煙草種子油的毒理學(xué)評(píng)價(jià)

蘇　 彬，傅　 泳，侯小東，張超英，梁 惠，*（. 青 島大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，山東 青島 660；. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所，山東　 青島　 6600）

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煙草種子油的毒理學(xué)評(píng)價(jià)

蘇 彬1，傅 泳1，侯小東2，張超英1，梁 惠1，*
（1. 青 島大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，山東 青島 266021；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所，山東 青島 266100）

【摘要】目的： 研究煙草種子油的毒理學(xué)安全性。方法：參照衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，采用急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)，檢測(cè)煙草種子油有無急性毒性作用；采用Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)3項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)，檢測(cè)煙草種子油有無致突變作用；采用30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)檢測(cè)煙草種子油亞慢性毒性。結(jié)果：小鼠14 d內(nèi)未見中毒和死亡現(xiàn)象，即煙草種子油對(duì)小鼠的半數(shù)致死劑量(LD50)>21 500 mg/kg；Ames試驗(yàn)中煙草種子油各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)2倍，亦無劑量-效應(yīng)關(guān)系，4株試驗(yàn)菌株，在加與不加S9時(shí)，均未呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果；小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)中煙草種子油各劑量組小鼠的微核率在正常范圍內(nèi)，與陰性對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均>0.05)；小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組染色體畸變率明顯大于陰性對(duì)照組，煙草種子油各劑量組的染色體畸變率與陰性對(duì)照組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；30 d喂養(yǎng)結(jié)束后，未見試驗(yàn)動(dòng)物有中毒及死亡狀況，煙草種子油各劑量組的體質(zhì)量、食物利用率、臟體比、血常規(guī)及血液生化指標(biāo)與空白對(duì)照組相比均在正常范圍內(nèi)(P>0.05)；病理組織學(xué)檢查除煙草種子油高劑量組部分肝組織中見少量脂肪空泡外，各組大鼠主要臟器未見明顯病理學(xué)改變。結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，煙草種子油未見明顯的急性毒性，無致突變作用及亞慢性毒性作用。

【關(guān)鍵詞】煙草種子油；安全性；急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)；遺傳試驗(yàn)；致突變；30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

作者信息： 蘇 彬，E-mail：948292544@qq.com。*通信作者，梁 惠，E-mail：qdlianghui@126.com

Toxicity evaluation of tobacco seed oil

SU Bin1，F(xiàn)U Yong1，HOU Xiaodong2，ZHANG Chaoying1，LIANG Hui1，*
(1. School of Public Health, Qingdao University, Qingdao 266021; 2. Tobacco Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Qingdao 266100, Shandong, China)

【ABSTRACT】OBJECTIVE: To evaluate the toxicity and safety of tobacco seed oil in mice. METHODS：Mice were orally exposed to tobacco seed oil for 14 and 30 days according to Care Food Inspection and Evaluation of Technical Specifications. Three genetic toxicology tests were used to evaluate mutagenic effects. In addition thirty day feeding test was conducted to detect sub-chronic toxicity. RESULTS：There was no evidence of toxicity or death in mice within 14 day，which indicated the median lethal dose (LD50) was more than 21 500 mg/kg. In the Ames test，the revertant colonies numbers in each dose group were two times less than the numbers of spontaneous revertant colonies，and no doseresponse relationship occurred. Four bacterial strains did not show positive results with or without S9 activation. In the mouse bone marrow cell micronucleus test，the rates from the exposed groups were similar to that of the negative control group (P>0.05). In the mouse bone marrow cell chromosome aberration test，the rates from the exposed groups were no significantly difference with the negative control group. After feeding for 30 days，there was no poisoning and death in the exposed mice. There was no significant difference from the control group in body weight，food utilization，organ-body ratios，and blood biochemical indexes. Histopathologic examination showed that fat vacuoles were observed in the liver tissue of high-dose group，but the other main organs of mice in the other groups had no pathological changes. CONCLUSION：Tobacco seed oil was non-toxic and did not show potentially mutagenic effects and sub-chronic toxicity within the text d oses.

【KEY W ORDS】tobacco s eed o il；safety；acute t oxicity t est；genetic t oxicity t est；mutagenesis；30 d ays f eeding t est

煙草種子油從煙草種子中提取，其含油量為35.9%～42.0%，平均為39.4%，不同類型不同品種變異不大。煙草種子油中脂肪酸含量較高，主要飽和脂肪酸為棕櫚酸、硬脂酸，不飽和脂肪酸為油酸、亞油酸、亞麻酸。不飽和脂肪酸含量77.1%～82.5%，亞油酸含量最高，平均為71.6%，是橄欖油的4～5倍。其主要成分不飽和脂肪酸是人體不能自身合成的，它們一方面可以促進(jìn)膽固醇的代謝，降低血液中低密度脂蛋白膽固醇和血總膽固醇[1]；另一方面可以軟化血管，維持毛細(xì)血管的健康，從而預(yù)防和治療高血壓、動(dòng)脈硬化等心腦血管疾病。因此對(duì)煙草種子油的急性毒性、遺傳毒性等方面進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，為后期煙草種子油的開發(fā)利用提供安全性保障至關(guān)重要。目前，關(guān)于煙草種子油的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中華人民共和國(guó)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，通過大鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)及30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)[2-3]，對(duì)其進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)，為其以后的研究開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 受試物 煙草種子油由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所提供，為淡黃色油狀物，貯存于干燥、密封處。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與環(huán)境 昆明種小鼠120只，SD大鼠80 只(許可證號(hào)為SCXK魯20130001)，雌雄各半，飼料及動(dòng)物均購(gòu)自山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室條件為SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，濕度40%～70%，溫度20～24℃。在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)所飼養(yǎng)3 d 以適應(yīng)環(huán)境。

1.1.3 試驗(yàn)菌株 組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102，經(jīng)鑒定符合試驗(yàn)要求。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 采用霍恩氏法，選用健康昆明種小鼠20只，體質(zhì)量20～25 g，按完全隨機(jī)化的方法，將小鼠分為4組，每組5只，給予基礎(chǔ)飼料、水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，確定其為健康小鼠。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定正式試驗(yàn)的劑量分別為2.15、4.64、10.00、21.50 g/kg。分別對(duì)各組小鼠進(jìn)行灌胃，一次性給予受試物，并觀察小鼠灌胃后的狀況，連續(xù)觀察14 d，記錄中毒和死亡情況。

1.2.2 Ames試驗(yàn) 采用組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102共4個(gè)試驗(yàn)菌株。代謝活化系統(tǒng)為多氯聯(lián)苯(polychlorodiphenyls， PCBs)誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿S9液。試驗(yàn)設(shè)8、40、200、1 000、5 000 μg/皿5個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組做3個(gè)平行皿，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照(雙蒸水)、二甲基亞砜(dimethyl s ulfoxide，DMSO)對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組(陽(yáng)性對(duì)照物為敵克松，疊氮鈉，2-氨基芴，1，8-二羥蒽醌)。稱取樣品1.25 g，用DMSO溶解并定容至25 mL，混勻，0.055 Mpa壓力下滅菌20 min，4 ℃存放備用。臨用前將以上溶液按1∶4依次用DMSO稀釋成以下濃度：50 000 μg/mL(原液)、10 000、2 000、400、80 μg/mL。采用標(biāo)準(zhǔn)平皿滲入法，每個(gè)受試濃度做3個(gè)平行皿。在頂層瓊脂中加入0.1 mL試驗(yàn)菌液、0.1 mL受試樣品溶液(溶劑對(duì)照加入0.1 mL滅菌DMSO)和0.5 mL S9混合液(當(dāng)需要代謝活化時(shí))，混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。37 ℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)，重復(fù)2次。

1.2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 選用體質(zhì)量在25～30 g健康昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即生理鹽水陰性對(duì)照組(10 g/kg)，煙草種子油低、中、高劑量組(分別為2.5、5、10 g/kg)和環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40 mg/kg)，每組雌雄各5只。采用30 h給予受試物法，即2次給受試物間隔24 h，第2次給受試物6 h后，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取股骨，用生理鹽水沖洗骨髓腔，將懸液1 500 r/min，離心10 min后，制成細(xì)胞懸液涂片，自然干燥后放入甲醇中固定10 min，再放入Giemsa應(yīng)用液中，染色5 min后，用蒸餾水沖洗晾干，寫好標(biāo)簽，于陰涼干燥處保存后閱片。每只動(dòng)物觀察1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，計(jì)算微核率。

1.2.4 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 選用體質(zhì)量在25～30 g健康昆明種小鼠50只，動(dòng)物分組及各組處理方法同微核試驗(yàn)，于處死動(dòng)物前6 h按4 mg/kg注射秋水仙素，頸椎脫臼處死動(dòng)物。制備標(biāo)本，閱片。每只動(dòng)物分析100個(gè)中期相細(xì)胞，每個(gè)劑量組不少于1 000個(gè)中期相細(xì)胞，觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的改變。

1.2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn) 選用健康SD大鼠80只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組，煙草種子油低、中、高劑量組(分別為5、10、20 g/kg)，每組雌雄各10只[4]，每只大鼠單籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，采用飼喂給予受試物的方式，將煙草種子油摻入飼料中，攪拌機(jī)攪拌均勻，按體質(zhì)量的10%折算，將受試物劑量按每100 g體質(zhì)量攝入的量折算為飼料量，每只大鼠用苦味酸標(biāo)記，每天觀察進(jìn)食及活動(dòng)情況，每周稱取體質(zhì)量并記錄食物攝入量。30 d后，將大鼠用7%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血8～10 mL，取部分血樣3 500 r/min離心10 min留取血清，測(cè)定血常規(guī)及血液生化指標(biāo)；取完整肝臟、腎、脾、睪丸、卵巢及部分胃和小腸稱取質(zhì)量，分別切取1～2 mm3組織放入甲醛溶液中固定，制備肝臟、腎、脾、睪丸、卵巢、胃和小腸病理學(xué)切片，觀察有無病變。

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以表示，多組間比較采用方差分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

灌胃后14 d，各劑量組的小鼠均無明顯中毒癥狀及死亡表現(xiàn)，行為表現(xiàn)及進(jìn)食情況均正常，根據(jù)霍恩氏法判斷，LD50>21 500 mg/kg。按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，煙草種子油屬無毒級(jí)。

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 Ames試驗(yàn) 2次重復(fù)測(cè)試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。受試樣品各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)2倍，亦無劑量－效應(yīng)關(guān)系，對(duì)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102，在加與不加S9時(shí)，均未呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。

表1 煙草種子油對(duì)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102回變菌落數(shù)的影響

表1 煙草種子油對(duì)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102回變菌落數(shù)的影響

陽(yáng)性對(duì)照：TA97、TA98、TA102不加S9為敵克松50 μg/皿；TA100 不加S9為疊氮鈉2.5 μg/皿；TA97、TA98、TA100加S9為2-氨基芴10 μg/皿；TA102加S9為1，8-二羥蒽醌50 μg/皿.

組別　TA97　TA98　TA100　TA102 -S9　+S9　-S9　+S9　-S9　+S9　-S9　+S9煙草種子油 5 000 μg/皿　125±11　 137±12　33±3　38±4　143±10　 148±11　 251±22　 246±22 1 000 μg/皿　133±12　 129±14　30±3　36±4　137±15　 133±14　 247±26　 254±24 200 μg/皿　119±9　134±11　36±5　34±2　135±13　 140±10　 263±23　 249±22 40 μg/皿　126±13　 119±9　40±4　35±3　148±11　 139±12　 256±21　 260±24 8 μg/皿　141±14　 133±11　35±4　29±4　151±13　 142±16　 245±20　 252±25空白對(duì)照組　137±15　 126±10　32±3　37±4　145±12　 149±15　 243±24　 250±23溶劑對(duì)照組　128±12　 135±11　37±2　41±4　138±13　 145±14　 253±20　 259±19陽(yáng)性對(duì)照組　1 310±152　 1 585±220　 1 067±96　 1 454±124　 2 270±204　 1 638±201　 1 995±243　 1 423±152

2.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果見表2。雌、雄小鼠陰性對(duì)照組微核率分別為2.1‰±0.1‰、2.0‰±1.0‰，陽(yáng)性對(duì)照組微核率高達(dá)12.2‰±2.4‰、12.6‰±3.3‰，明顯高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，煙草種子油各劑量組小鼠的微核率與陰性對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2.3 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)結(jié)果見表3。陽(yáng)性對(duì)照組染色體畸變率明顯大于陰性對(duì)照組(P<0.05)。煙草種子油各劑量組的染色體畸變率與陰性對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 煙草種子油對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響

表2 煙草種子油對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響

與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05.

組別　　觀察細(xì)胞數(shù)(個(gè))微核細(xì)胞數(shù)(個(gè))　　微核率(‰)雄雌　雄　雌　雄　雌陰性對(duì)照組　5 000 5 000　 27　 23　 2.1±0.1　 2.0±1.0煙草種子油 10 g/kg 5 000 5 000　 35　 41　 2.4±1.1　 2.8±1.0 5 g/kg 5 000 5 000　 32　 31　 2.2±1.3　 2.2±0.8 2.5 g/kg 5 000 5 000　 22　 21　 1.9±0.8　 1.8±1.0陽(yáng)性對(duì)照組　5 000 5 000　 102　 109　 12.2±2.4*12.6±3.3*

表3 煙草種子油對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變率影響

表3 煙草種子油對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變率影響

c：染色體斷裂；d：粉碎；e：環(huán)狀染色體；f：易位；g：微小體. 與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05.

組別　　觀察細(xì)胞數(shù)　多倍體畸變　　染色體結(jié)構(gòu)畸形改變　　畸變細(xì)胞數(shù)　　畸變率(‰) cdefg陰性對(duì)照組　1 000　0　2　0　0　0　1　3　3煙草種子油 2.5 g/kg　 1 000　0　1　3　1　1　2　8　8 5 g/kg　 1 000　0　1　2　1　0　1　5　5 10 g/kg 　1 000　0　1　0　1　1　1　2　4陽(yáng)性對(duì)照組　1 000　2　13　5　2　6　10　38　38*

2.3 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.3.1 一般狀況 實(shí)驗(yàn)期間對(duì)照組和煙草種子油各劑量組大鼠生長(zhǎng)及行為狀態(tài)良好，各組大鼠均無中毒、死亡和其他異常癥狀。

2.3.2 煙草種子油對(duì)大鼠體質(zhì)量及食物利用率的影響 煙草種子油各劑量組雌、雄大鼠每周的體質(zhì)量與各自的對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，具體數(shù)據(jù)略)。表明煙草種子油對(duì)大鼠每周的體質(zhì)量無明顯影響。

煙草種子油對(duì)大鼠食物利用率的影響結(jié)果見表4。煙草種子油各劑量組大鼠的增重、總進(jìn)食量及食物利用率與同性別的對(duì)照組大鼠相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，從而表明其對(duì)大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育無明顯影響。

2.3.3 煙草種子油對(duì)大鼠臟體比的影響 煙草種子油對(duì)大鼠臟體比的影響結(jié)果見表5。煙草種子油各劑量組大鼠的主要臟器(肝、腎、脾、睪丸)質(zhì)量與對(duì)照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且均在正常范圍之內(nèi)。各劑量組大鼠主要臟器的臟體比與同性別對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。可認(rèn)為煙草種子油喂養(yǎng)30 d后大鼠的臟器無明顯改變。

2.3.4 煙草種子油對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響 煙草種子油對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響結(jié)果見表6和表7。煙草種子油喂養(yǎng)30 d后，各劑量組雌雄大鼠的血小板、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白均在正常值范圍之內(nèi)，且與對(duì)照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明煙草種子油對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)無顯著影響。

表4 煙草種子油對(duì)大鼠食物利用率的影響

表4 煙草種子油對(duì)大鼠食物利用率的影響

性別　　組別　　增重(g)　　總進(jìn)食量(g)食物利用率(%)雄　對(duì)照組　122.6±20.18 655.6±16.18　 18.7±2.74煙草種子油 2.5 g/kg 112.6±18.74 653.8±30.97　 17.1±2.12 5 g/kg 143.6±52.92 663.7±42.74　 21.3±6.82 10 g/kg 144.3±36.49 672.9±35.51　 21.4±4.42雌　對(duì)照組　120.6±21.91 633.5±31.46　 18.9±2.58煙草種子油 2.5 g/kg 103.1±28.06 599.8±64.52　 17.1±4.46 5 g/kg 105.4±35.55 607.9±85.29　 16.9±4.84 10 g/kg 135.6±13.28 639.6±28.25　 21.2±2.02

表5 煙草種子油對(duì)大鼠臟體比的影響

表5 煙草種子油對(duì)大鼠臟體比的影響

性別　　組別　　空腹體質(zhì)量(g)　　肝/體(%)　　腎/體(%)　　脾/體(%)　　睪丸/體(%)雄　　對(duì)照組　290.0±31.77　3.26±0.350　0.668±0.098　0.327±0.107　0.831±0.152煙草種子油 2.5 g/kg 　282.0±24.97　3.54±0.306　0.761±0.067　0.392±0.153　0.901±0.089 5 g/kg 　302.1±55.10　3.67±0.419　0.787±0.104　0.403±0.203　0.869±0.104 10 g/kg 　329.7±53.19　3.49±0.424　0.713±0.079　0.369±0.081　0.852±0.231雌　　對(duì)照組　254.5±25.67　3.92±0.161　0.734±0.087　0.402±0.202　-煙草種子油 2.5 g/kg 　245.3±34.83　3.88±0.308　0.799±0.079　0.298±0.084　-5 g/kg 　248.5±41.13　3.89±0.334　0.756±0.108　0.340±0.109　-10 g/kg　269.6±20.68　3.88±0.291　0.684±0.024　0.345±0.152　-

表6 煙草種子油對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

表6 煙草種子油對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

性別　　組別　　血小板　　紅細(xì)胞計(jì)數(shù)　　白細(xì)胞計(jì)數(shù)　　血紅蛋白雄　　對(duì)照組　653.8±211.1　8.12±0.47　14.54±6.16　149.8±7.5煙草種子油 2.5 g/kg 　730.5±286.3　7.47±0.60　19.40±9.27　142.6±9.4 5 g/kg 　872.2±194.5　8.05±0.85　 17.09±10.32　143.3±14.4 10 g/kg 　778.8±303.5　7.78±0.47　19.09±7.34　145.1±11.4雌　　對(duì)照組　871.9±166.4　7.24±0.36　15.17±9.92　135.9±7.82煙草種子油 2.5 g/kg 　957.9±160.5　7.58±0.66　12.10±6.86　144.0±9.84 5 g/kg 　869.4±153.7　7.92±0.74　12.08±2.74　148.1±16.7 10 g/kg 　846.1±328.2　7.45±0.47　11.97±4.71　140.7±7.71

表7 煙草種子油對(duì)大鼠白細(xì)胞分類的影響

表7 煙草種子油對(duì)大鼠白細(xì)胞分類的影響

性別　　組別　　單核細(xì)胞百分比(%)淋巴細(xì)胞百分比(%)嗜堿性細(xì)胞百分比(%)嗜酸性細(xì)胞百分比(%)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比(%)中性粒細(xì)胞百分比(%)雄　　對(duì)照組　3.46±2.58　 78.48±17.11　 0.109±0.094　 0.653±0.636　 2.87±1.06　 17.45±8.12煙草種子油 2.5 g/kg 　3.85±1.60　 79.95±10.66　 0.074±0.123　 0.554±0.342　 4.25±2.43　 16.58±11.46 5 g/kg 　4.00±2.09　 82.91±5.62　 0.069±0.042　 0.478±0.386　 3.82±1.11　 12.69±4.50 10 g/kg 　3.86±1.46　 80.32±4.01　 0.091±0.049　 0.491±0.141　 4.12±0.87　 15.51±3.34雌　　對(duì)照組　4.12±3.62　 79.92±12.81　 0.102±0.213　 0.832±0.557　 3.09±0.74　 15.03±3.30煙草種子油 2.5 g/kg 　3.72±1.79　 82.87±7.10　 0.076±0.060　 0.506±0.189　 2.59±0.96　 14.01±7.50 5 g/kg 　4.01±2.15　 81.65±8.53　 0.073±0.050　 0.729±0.420　 3.65±1.87　 13.73±7.23 10 g/kg 　4.13±2.80　 83.44±6.83　 0.079±0.306　 0.562±0.477　 3.99±2.24　 11.94±5.41

2.3.5 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響結(jié)果見表8和表9。煙草種子油喂養(yǎng)30 d后，各劑量組雌雄大鼠的總膽固醇、血糖、肌酐及尿素氮均在正常值范圍之內(nèi)，且與對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)。

2.3.6 病理學(xué)檢查 各劑量組大鼠大體解剖肉眼觀察各臟器未見明顯異常，選擇對(duì)高劑量組和對(duì)照組雌雄大鼠進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。鏡下檢查，各劑量組與對(duì)照組的肝、腎、脾、胃、腸、卵巢、睪丸等組織結(jié)構(gòu)較完整，細(xì)胞形態(tài)正常，界限清晰，未見充血及炎性浸潤(rùn)等明顯病變，極少數(shù)大鼠出現(xiàn)輕微病理改變，但這些病理改變均無組間特異性[5-6]，可能為試驗(yàn)動(dòng)物在試驗(yàn)過程中自發(fā)產(chǎn)生或其他非試驗(yàn)因素所致，高劑量組有4只大鼠(雄性3只，雌性1只)肝組織中可見輕度脂肪空泡。結(jié)果表明煙草種子油對(duì)大鼠肝、腎、脾、胃、腸、卵巢、睪丸等臟器沒有明顯毒性，可能具有一定的致肝臟脂肪變性作用。

表8 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

表8 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

性別　　組別　　甘油三酯　　總膽固醇　　血糖　　肌酐　　尿素雄　　對(duì)照組　0.59±0.19　2.05±0.44　7.21±1.07　40.2±4.87　5.04±1.05煙草種子油 2.5 g/kg 　0.30±0.50　1.81±0.30　7.19±2.58　40.6±4.03　5.20±1.29 5 g/kg 　0.38±0.10　1.79±0.28　7.34±1.97　40.1±6.89　5.70±1.86 10 g/kg 　0.34±0.07　1.85±0.36　6.32±2.19　38.4±4.19　4.81±0.79雌　　對(duì)照組　0.51±0.50　2.15±0.27　7.32±2.51　36.7±3.16　7.22±1.81煙草種子油 2.5 g/kg 　0.44±0.29　1.94±0.36　7.90±1.75　41.7±6.88　6.35±1.48 5 g/kg 　0.49±0.40　2.06±0.32　7.74±2.52　41.2±6.78　6.76±1.52 10 g/kg 　0.49±0.37　1.99±0.43　7.12±1.89　43.1±9.16　5.71±1.21

表9 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

表9 煙草種子油對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響

性別　　組別　　總蛋白(TP)　　白蛋白(ALB)　　谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)　　谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)雄　　對(duì)照組　61.4±3.17　26.6±1.59　160.3±12.2　73.0±13.4煙草種子油 2.5 g/kg 　67.7±5.67　27.6±1.26　154.3±10.8　70.0±10.5 5 g/kg 　69.1±8.67　27.7±1.67　138.0±13.8　60.2±10.2 10 g/kg 　65.4±4.17　27.0±1.53　128.7±12.1　64.7±17.8雌　　對(duì)照組　62.5±2.73　38.6±2.82　129.0±14.2　67.1±19.9煙草種子油 2.5 g/kg 　64.5±2.41　32.7±10.1　108.2±14.8　53.8±13.6 5 g/kg 　63.2±6.91　29.3±2.66　102.7±10.8　59.0±11.7 10 g/kg 　65.1±4.02　35.1±11.3　101.5±14.4　54.0±14.6

3 討 論

隨著保健品的開發(fā)，油料作物中的不飽和脂肪酸、黃酮等物質(zhì)越來越受到人們的關(guān)注，新型高附加值的產(chǎn)品如“橄欖油膠囊”、“葡萄籽油膠囊”等逐漸被開發(fā)，隨之而來的安全性問題亦成為產(chǎn)品銷售和推廣的主要阻礙。文冠果籽含油量為55%～65%，其中油酸30%、亞油酸為42.9%，具有預(yù)防和治療高血壓、血管硬化等心血管病的效果，在對(duì)文冠果籽油的毒理學(xué)評(píng)價(jià)中明確其無明顯毒作用[7-8]；辣木籽油含有高達(dá)80%以上的不飽和脂肪酸，其中油酸含量在62%～75%[9-10]，食用辣木籽油可以護(hù)肝[11]、預(yù)防肝硬化[12]、抗氧化[13]、抗胃潰瘍、降血糖等，段瓊芬等[14]在對(duì)其進(jìn)行安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)指出其是安全無毒的可食用油脂；共軛亞油酸因雙鍵的共軛效應(yīng)，而具有抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多重生理功能，目前已應(yīng)用于食品添加劑和醫(yī)藥領(lǐng)域。不少研究在對(duì)其進(jìn)行安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)指出，共軛亞油酸是一種安全的食用油脂，可作為食用級(jí)油脂應(yīng)用在食品、添加劑、醫(yī)藥等行業(yè)[15-19]。

本文中煙草種子油成分主要為不飽和脂肪酸，其中亞油酸含量較高，約為71.6%，其可能有不飽和脂肪酸的生物活性。目前國(guó)內(nèi)較煙草種子油的活性研究較少，且在其毒性方面鮮有報(bào)道，因此本研究為其實(shí)際應(yīng)用開發(fā)提供相關(guān)依據(jù)。

急性毒性試驗(yàn)通常是指經(jīng)口一次性給予或24 h內(nèi)多次給予受試物后，在短時(shí)間內(nèi)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況，是認(rèn)識(shí)和研究藥物對(duì)機(jī)體毒性反應(yīng)的第一步。本實(shí)驗(yàn)采用霍恩氏法，所得LD50>21 500 mg/kg，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[20]，煙草種子油屬無毒級(jí)。這一結(jié)果為進(jìn)一步設(shè)計(jì)相關(guān)毒性試驗(yàn)提供材料，可為研發(fā)價(jià)值的早期調(diào)研提供重要信息。

鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))結(jié)果顯示，受試樣品各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)2倍，亦無劑量-效應(yīng)關(guān)系，鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102共4株試驗(yàn)菌株，在加與不加S9液時(shí)，均未呈現(xiàn)遺傳毒性。

小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及染色體畸變?cè)囼?yàn)，結(jié)果雌雄小鼠煙草種子油高、中、低劑量組的微核率均顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組(P<0.05)，陽(yáng)性對(duì)照組微核率明顯高于陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)顯示，雌雄小鼠煙草種子油高、中、低劑量組的染色體畸變率均低于陽(yáng)性對(duì)照組，差異具有顯著性(P<0.05)，陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞畸變率明顯高于陰性對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)。以上結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，煙草種子油對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞無抑制作用和遺傳毒性。

30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)中，大鼠連續(xù)30 d喂飼不同劑量的煙草種子油，各劑量組動(dòng)物生長(zhǎng)、發(fā)育狀況良好，無中毒及死亡現(xiàn)象；各劑量組雌雄大鼠體質(zhì)量、增重、食物利用率等均無不良影響，表明煙草種子油對(duì)大鼠的正常生長(zhǎng)發(fā)育和食物吸收代謝等無明顯影響。各劑量組的血常規(guī)、生化指標(biāo)及動(dòng)物臟體比均在正常范圍之內(nèi)，與同性別的對(duì)照組相比無顯著性差異；各劑量組大鼠主要臟器解剖后除肝臟見少量脂肪空泡外未見明顯異常，各組織病理學(xué)觀察未見非可逆性病理變化。綜上所述，煙草種子油30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明其對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育、代謝無不良影響；對(duì)大鼠增重、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化、臟體比及主要臟器病理組織學(xué)均未見異常。

綜上所述，煙草種子油在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)未見明顯的毒副作用，無致突變作用，安全性較高。

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基金項(xiàng)目：十二五農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃課題(2012BAD33B01-2)

收稿日期：2015-09-01；

修訂日期：2015-12-29

中圖分類號(hào)：R114

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-616X(2016)01-0060-06

doi:1 0.3969/j.issn.1004-616x.2016.01.013