代屬于半知菌類的楊棒盤孢菌（coryneum populinum Bresad.）——楊灰斑病病原菌。

2.2 過敏反應(yīng)測(cè)定

在27℃恒溫下，經(jīng)過接種的煙苗3d后觀察接觸點(diǎn)均為陽(yáng)性反應(yīng)。

2.3 室內(nèi)水培養(yǎng)接種致病測(cè)定

將楊嫩枝削成牙簽粗細(xì)相等，然后截成0.5cm長(zhǎng)的小段，在過敏反應(yīng)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3d后，插入水培養(yǎng)楊樹棒的鉆孔內(nèi)。用消毒沙布覆蓋30d后多數(shù)接種點(diǎn)處的木質(zhì)變成淺褐色，但未見木質(zhì)部增生成瘤。由于做水培養(yǎng)試驗(yàn)不能長(zhǎng)期進(jìn)行，所以樹干瘤潰瘍致病檢驗(yàn)測(cè)定還需到林間進(jìn)行。

2.4 楊苗栽植致病試驗(yàn)

2.4.1 攜菌苗造林。根據(jù)病原菌檢測(cè)結(jié)果，決定用楊灰斑病疫苗栽植成林進(jìn)行致病檢驗(yàn)。試驗(yàn)苗木選自遼寧省朝陽(yáng)縣廿家子林場(chǎng)苗圃，造林地點(diǎn)在林場(chǎng)場(chǎng)部西面距場(chǎng)院墻西lOOm遠(yuǎn)。廿家子林場(chǎng)位于小凌河北岸，地勢(shì)平坦低洼。場(chǎng)院南門至河水邊緣150m距離。苗圃地在場(chǎng)院東側(cè)墻外，面積lOhm²，苗圃濕度大，楊苗灰斑病嚴(yán)重。廿家子林場(chǎng)轄區(qū)內(nèi)楊干瘤潰瘍病也比較多發(fā)。

2012年4月10日，選用廿家林場(chǎng)苗圃內(nèi)楊灰斑病苗50株。疫苗等級(jí)Ⅳ級(jí)，苗木整株暗淡少光，頂梢20-30cm失水嚴(yán)重，顏色灰暗，已經(jīng)形成了“黑脖子”。 造林設(shè)計(jì)施工和林間管理等都按營(yíng)造楊樹速生豐產(chǎn)林標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。6月10日調(diào)查50株苗全部成活。

2.4.2 林間致病調(diào)查。將50株試驗(yàn)樹編碼，每年9月中旬調(diào)查50株試驗(yàn)樹發(fā)病癥狀。

2012年9月16-18日調(diào)查，試驗(yàn)樹干約1.5m高處46株表皮下有微隆起，長(zhǎng)度在20-30cm間，4株無(wú)異常表現(xiàn)。

2013年9月20-22日調(diào)查：隨著樹長(zhǎng)高，樹干增粗，表皮隆起增大，樹皮見裂紋，露嫩白色內(nèi)皮。2012年無(wú)異常的4株中3株未改變，只有1株樹干高1.5m處出現(xiàn)瘤狀突起，瘤子密集，似珠算盤上的串珠形。已有47株有癥狀。

2014年9月20-21日調(diào)查，原47株瘤體樹皮開裂，輕重程度不同，樹液外溢。另3株仍無(wú)癥狀表現(xiàn)。

2015年9月18-19日調(diào)查，47株病瘤大量流淌樹液，液體顏色呈褐色，病瘤大于樹干0.5倍，長(zhǎng)度沒有擴(kuò)大，樹干上下部位無(wú)病瘤出現(xiàn)。另外3株表現(xiàn)健康。

3 結(jié)論與討論

（1）通過楊樹瘤狀潰瘍病原菌生態(tài)學(xué)檢測(cè)，該菌與楊灰斑病原菌形態(tài)吻合，可視為是同一種真菌，即東北球腔菌（Mycosphaerella mandshrmca）楊棒盤孢菌（Coryneum populinum Bresad.J.

（2）通過楊灰斑病疫苗造林試驗(yàn)觀察，林間表現(xiàn)病瘤形狀、潰瘍液顏色基本一致，病情發(fā)生發(fā)展規(guī)律相同。

（3）病瘤在樹干1.5m高度附近，此高度與樹苗頂梢部相近。 上述三點(diǎn)應(yīng)該說(shuō)明楊干瘤潰瘍是楊樹灰斑病楊苗黑脖子在林間樹干的發(fā)展表現(xiàn)。

（4）50株造林疫病苗有47株呈現(xiàn)瘤狀潰瘍，此試驗(yàn)證明地勢(shì)平坦低洼、水氣較大的造林地栽植病疫苗有90%以上發(fā)病的可能性。