參七合劑對高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響*

蔣 銳，姜海斌，劉柏炎，楊麗潔，金 娟

(1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室，湖南常德 415000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院，湖南長沙 410208)

參七合劑對高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B
及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響*

蔣 銳1，姜海斌1，劉柏炎2，楊麗潔1，金 娟1

(1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室，湖南常德 415000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院，湖南長沙 410208)

目的:觀察參七合劑對高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，探討其降脂機(jī)制。方法:將120只SD大鼠雌雄分開，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組(20只)和造模組(100只)，使用高脂飼料喂養(yǎng)造模。于第11天將造模組大鼠先按血脂水平分層，再隨機(jī)分為模型組、辛伐他汀組(給予辛伐他汀0.002 g·kg－1)參七合劑低、中、高劑量組(給予參七合劑1，2，4 g·kg－1)，每組20只。繼續(xù)喂養(yǎng)20 d后，按照試劑盒要求檢測apoAⅠ、apoB、總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoproteins，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoproteins，HDL-C)。使用DWN-90型血液流變分析儀檢測血液流變學(xué)指標(biāo)。HE染色觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)改變情況。結(jié)果:與辛伐他汀比較，參七合劑低、中劑量降低apoB、LDL-C及TC，升高apoAⅠ及HDL-C，減輕肝細(xì)胞脂肪變性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:參七合劑通過促使apoAⅠ合成增加、apoB合成減少消除增加，降低血脂水平。

參七合劑;高脂血癥;載脂蛋白AⅠ、B;血液流變學(xué);肝細(xì)胞脂肪變性

高脂血癥通常是指血漿中膽固醇和(或)甘油三酯升高所致的疾病，與冠心病、動脈粥樣硬化、脂肪肝等疾病關(guān)系密切，嚴(yán)重威脅著人類健康。目前，他汀類藥物是治療高脂血癥的首選西藥，但長期用藥所產(chǎn)生的不良反應(yīng)如肝腎功能損害、橫紋肌溶解等依然是治療中的難題［1］。中藥降脂研究已成為當(dāng)前的熱點，具有現(xiàn)實的臨床意義。前期實驗研究顯示，參七合劑對高脂血癥大鼠有較好的降脂作用［2］。本研究旨在通過實驗觀察參七合劑對高脂血癥大鼠載脂蛋白AⅠ、B(apoAⅠ、apoB)及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，進(jìn)一步探討參七合劑的降脂機(jī)制。

1 材料

1.1 動物

SD大鼠SPF級120只，雌雄各半，體質(zhì)量(236 ±14)g，購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司(動物許可證號SCXK(湘)2009-0004)。湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF實驗室，溫度20～22℃，相對濕度50%～60%。

1.2 高脂飼料［2］

按蛋黃粉10%(安徽亳州市眾意蛋業(yè)有限責(zé)任公司，批號20130426)、豬油5%、膽固醇5%(天津博迪化工股份有限公司，批號 20120814)、膽鹽0.5%(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，批號20120906)、甲硫氧嘧啶0.2%(天津博迪化工有限公司，批號201211093)、基礎(chǔ)飼料79.3%組成。

1.3 藥物

參七合劑由西洋參、三七、熟何首烏組成，3種藥物的飲片均購自長沙九芝堂藥材公司。飲片粉碎過200目篩，鈷60消毒。辛伐他汀10 mg/片，哈藥集團(tuán)三精明水藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批準(zhǔn)文號國藥準(zhǔn)字H20010454)。

1.4 試劑

總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、apoA、apoB試劑盒均購置于北京北化康泰臨床試劑有限公司(生產(chǎn)批號依次為20130308、20130412、20130603、20130210、20130424、20130207)。

1.5 儀器

日立750型自動生化分析儀(日本日立)，DWN-90型血液流變分析儀(北京多米諾科技有限公司)，OlympusAH-2顯微鏡(日本奧林巴斯)。

2 方法

2.1 造模及分組

120只SD大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后先將雌雄分開，然后分別將雌雄SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組20只，造模組100只，2組中雌雄各半。對照組給予普通飼料，造模組給予高脂飼料，自然攝食，連續(xù)喂養(yǎng)10 d。第11天120只SD大鼠腹腔注射烏拉坦1.5 g·kg－1麻醉，尾靜脈采血檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C。將造模組大鼠雌雄分開，按照血脂4項水平分別分層，然后隨機(jī)分成模型組、辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組各20只，雌雄各半。對照組繼續(xù)給予普通飼料，模型組、藥物干預(yù)各組均給予高脂飼料，繼續(xù)喂養(yǎng)20 d。

2.2 給藥

給藥劑量換算方法［4］:，人、鼠的體形系數(shù)分別為R人=0.1、 R鼠=0.09。根據(jù)臨床藥理試驗研究，以臨床等效劑量的1、2、4倍量作為SD大鼠的低、中、高劑量，則參七合劑低、中、高劑量組每只SD大鼠的給藥量分別為0.2 g、0.4 g、0.8 g。辛伐他汀(10 mg/片)溶于蒸餾水，配置成0.2 mg·mL－1的溶液。參七合劑溶于蒸餾水，配置成0.1 g·mL－1、0.2 g·mL－1、0.4 g ·mL－1的溶液。藥物干預(yù)各組分別給予辛伐他汀或參七合劑溶液2 mL/只灌胃，對照組和模型組均給予蒸餾水2 mL/只灌胃，給藥在晚8時進(jìn)行。

2.3 指標(biāo)檢測

第31天，SD大鼠腹腔注射烏拉坦1.5 g·kg－1麻醉，心臟采血。自動生化分析儀檢測 TC、TG、LDL-C、HDL-C、apoAⅠ、apoB。以部分抗凝血做全血黏度測定(測定溫度37℃，設(shè)低切為10 s－1、高切為200 s－12個切變率)。用微量毛細(xì)管吸取全血，用毛細(xì)管式離心機(jī)12000 r/min離心5 min測定紅細(xì)胞壓積，部分全血3000 r/min離心15 min制備血漿，測定血漿黏度［3］。10%福爾馬林固定肝臟。標(biāo)本用乙醇逐級脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚5 μm，HE染色，光鏡下觀察肝組織脂肪變性情況并采集圖片。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 高脂血癥大鼠模型建立

表1顯示，各組內(nèi)雌雄之間TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與對照組比較，造模組 TC、TG、LDL-C顯著升高(P＜0.01)，HDL-C無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，符合高脂血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，表明造模成功。

表1 喂食10 d后高脂飼料對SD大鼠血脂4項的影響(±s)

表1 喂食10 d后高脂飼料對SD大鼠血脂4項的影響(±s)

注:與對照組比較:*P＜0.01。

組 別 鼠數(shù) TC/mmol·L－1 TG/mmol·L－1 LDL-C/mmol·L－1 HDL-C/mmol·L－1對照組1.51±0.27 20 2.04±0.28 0.40±0.14 1.85±0.41 1.47±0.32模型組 100 10.17±3.36* 1.03±0.11* 8.58±2.43*

3.2 參七合劑對高脂血癥大鼠血脂4項含量的影響

表2顯示，各組內(nèi)雌雄之間 TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與模型組比較，參七合劑各組、辛伐他汀組TC、TG、LDL-C降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C升高(P＜0.01)，表明參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C的含量，且能升高其HDL-C的含量。參七合劑低、中劑量組與辛伐他汀組比較，TC、LDL-C降低，HDL-C升高顯著(P＜0.01)，TG差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，參七合劑高劑量組與辛伐他汀組TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，表明參七合劑低、中劑量對高脂血癥大鼠TC、LDL-C、HDL-C的影響優(yōu)于辛伐他汀。

3.3 參七合劑對高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB含量的影響

表3顯示，各組內(nèi)雌雄之間apoB、apoAⅠ含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。參七合劑各組、辛伐他汀組與模型組比較，apoB含量降低(P＜0.01)，apoAⅠ含量升高(P＜0.01)，表明參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠apoB的含量，并能升高其apoAⅠ含量。與辛伐他汀組比較，參七合劑低、中劑量組apoB降低，apoAⅠ升高顯著(P＜0.01)，高劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，表明參七合劑低、中劑量對高脂血癥大鼠 apoAⅠ、apoB的影響優(yōu)于辛伐他汀。

表2 參七合劑對高脂血癥大鼠血脂4項的影響(±s)

表2 參七合劑對高脂血癥大鼠血脂4項的影響(±s)

注:與對照組比較:＊P＜0.01;與模型組比較:▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;與辛伐他汀組比較:#P＜0.01

組別 鼠數(shù) TC/mmol·L－1 TG/mmol·L－1 LDL-C/mmol·L－1 HDL-C/mmol·L－1對 照 組20 2.23±0.37 0.44±0.12 1.77±0.25 1.52±0.26模 型 組 20 23.71±6.82 1.62±0.48 19.40±4.91 1.66±0.29辛 伐 他 汀 組 20 16.52±4.40＊▲▲ 1.38±0.15＊▲ 14.79±3.18＊▲▲ 2.88±0.26＊▲▲參七合劑(低)組 20 11.74±3.39＊▲▲# 1.41±0.21＊▲ 10.03±3.51＊▲▲# 4.77±1.05＊▲▲#參七合劑(中)組 20 12.65±5.33＊▲▲# 1.40±0.17＊▲ 11.04±2.81＊▲▲# 3.91±0.43＊▲▲#參七合劑(高)組 20 17.11±4.24＊▲▲ 1.39±0.38＊▲ 15.73±4.06＊▲▲ 2.61±0.32＊▲▲

表3 參七合劑對高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB的影響(±s)

表3 參七合劑對高脂血癥大鼠apoAⅠ、apoB的影響(±s)

注:與對照組比較:＊P＜0.01;與模型組比較:▲P＜0.01;與辛伐他汀組比較:★P＜0.01

組別 20 apoAⅠ/mg·L－1 apoB/mg·L－1對 照 組20 111.3±14.6 244.7±38.2模 型 組 20 57.1±18.2 862.5±48.4辛 伐 他 汀 組 20 76.5±15.7＊▲ 447.2±54.6＊▲參七合劑(低)組 20 94.3±13.9＊▲★ 319.4±31.8＊▲★參七合劑(中)組 20 91.3±11.3＊▲★ 331.4±40.3＊▲★參七合劑(高)組 20 74.8±14.9＊▲ 451.0±49.4＊▲

3.4 參七合劑對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

表4顯示，與對照組比較，模型組大鼠全血黏度及血漿黏度升高(P＜0.01)，紅細(xì)胞壓積無明顯變化(P＞0.05)。與模型組比較，辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組全血黏度及血漿黏度均降低(P＜0.01)，紅細(xì)胞壓積無明顯變化(P＞0.05)。與辛伐他汀組比較，參七合劑低、中劑量組的各血液流變學(xué)指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，高劑量組全血黏度及血漿黏度均低于辛伐他汀組(P＜0.01)。

表4 參七合劑對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)

表4 參七合劑對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(±s)

注:與對照組比較:＊P＜0.01;與模型組比較:▲P＜0.01;與辛伐他汀組比較:★P＜0.01

組別 鼠數(shù) 全血黏度/mPa·s /%對 照 組 20 4.43±0.51 10.58±2.10 1.15±0.30 43.24±5.13 200 s－1 10 s－1 血漿黏度/mPa·s 紅細(xì)胞壓積42.67±4.41模 型 組 20 8.59±1.63＊ 15.39±3.54＊ 2.87±0.37＊ 42.49±4.81辛 伐 他 汀 組 20 6.42±0.84▲ 13.75±2.66▲ 1.81±0.24▲ 42.86±5.44參七合劑(低)組 20 6.51±0.49▲ 12.60±2.58▲ 1.69±0.11▲ 43.17±4.74參七合劑(中)組 20 6.37±0.50▲ 12.88±2.41▲ 1.74±0.16▲ 42.22±3.80參七合劑(高)組 20 5.42±0.72▲★ 11.66±3.68▲★ 1.31±0.21▲★

3.5 參七合劑對高脂血癥大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響

表5圖1顯示，對照組大鼠肝細(xì)胞索排列整齊，肝細(xì)胞無濁腫、脂肪變性、壞死及明顯炎細(xì)胞浸潤，肝組織無任何病變。模型組大鼠肝細(xì)胞明顯腫脹，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡，將細(xì)胞核擠向一邊，脂變細(xì)胞體積增大，肝竇受壓變窄，細(xì)胞索排列紊亂。辛伐他汀組、參七合劑低、中、高劑量組所有大鼠的肝細(xì)胞都存在不同程度的脂肪樣變性。按照非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)(草案)［5］:“0級:肝細(xì)胞無脂變、無炎細(xì)胞浸潤;Ⅰ級:肝細(xì)胞脂變數(shù)＜1/3;Ⅱ級:肝細(xì)胞脂變數(shù)1/3～1/2;Ⅲ級:肝細(xì)胞脂變數(shù)1/2～2/3;Ⅳ級:肝細(xì)胞脂變數(shù)＞2/3，模型組SD大鼠肝臟脂肪樣變性以Ⅲ、Ⅳ級為主，辛伐他汀組以Ⅱ、Ⅲ級為主，參七合劑低、中劑量組以Ⅰ、Ⅱ級為主，高劑量組以Ⅱ、Ⅲ級為主。

4 討論

血脂異常對健康的損害主要在心血管系統(tǒng)，TG、LDL-C升高是主要致病危險因素。apoAⅠ和apoB分別是高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的載脂蛋白，反映血液中HDL和LDL的水平，并與之呈正相關(guān)［6］。apoAⅠ在膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮重要作用，HDL可將膽固醇送到肝臟分解，抑制細(xì)胞攝入LDL，HDL水平增高有利于外周組織清除膽固醇［7］。apoAⅠ和HDL-C下降是導(dǎo)致高脂血癥的危險因子［8］。apoB能介導(dǎo)LDL-C與相應(yīng)受體結(jié)合，促進(jìn)肝臟和外周組織攝取膽固醇，其升高是導(dǎo)致冠心病最重要的危險因素。血漿黏度的高低主要與所含的各種蛋白質(zhì)、糖類、脂類等高分子物質(zhì)含量有關(guān)，其中蛋白質(zhì)對血漿黏度影響最大［9］，高脂血癥可引起全血黏度與血漿黏度值的升高［10］。

參七合劑源于湖南省名老中醫(yī)劉新祥教授的經(jīng)驗方，具有益氣養(yǎng)血、活血化瘀的功效。西洋參所含西洋參莖葉皂苷、人參皂苷能糾正高脂血癥脂蛋白-膽固醇代謝紊亂，對胰脂肪酶活性均有很強(qiáng)的抑制作用［11］;何首烏能增加低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達(dá)，提高機(jī)體運(yùn)轉(zhuǎn)和清除膽固醇的能力，降低血脂水平［11］;三七在消化道內(nèi)同脂類結(jié)合形成不易吸收的物質(zhì)，防止脂質(zhì)在血管內(nèi)沉積，能降低血小板表面活性，抑制血小板黏附和聚集，降低全血黏度和血漿黏度［11］806-861;何首烏、三七提取物能夠降低膽固醇和甘油三酯［12］。前期研究［2］表明，自制高脂飼料能建立穩(wěn)定的高脂血癥大鼠模型，參七合劑對高脂血癥大鼠有較好的降脂作用。

表5 參七合劑對高脂血癥大鼠肝細(xì)胞脂肪樣變性的影響

圖1 參七合劑對高脂血癥大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響(HE染色 ×200)

本研究結(jié)果表明，參七合劑和辛伐他汀均能降低apoB、TC、TG、LDL-C，升高apoAⅠ、HDL-C，減輕大鼠肝細(xì)胞脂肪變性，同時能改變?nèi)咔叙ざ群偷颓叙ざ?、血漿黏度，降低血液黏度。與辛伐他汀比較，參七合劑低、中劑量降低apoB、LDL-C和TC，升高apoAⅠ和HDL-C，減輕肝細(xì)胞脂肪變性有顯著差異，而高劑量僅在降低全血黏度及血漿黏度上有顯著差異;對apoAⅠ、apoB、TC、LDL-C、HDL-C及肝細(xì)胞脂肪變性的影響，參七合劑低、中劑量與高劑量有顯著差異。上述結(jié)果表明，參七合劑對血脂水平、apoAⅠ及apoB含量、血液流變學(xué)指標(biāo)和肝細(xì)胞脂肪變性的影響，與其劑量存在著一定的量效關(guān)系。至于參七合劑高劑量組的降脂效果反而不如低、中劑量組以及參七合劑對血脂水平、apoAⅠ、apoB等的影響是否同樣存在量效關(guān)系，有待下一步探討。與前期研究［2］比較，動物給藥時間改變后，藥物的降脂效應(yīng)出現(xiàn)了明顯的差異，說明降脂藥的使用效果與服藥時間有密切關(guān)系。HDL-C的增加能消除體內(nèi)過多的LDL含量，其表面的apoAⅠ能激活卵磷脂-膽固醇酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)，促使催化膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懝檀贾?，繼而轉(zhuǎn)化為膽汁酸，或直接從膽汁中排出體外［13］。apoB是LDL的主要apo，而LDL的主要功能是將肝臟的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到全身，apoB的增高使LDL在血液中的滯留時間延長。apoB、LDL-C的含量下降，可有效降低全血黏度。因此，apoAⅠ、HDL的升高和apoB、LDL的降低能有效降低血液TC、TG的含量及全血黏度，阻止肝細(xì)胞脂肪變性。

綜上所述，參七合劑能降低apoB、LDL-C，升高apoAⅠ、HDL-C，從而降低高脂血癥模型大鼠的血脂水平及血液黏度，減輕肝細(xì)胞脂肪變性，其主要機(jī)制可能是使含apoAⅠ的脂蛋白合成增加，使含apoB的脂蛋白合成減少、清除增加。

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Effect of Shen Qi Mixture on Apolipoprotein A I，B and Hemorheology in Hyperlipidemia Rats

JIANG Rui1，JIANG Hai-bin1△，LIU Bo-yan2，YANG Li-Jie1，JIN Juan1
(1.Deparment of Medical Staff Room，Changde Vocational Technical College，Hunan Changde，415000，China; 2.The First Chinese Medicine Clinical College，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，410208，China)

Objective:To observe the effect of Shenqi Mixture on apolipoprotein(apo)AⅠ，B and hemorheology indexes in hyperlipidemia rats，investigate lipid-lowering mechanism of Shenqi Mixture.Methods:120 SD rats were randomly divided into control group(20)and model group(100).Establed stale hyperlipidemia SD rats models by feeding on high-fat diet.Model rats were stretified on lipid level and randomly divided into model group，Shenqi Mixture high，medium and low group，Simvastatin group.Every group had 20 rats.Tested apo AⅠ，apo B，total cholesterol(TC)，triglyceride (TG)，low-density lipoproteins(LDL-C)，high-density lipoproteins(HDL-C)，hemorheology indexes and observed pathological change of liver tissue on the 31thday.Results:The results of apo AⅠ，apo B，HDL-C，LDL-C，TC and the hepatocyte steatosis of Shenqi Mixture medium and low group have significant differences compared with Simvastatin group.Conclusion:Promoting increased synthesis of apo AⅠand decreased synthesis increased elimination of apo B may be one of the mechanisms of decreasing blood lipid level by Shenqi Mixture.

Shenqi mixture;Hyperlipidemia;Apo AⅠ，apo B;Hemorheology;Hepatocyte steatosis

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0781-04

2015-11-02

湖南省教育廳科技計劃項目(12C0969);常德市科技局科技計劃項目(2010BS02)

蔣 銳，女，副教授，醫(yī)學(xué)碩士，從事高脂血癥及婦科雜病的防治研究。