基于體內(nèi)過(guò)程的關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方配伍環(huán)境下血中移行成分分析＊

李先娜，鄒 迪，李冰冰，閆廣利，王美佳，劉志東，張愛(ài)華，孫 暉

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)方證代謝組學(xué)研究中心/國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥血清藥物化學(xué)重點(diǎn)研究室/中美中醫(yī)方證代謝組學(xué)技術(shù)合作中心 哈爾濱 150040）

基于體內(nèi)過(guò)程的關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方配伍環(huán)境下血中移行成分分析＊

李先娜，鄒 迪，李冰冰，閆廣利，王美佳，劉志東，張愛(ài)華，孫 暉＊＊

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)方證代謝組學(xué)研究中心/國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥血清藥物化學(xué)重點(diǎn)研究室/中美中醫(yī)方證代謝組學(xué)技術(shù)合作中心 哈爾濱 150040）

目的：本研究主要探討了關(guān)黃柏在特定配伍環(huán)境下血中移行成分與功效取向的相關(guān)性。方法：研究應(yīng)用UPLC-HD-MS/MS聯(lián)用技術(shù)建立關(guān)黃柏及知柏地黃丸等類(lèi)方口服給藥后大鼠血中移行成分分析方法。采用主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）闡明不同的方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏體內(nèi)成分表達(dá)的差異，探索與關(guān)黃柏功效顯著相關(guān)的潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。結(jié)果：關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方中出現(xiàn)了23個(gè)共有血中移行成分，OPLS-DA分析充分挖掘了7個(gè)與關(guān)黃柏退虛熱功效顯著相關(guān)的血中移行成分及6個(gè)與關(guān)黃柏清熱燥濕功效顯著相關(guān)的血中移行成分。結(jié)論：本研究首次建立關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方中體內(nèi)成分分析方法，初步闡明了關(guān)黃柏在類(lèi)方中的配伍規(guī)律及其發(fā)揮退虛熱及清熱燥濕功效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

關(guān)黃柏 清熱燥濕 退虛熱 血中移行成分 藥效物質(zhì)基礎(chǔ) 中藥血清藥物化學(xué)

中藥方劑配伍規(guī)律研究是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的重要組成部分，研究表明中藥的有效成分需要在特定的配伍環(huán)境下才能形成相對(duì)穩(wěn)定的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[1-4]。黃柏為蕓香科植物黃樹(shù)皮Phellodendron chinense Schneid或黃檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥樹(shù)皮，前者習(xí)稱(chēng)“川黃柏”后者習(xí)稱(chēng)“關(guān)黃柏”，為臨床常用中藥材[5]。歷史上關(guān)黃柏在金元之后為黃柏的道地藥材，其清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱功效得到深入發(fā)揮?！侗静菅芰x補(bǔ)遺》中記載：“（黃柏）得知母滋陰降火，得蒼術(shù)除濕清熱”。關(guān)黃柏配伍知母組成的療本滋腎丸是關(guān)黃柏退虛熱代表方劑之一，主治腎虛目眩。滋腎丸在療本滋腎丸方劑組成基礎(chǔ)上加以少量肉桂，主治腎虛蒸熱、腳膝無(wú)力、陰痿陰汗等。大補(bǔ)陰丸由黃柏、知母、熟地黃、醋龜板和豬脊髓配伍組成，主治水虧火炎、耳鳴耳聾、咳逆虛熱。知柏地黃丸由知母、熟地黃、黃柏、山茱萸（制）、山藥、牡丹皮、茯苓和澤瀉配伍組成，主治陰虛火旺、口干咽痛等癥。從療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸和知柏地黃丸的方劑組成可以看出，關(guān)黃柏與知母相互配伍后其退虛熱功效才得以有效發(fā)揮。二妙丸由黃柏與蒼術(shù)配伍組成，主治濕熱下注、陰囊濕癢等癥。三妙丸在二妙丸方劑組成基礎(chǔ)上配伍牛膝，主治濕熱下注所致的麻痹，癥見(jiàn)下肢沉重、小便黃少等。四妙丸在三妙丸基礎(chǔ)上配伍薏苡仁，側(cè)重于治療濕熱下注所致的痹癥，癥見(jiàn)足膝紅腫、筋骨疼痛等。關(guān)黃柏在二妙丸、三妙丸和四妙丸等類(lèi)方中均發(fā)揮清熱燥濕功效。

文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)黃柏中有效成分主要為生物堿類(lèi)、檸檬苦素類(lèi)、黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)等成分，如：小檗堿（Berberine）、藥根堿（Jatrorrhizine）、黃柏內(nèi)酯（Obaculactone）、黃柏酮（Obacunone）等[6-10]。為了更好地闡釋關(guān)黃柏系列類(lèi)方配伍的科學(xué)內(nèi)涵，本研究基于中藥血清藥物化學(xué)理論與研究方法，選取有關(guān)關(guān)黃柏發(fā)揮清熱燥濕功效的代表類(lèi)方二妙丸、三妙丸、四妙丸，選其退虛熱功效的代表類(lèi)方療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸和知柏地黃丸[11-15]。通過(guò)對(duì)不同配伍環(huán)境下關(guān)黃柏血中移行成分的變化進(jìn)行分析，探究關(guān)黃柏在類(lèi)方中的配伍規(guī)律及其發(fā)揮不同功效的體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

Waters AcquityTMUPLC液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；Waters SynaptTM High Definition MS (HDMS/MS) System質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司），配備電噴霧離子源（ESI源）；MassLynx V4.1工作站（美國(guó)Waters公司）；Thermo Sorvall ST 16R低溫超高速離心機(jī)（美國(guó)Thermo公司）；Nichipet EX微量取樣器（日本NICHIRYO公司）；PB1501-N型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

雄性Wistar大鼠（清潔級(jí)），體質(zhì)量250±10 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK黑2013012。知母（鹽炒）Anemarrhena asphodeloides Bge、熟地黃Rehmannia glutinosa Libosch、山茱萸Corous officinalis Sieb.et Zucc、牡丹皮Paeonia suffruticosa Andr、山藥Dioscorea opposita Thunb、茯苓Poria cocos Wolf、澤瀉Alisma orientalis Juzep、肉桂Cinnamomum cassia Presl、醋龜甲Chinemys reevesii Gray、蒼術(shù)Rhizoma Atractylodis、牛膝Radix Achyranthis Bidentatae、薏苡仁Semen Coicis（北京同仁堂哈爾濱藥店）、黃柏（鹽炒）Phellodendron amurense Rupr.（哈爾濱世一堂藥店），以上藥材購(gòu)自北京同仁堂藥店哈爾濱分店及哈爾濱世一堂藥店，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室王喜軍教授鑒定為正品。乙腈（色譜級(jí)，德國(guó)Merck公司）；甲酸（色譜級(jí)，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（分析級(jí)，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；亮氨酸腦啡肽（美國(guó)Sigma公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

雄性Wistar大鼠（清潔級(jí)）于實(shí)驗(yàn)前禁食16 h（不禁水），置于飼養(yǎng)溫度24±3℃，濕度65%-75%的環(huán)境中，禁食前自由攝食飲水。按照體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、關(guān)黃柏組、療本滋腎丸組、滋腎丸組、大補(bǔ)陰丸組、知柏地黃丸組、二妙丸組、三妙丸組、四妙丸組，每組各3只。稱(chēng)取關(guān)黃柏、療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、二妙丸、三妙丸、四妙丸超微粉超微粉適量，加適量0.5%的CMC-Na溶液溶解，并超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，制成濃度分別為0.081、0.162、0.165、0.567、0.162、0.243、0.243 g·mL-1的灌胃溶液，含鹽關(guān)黃柏的濃度均為0.081 g·mL-1。中藥治療各組大鼠以10 mL·kg-1的劑量給予灌胃藥液，空白組大鼠給予等體積CMC-Na溶液。給藥后60 min用3%戊巴比妥鈉0.3 mL/100 g腹腔注射麻醉，經(jīng)肝門(mén)靜脈取血。

1.3 樣品制備

1.3.1 體外供試品溶液制備

按原方配比精密稱(chēng)定關(guān)黃柏、療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、知柏地黃丸、二妙丸、三妙丸、四妙丸超微粉適量置具塞錐形瓶中，各方劑關(guān)黃柏含量為0.25 g，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，降至10-30℃，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量、搖勻，取上清液過(guò)0.22 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即為負(fù)離子模式下的供試品溶液。另取濾液10 mL，加甲醇稀釋16倍，取上清液過(guò)0.22 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即為正離子模式下的供試品溶液。

1.3.2 血清樣品的制備

血液樣品在4 000 r·min-1的條件下離心15 min。取上清液2 mL，精密加入40 μL磷酸，超聲處理1 min，渦旋混勻30 s后上樣到預(yù)先以2 mL甲醇、2 mL水活化平衡好的HLB固相萃取小柱上，以2 mL水淋洗，淋洗液棄去，再以2 mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，40℃下氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)?50 μL 60%甲醇溶解，在4℃、13 000 rpm條件下離心15 min，取上清液供UPLC-HD-MS/MS分析。

1.4 數(shù)據(jù)采集

血清樣品預(yù)處理后經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，取上清液供UPLC-HD-MS/MS分析。色譜條件Waters ACQUITY UPLCTMHSS T3色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫條件：0-1.5 min，2%-16% A；1.5-8 min，16%-20%A；8-11 min，27%-30% A；11-15 min， 30%-70%A；15-20 min，70%-99%A；流速0.2 mL·min-1；柱溫30℃；樣品室溫度4℃；進(jìn)樣量5 μL。 質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI），正、負(fù)離子（ESI+、ESI-）兩種模式采集數(shù)據(jù)。正離子模式質(zhì)譜條件：毛細(xì)管電壓：3 000 V；錐孔采樣電壓：30 V；錐孔提取電壓：3.0 V；去溶劑氣溫度：350℃；去溶劑氣流量：600 L·h-1；錐孔氣流量：50 L·h-1；離子源溫度：110℃。負(fù)離子模式質(zhì)譜條件：毛細(xì)管電壓：2 800 V；錐孔采樣電壓：40 V；錐孔提取電壓：2.0 V；去溶劑氣溫度：350℃；去溶劑氣流量：600 L·h-1；錐孔氣流量：50 L·h-1；離子源溫度：110℃。掃描方式為全掃描，質(zhì)量數(shù)據(jù)采集范圍：m/z 50-1 300 Da；亮氨酸-腦啡肽溶液（Leucine-Enkephalin）為質(zhì)量鎖定溶液。

1.5 血中移行成分鑒定

利用Waters Masslynx軟件提供的Strip背景扣除工具，以空白血清圖譜為對(duì)照，對(duì)含藥血清UPLCHD-MS圖譜進(jìn)行背景扣除，剔除大部分干擾峰，再進(jìn)行直觀(guān)的峰比對(duì)，通過(guò)與關(guān)黃柏藥材體內(nèi)外成分色譜峰進(jìn)行比對(duì)，確定關(guān)黃柏血中移行成分峰。采集UPLC-HD-MS/MS色譜圖，對(duì)二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的解析進(jìn)行峰的鑒定，比較含藥血清與體外樣品的色譜圖，篩選相同的化合物峰，即為吸收入血的原型成分，在體外樣品色譜圖中沒(méi)有被檢測(cè)的化合物色譜峰則為代謝產(chǎn)物，最后對(duì)關(guān)黃柏在各個(gè)類(lèi)方中體內(nèi)化學(xué)成分的數(shù)與量的變化及其規(guī)律進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 UPLC-HDMS圖譜采集

空白組血清與關(guān)黃柏、療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、知柏地黃丸、二妙丸、三妙丸、四妙丸含藥血清總離子流典型圖譜見(jiàn)圖1。

2.2 血中移行成分鑒定

采用UPLC-HD-MS/MS技術(shù)平臺(tái)及MassLynx分析軟件中背景扣除技術(shù)（Strip）對(duì)關(guān)黃柏及知柏地黃丸等類(lèi)方血中移行成分進(jìn)行分析，用含藥血清總離子流圖扣除空白血清總離子流圖，減少干擾，扣除后的總離子流圖再與空白血清總離子流圖直觀(guān)對(duì)比，鑒定關(guān)黃柏及知柏地黃丸等類(lèi)方原型入血成分及體內(nèi)代謝產(chǎn)物（見(jiàn)表1）。

2.3 知柏地黃丸等方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏血中移行成分變化分析

通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，關(guān)黃柏經(jīng)過(guò)配伍后在不同方劑血中移行成分在體內(nèi)情況各不相同（見(jiàn)表2），其中M13（三棱酸葡萄糖醛酸結(jié)合物）為關(guān)黃柏配伍知母后選擇性吸收入血成分，γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ和吳茱萸苦素僅在關(guān)黃柏退虛熱功效方劑療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸和知柏地黃丸中選擇性吸收入血，M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）為關(guān)黃柏通過(guò)配伍蒼術(shù)組成清熱燥濕功效方劑二妙丸、三妙丸、四妙丸后特有關(guān)黃柏體內(nèi)代謝物。推測(cè)關(guān)黃柏發(fā)揮退虛熱功效特有的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ和吳茱萸苦素，發(fā)揮清熱燥濕功效特有的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）。

2.4 知柏地黃丸等方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏配伍規(guī)律研究

結(jié)果顯示關(guān)黃柏血中移行成分多數(shù)都在知柏地黃丸等方劑配伍環(huán)境下存在，僅有γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ、吳茱萸苦素、M13（三棱酸葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）等成分在兩類(lèi)方劑中有選擇性吸收，難以解析類(lèi)方配伍對(duì)中藥成分在體內(nèi)直接作用物質(zhì)的影響。為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其差異，利用多變量統(tǒng)計(jì)分析方法的主成分分析法（PCA）對(duì)血中移行成分在各方劑配伍環(huán)境下的表達(dá)水平進(jìn)行了無(wú)歧視的聚類(lèi)分析，觀(guān)察在各方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏化學(xué)成分在體內(nèi)整體表達(dá)水平（見(jiàn)圖2）。結(jié)果顯示各組樣品能明顯聚為滋腎丸組、療本滋腎丸組、大補(bǔ)陰丸組、知柏地黃丸組、二妙丸組、三妙丸組、四妙丸組，表明關(guān)黃柏在不同方劑配伍環(huán)境下體內(nèi)整體表達(dá)水平發(fā)生改變，同時(shí)可以看到二妙丸組、三妙丸組、四妙丸組又可以聚為一個(gè)大組，滋腎丸組、療本滋腎丸組、大補(bǔ)陰丸組、知柏地黃丸組另可以聚為一個(gè)大組，表明關(guān)黃柏成分在發(fā)揮同一功效時(shí)會(huì)有相同的體內(nèi)表達(dá)成分。

將二妙丸、三妙丸、四妙丸歸為清熱燥濕功效組，療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、知柏地黃丸歸為退虛熱功效組，運(yùn)用OPLS-DA分析兩類(lèi)方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏血中移行成分表達(dá)水平的差異，尋找與關(guān)黃柏在類(lèi)方中發(fā)揮清熱燥濕和退虛熱功效相關(guān)的血中移行成分。OPLS-DA分析的得分圖見(jiàn)圖3，圖中兩組樣品明顯分為兩類(lèi)，進(jìn)一步在S-plot圖的兩側(cè)選擇對(duì)各組貢獻(xiàn)較大的成分。篩選出關(guān)黃柏退虛熱功效方劑7個(gè)高表達(dá)血中移行成分，包括γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ、吳茱萸苦素、未知（C29H38NO12）、蝙蝠葛堿、木蘭堿、四氫巴馬汀、黃柏堿，清熱燥濕功效6個(gè)高表達(dá)血中移行成分，包括M1（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M2（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M12（黃柏內(nèi)酯還原產(chǎn)物）、M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）、三棱酸、3-O-阿魏?？鼘幩?，差異性成分在各組中的表達(dá)水平見(jiàn)圖4。

圖1 空白血清與關(guān)黃柏、療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、知柏地黃丸、二妙丸、三妙丸、四妙丸含藥血清總離子流圖

表1 關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方配伍環(huán)境下血中移行成分鑒定

表2 關(guān)黃柏在知柏地黃丸配伍環(huán)境下血中移行成分變化

圖2 方劑配伍環(huán)境下關(guān)黃柏血中移行成分的多變量數(shù)據(jù)分析

圖3 知柏地黃丸等類(lèi)方配伍環(huán)境下關(guān)黃柏血中移行成分體內(nèi)表達(dá)水平OPLS-DA分析

3 結(jié)論

圖4 OPLS-DA分析篩選的差異血中移行成分趨勢(shì)圖

中藥的多重功效是在配伍成方的過(guò)程中和方劑運(yùn)用的基礎(chǔ)上逐步深化形成的，多味中藥按照七情和合、君臣佐使的組方原則相互配伍組成方劑，可以調(diào)節(jié)其偏性、制其毒性、改變其原有功效[16]。本研究基于中藥血清藥物化學(xué)理論與研究方法[17-20]，應(yīng)用UPLC-HD-MS/MS技術(shù)及Masslynx數(shù)據(jù)處理技術(shù)，選用關(guān)黃柏退虛熱代表類(lèi)方——療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸、知柏地黃丸，及清熱燥濕代表類(lèi)方——二妙丸、三妙丸、四妙丸，通過(guò)對(duì)關(guān)黃柏在知柏地黃丸等類(lèi)方配伍環(huán)境下血中移行成分進(jìn)行分析，初步闡明關(guān)黃柏發(fā)揮不同功效的體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究首次建立了關(guān)黃柏及其知柏地黃丸等類(lèi)方中體內(nèi)成分分析方法，結(jié)果表明不同配伍環(huán)境下關(guān)黃柏30個(gè)血中移行成分在體內(nèi)吸收各不相同，其中M12、M13、M14、蝙蝠葛堿、吳茱萸苦素、γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ、3-O-阿魏?？鼘幩嵩诓煌絼┲羞x擇性吸收。通過(guò)對(duì)口服關(guān)黃柏及大補(bǔ)陰丸等方劑后大鼠肝門(mén)靜脈血液進(jìn)行采集，在避免肝藥酶等因素影響下全面考察關(guān)黃柏在不同方劑配伍環(huán)境下選擇性吸收入血的原型成分及其代謝物。結(jié)果顯示關(guān)黃柏在配伍知母和蒼術(shù)所組成的類(lèi)方中，藥物在體內(nèi)相互作用產(chǎn)生特有代謝產(chǎn)物，如：小檗堿、木蘭堿、藥根堿、巴馬汀、罌粟堿、黃柏內(nèi)酯等成分在體內(nèi)產(chǎn)生葡萄糖醛酸結(jié)合代謝物，其中M13（三棱酸葡萄糖醛酸結(jié)合物）為關(guān)黃柏配伍知母后在體內(nèi)選擇性吸收的代謝產(chǎn)物，M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）為關(guān)黃柏配伍蒼術(shù)后所產(chǎn)生的特有代謝產(chǎn)物，M1（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M2（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）和M12（黃柏內(nèi)酯還原產(chǎn)物）為關(guān)黃柏在清熱燥濕類(lèi)方中體內(nèi)高表達(dá)藥物代謝產(chǎn)物。PCA結(jié)果顯示關(guān)黃柏血中移行成分的整體表達(dá)水平與方劑配伍具有顯著相關(guān)性。因此，關(guān)黃柏在二妙丸、三妙丸、四妙丸中發(fā)揮清熱燥濕功效，而在療本滋腎丸、滋腎丸、大補(bǔ)陰丸及知柏地黃丸中發(fā)揮退虛熱功效，功效取向不同是關(guān)黃柏血中移行成分整體表達(dá)的結(jié)果，而不是與特定某個(gè)成分產(chǎn)生藥理作用的結(jié)果。OPLS-DA分析充分挖掘了與關(guān)黃柏清熱燥濕功效和退虛熱功效顯著相關(guān)的13個(gè)潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，即關(guān)黃柏發(fā)揮清熱燥濕功效的6個(gè)潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為M1（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M2（去羥甲基罌粟堿葡萄糖醛酸結(jié)合物）、M12（黃柏內(nèi)酯還原產(chǎn)物）、M14（黃柏內(nèi)酯A/B葡萄糖醛酸結(jié)合物）、三棱酸、3-O-阿魏?？鼘幩?，及關(guān)黃柏發(fā)揮退虛熱功效的7個(gè)潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)γ-羥基丁烯酸內(nèi)酯Ⅱ、吳茱萸苦素、未知（C29H38NO12）、蝙蝠葛堿、木蘭堿、四氫巴馬汀、黃柏堿。本部分實(shí)驗(yàn)闡明了關(guān)黃柏發(fā)揮退虛熱和清熱燥濕功效的體內(nèi)潛在藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為關(guān)黃柏的深入研究提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，同時(shí)為中藥現(xiàn)代化研究提供新的研究思路與方法。

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14 李先娜.關(guān)黃柏在大補(bǔ)陰丸等類(lèi)方中體內(nèi)成分分析.哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文,2014:6-8.

15 鄒迪.二妙丸等含黃柏類(lèi)方體內(nèi)成分分析. 哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文,2014:7-11.

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20 Sun H, Liu J, Zhang A, et al. Characterization of the multiple components of Acanthopanax Senticosus stem by ultra high performance liquid chromatography with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry. J Sep Sci, 2016, 39(3): 496-502.

Serum Contituents Analysis of Phellodendron Amurense Rupr. Based on Zhi Bai Di Huang Wan and Its Formula Series

Li Xianna, Zou Di, Li Bingbing, Yan Guangli, Wang Meijia, Liu Zhidong, Zhang Aihua, Sun Hui
(Research Center of Chinmedomics-State Administration of TCM-Laboratory of Metabolomics / National TCM Key Laboratory of Serum Pharmacochemistry / Sino-US Chinmedomics Technology Cooperation Center, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

This study aimed at comparing and analyzing the serum constituents of Phellodendron amurense Rupr. (GHB) in Zhi Bai Di Huang Wan (ZBDHW) and its formula series, and then investigating the correlation between serum constituents and effect trend of GHB. Based on the theory of serum pharmacochemistry in traditional Chinese medicine (TCM), UPLC-HD-MS/MS technique was adopted to analyze the serum components of GHB and their metabolites involved in ZBDHW and its formula series. Principal component analysis (PCA) was performed for the further comparative analysis of the contents of serum constituents of GHB from different formulas. Moreover, by means of orthogonal partial least-squares discriminant analysis (OPLS-DA), the research was carried out on potential efficacy substances which were significantly related to the curative effect of GHB in different compatibility laws. As a result, 28 serum constituents were in aggregate detected in GHB, ZBDHW and its formula series. 13 high expression serum constituents were found out using OPLS-DA analysis with the significant correlation of GHB playing the roles of clearing away heat and drying dampness and reducing asthenia heat, among which 7 serum constituents related to the reduction of asthenia heat, while 6 serum constituents concerned the functions of clearing away heat and drying dampness. It was concluded that the research was preliminarily expounded the compatibility law and the efficacy constituents in different formulas involving GHB.

Phellodendron amurense Rupr., clear away heat and dry dampness, reduce asthenia heat, serum constituents, efficacy substance, serum pharmacochemistry of traditional Chinese medicine

10.11842/wst.2016.10.012

R285

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2016-09-19

修回日期：2016-09-26

＊ 國(guó)家自然科學(xué)基金委面上項(xiàng)目（81173500）：基于知柏地黃丸配伍環(huán)境的關(guān)黃柏治療腎陰虛相火亢盛的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究；負(fù)責(zé)人：孫暉。

＊＊ 通訊作者：孫暉，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究、中藥及天然藥物體內(nèi)過(guò)程的研究。