綿羊PRKAG3基因SNPs與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析

王　華,魏玉兵,童建偉,張明軍,王建福,王欣榮,成述儒

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,甘肅 蘭州　730070;2.甘肅省張掖市甘州區(qū)平山湖鄉(xiāng)畜牧站,甘肅 張掖　734000)

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綿羊PRKAG3基因SNPs與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析

王華1,魏玉兵2,童建偉2,張明軍1,王建福1,王欣榮1,成述儒1

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,甘肅 蘭州730070;2.甘肅省張掖市甘州區(qū)平山湖鄉(xiāng)畜牧站,甘肅 張掖734000)

摘要：為從分子水平研究甘肅境內(nèi)典型養(yǎng)殖模式下甘肅高山細(xì)毛羊、小尾寒羊、藏羊、蒙古羊和灘羊5個(gè)綿羊品種的PRKAG3基因多態(tài)性與屠宰性能和肉品質(zhì)的相關(guān)性,探討以PRKAG3為候選基因,提高綿羊屠宰性能和肉品質(zhì)的可能性。采用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)5個(gè)綿羊品種的PRKAG3基因外顯子4，5和內(nèi)含子4多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè),并就PRKAG3基因多態(tài)性與9月齡屠宰性能和肉品質(zhì)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明,在PRKAG3基因2 689 bp處發(fā)生了A>G的突變,位于第4內(nèi)含子第23 bp處,表現(xiàn)出3種基因型,AA、AB和BB。純合度(Ho)分別為0.67,0.69,0.76,0.69,0.59,雜合度(He) 分別為0.333 3,0.306 1,0.244 9,0.307 7,0.408 2,有效等位基因(Ne)分別為1.62,1.66,1.69,1.48,1.79,多態(tài)信息含量(PIC)分別為0.31,0.32,0.33,0.27,0.34。除藏羊外其他4個(gè)綿羊品種均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。關(guān)聯(lián)分析表明，5個(gè)綿羊品種 PRKAG3基因此變異位點(diǎn)的3個(gè)基因型間失水率性狀差異顯著(P<0.05);BB基因型個(gè)體的胴體重顯著高于AA型(P<0.05),灘羊?yàn)闃O顯著(P<0.01),BB基因型個(gè)體的眼肌面積顯著大于AA型(P<0.05)(藏羊除外)。因此說(shuō)明PRKAG3 基因可作為候選基因用于綿羊產(chǎn)肉性能和肉品質(zhì)的分子標(biāo)記輔助選擇。

關(guān)鍵詞：綿羊;PCR-SSCP;PRKAG3基因;肉質(zhì)性狀;關(guān)聯(lián)性分析

羊肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味等是消費(fèi)者對(duì)其品質(zhì)評(píng)價(jià)的首要指標(biāo)。可靠的自然變異的表型差異為育種選擇提供了重要依據(jù)。在家畜基因組研究中從復(fù)雜的表型特征中找出這些變異并闡明如何控制這些指標(biāo)是分子育種的主要目標(biāo)之一[1]。骨骼肌代謝是一個(gè)非常復(fù)雜的生物過(guò)程,與能量的攝取、利用和環(huán)境因素等緊密相關(guān),它對(duì)肌肉的結(jié)構(gòu)和生化特征都產(chǎn)生影響,因此,它對(duì)肉品質(zhì)有很大的影響。腺嘌呤核糖核苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)能量代謝的主要參與者之一[2]。AMPK在真核生物的能量平衡調(diào)節(jié)中起了非常重要的作用[3],它是由催化亞基α(α1、α2)[4]以及調(diào)節(jié)亞基β(β1、β2)[5]和γ(γ1、γ2、γ3)組成,其中γ3亞基由具有肌肉特異表達(dá)特性的PRKAG3(AMP-activated protein kinase γ3)基因編碼[6]。有報(bào)道表明,AMPK的亞基發(fā)生變異與生理效應(yīng)顯著相關(guān)。Fontanesi等[7]對(duì)7個(gè)不同品種的豬進(jìn)行了PRKAG3基因在骨骼肌中對(duì)能量平衡和糖原調(diào)節(jié)過(guò)程所起作用的研究結(jié)果表明,PRKAG3基因的突變與肉質(zhì)顏色相關(guān)性為顯著 (P<0.01)。Milan等[8]對(duì)漢普夏豬的PRKAG3基因研究,結(jié)果表明,PRKAG3基因的第200個(gè)密碼子發(fā)生了錯(cuò)義突變(Arg200>Gln200),從而使AMPK活性降低,促使骨骼肌中糖原含量顯著升高,最終導(dǎo)致豬肉pH降低,從而造成了RN-效應(yīng)。Ciobanu等[9]又證實(shí),PRKAG3中緊鄰Arg200的Val199>I1e199 突變具有與RN-效應(yīng)相反的效應(yīng),它使骨骼肌中糖原含量顯著降低,因而有利于肉質(zhì)的改善。Rothschild等[10]利用等位基因分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)PRKAG3進(jìn)行分析并關(guān)聯(lián)分析其與繁殖和肉質(zhì)性狀的關(guān)系,并申請(qǐng)了美國(guó)國(guó)家專利。又有報(bào)道證實(shí),豬的PRKAG3基因表達(dá)對(duì)肉質(zhì)最終pH 、色度等性狀存在一定的影響[11-12]。李夢(mèng)云等[13-14]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),PRKAG3基因表達(dá)量與營(yíng)養(yǎng)水平有關(guān)系,但未達(dá)到顯著水平。Yu等[15]分析了韓牛PRKAG3基因的結(jié)構(gòu)與序列,并發(fā)現(xiàn)PRKAG3基因在牛的體內(nèi)亦只在骨骼肌中高度表達(dá),并可能與肉品質(zhì)和肌肉相關(guān)的遺傳病有一定的關(guān)系。Matthieu等[16]對(duì)總長(zhǎng)8 048 bp的CDS序列進(jìn)行研究,結(jié)果表明,序列共存在32個(gè)SNPs位點(diǎn),平均每250 bp就有1個(gè)SNP存在,其中有5個(gè)使氨基酸發(fā)生了改變的突變,這表明PRKAG3基因在牛上有很高的變異頻率。由此表明,PRKAG3 基因可能是一個(gè)影響肉質(zhì)的候選基因。

本試驗(yàn)以甘肅境內(nèi)典型養(yǎng)殖模式下甘肅高山細(xì)毛羊、小尾寒羊、藏羊、蒙古羊和灘羊5個(gè)綿羊品種為研究對(duì)象,以PRKAG3基因?yàn)楹蜻x基因,采用PCR-SSCP的方法分析其多態(tài)性,并與屠宰性能和肉質(zhì)性狀進(jìn)行相關(guān)性分析。目的是進(jìn)一步認(rèn)識(shí)綿羊的種質(zhì)特性,希望對(duì)甘肅綿羊品種的雜交、選種和早期選育提供基礎(chǔ)參數(shù)和試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)選用3月齡甘肅本地5個(gè)綿羊品種共245只,靜脈采血,所采血樣均為6 mL/只,用ACD 抗凝,-20 ℃凍存。9月齡時(shí)對(duì)各綿羊品種的每個(gè)基因型隨機(jī)選取3只按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行屠宰,測(cè)定肉質(zhì)品質(zhì)。

1.2主要試劑

TaqDNA聚合酶、非變性聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖和瓊脂粉、蛋白酶K、Tris飽和酚、三氯甲烷、異戊醇、無(wú)水乙醇、甲醛、乙酸、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、硼酸乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、DNA Marker、去離子甲酰胺、溴酚藍(lán)等。

1.3性狀測(cè)定

主要測(cè)定剪切力(Shear force,SF)、蒸煮損失率(Cooking loss rate,CLR)、pH值(pH value)、失水率(Drip loss,DP)、胴體重(Carcass weight,CW)、凈肉重(Net meat weight,NMW)、屠宰率 (Dressing percentage,DP)、凈肉率(Meat percentage,MP)和眼肌面積(Loin muscle area,LMA)。以上性狀依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17238-1998進(jìn)行測(cè)定。

1.4引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)綿羊PRKAG3的登錄號(hào)(FJ685774.1)通過(guò)Primer 5.0對(duì)PRKAG3進(jìn)行引物設(shè)計(jì),并由上海生工生物工程有限公司合成。引物序列:P5E5-F-5′-GGTGAACCCCACTCCTCT-3′;P5E5-R-5′-CATCCTCTACCCTGGGTCCTT-3′。

1.5DNA提取及 PCR反應(yīng)體系和程序

采用常規(guī)的酚-氯仿抽提法[17]從血樣中提取基因組DNA 。

PCR反應(yīng)體系為25 μL,其中模板DNA 1 μL(100 μmol/L),上游引物1 μL(10 μmol/L),下游引物1 μL(10 μmol/L),mixTaq酶12.5 μL(1.25 U),最后加ddH2O至總反應(yīng)體系25 μL。

擴(kuò)增程序:94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性30 s,退火30 s,72 ℃延伸30 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。

1.6PCR-SSCP分析

PCR檢測(cè)完成后,取PCR產(chǎn)物2 μL與 8 μL的上樣緩沖液混勻,然后98 ℃變性10 min,迅速冰浴5 min,用移液槍將變性樣品點(diǎn)于12%非變性聚丙烯酰胺凝膠[m(Acr):m(Bis)=39∶1]中,180 V,8 ℃電泳16 h,硝酸銀染色[18]判型。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS19.0軟件對(duì)PRKAG3基因外顯子4，5和內(nèi)含子4基因多態(tài)性位點(diǎn)在不同綿羊群體中的基因型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,根據(jù)下列模型進(jìn)行最小二乘分析,比較各項(xiàng)觀察值在PRKAG3基因型之間的差異。

Yijkm=u+Gi+BFj+Lk+Sm+eijkm

式中:Yijkm為個(gè)體某性狀表型值,u為總體均值,Gi為基因型效應(yīng),BFj為第j個(gè)品種和羊場(chǎng)的合并固定效應(yīng),Lk為地區(qū)效應(yīng),Sm為性別效應(yīng),eijkm為隨機(jī)誤差。

2結(jié)果與分析

2.1PCR產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果

對(duì)PRKAG3基因進(jìn)行擴(kuò)增,隨機(jī)選擇若干個(gè)樣品的PCR產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)(圖1),結(jié)果表明,擴(kuò)增片段與目的片段(321 bp)大小一致,且特異性好,可用于SSCP分析。

圖1　PCR擴(kuò)增

2.2SSCP檢測(cè)與判型

對(duì)外顯子4，5和內(nèi)含子4的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SSCP分析發(fā)現(xiàn)3種基因型(圖2),并將不同基因型個(gè)體挑選幾個(gè)進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果表明(圖3),第2 689 bp位點(diǎn)處即內(nèi)含子4第23 bp處存在A>G突變,其中將位點(diǎn)為A堿基的帶型命名為AA型,為G堿基的命名為BB型,雜合子為AB型,測(cè)序結(jié)果與電泳結(jié)果一致。

圖2　擴(kuò)增序列SSCP檢測(cè)

圖3　測(cè)序結(jié)果對(duì)比

2.3PRKAG3基因型頻率和基因頻率分析

采用群體遺傳學(xué)方法,對(duì)5個(gè)綿羊品種PRKAG3基因變異位點(diǎn)的基因型頻率和基因頻率進(jìn)行分析(表1),結(jié)果表明,小尾寒羊AA基因型頻率最高為0.80,灘羊最低為0.48。小尾寒羊等位基因A基因頻率最高0.89,灘羊最低為0.68。在不同的綿羊群體中等位基因A的頻率都在0.5以上,為優(yōu)勢(shì)等位基因。AA基因型頻率除灘羊外都在0.5以上,為優(yōu)勢(shì)基因型。

2.4純合度、雜合度、有效等位基因數(shù)、多態(tài)信息含量和哈代-溫伯格平衡檢驗(yàn)分析

對(duì)5個(gè)綿羊品種進(jìn)行純合度(Ho)、雜合度(He)、有效等位基因(Ne)、多態(tài)信息含量(PIC)和χ2檢驗(yàn)分析,結(jié)果表明(表2),灘羊的雜合度最高,其次為甘肅高山細(xì)毛羊,5個(gè)綿羊品種的PIC值均為0.25~0.50,為中度多態(tài)。經(jīng)χ2檢驗(yàn),藏羊偏離哈代-溫伯格平衡狀態(tài),其余綿羊品種在該位點(diǎn)均處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài)。

表1　基因型頻率和基因頻率

表2　五個(gè)綿羊品種純合度、雜合度、有效等位基因數(shù)、多態(tài)信息含量和哈代-溫伯格平衡檢驗(yàn)分析

表3　不同基因型屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析

注：同行不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01);不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。表4同。

Note:In the same line,values with different letter mean very significant difference(P<0.01);Values with different capital lowercase mean significant difference(P<0.05).The same as Tab.4.

2.5PRKAG3不同基因型屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析

PRKAG3基因第4,5外顯子和第4內(nèi)含子突變位點(diǎn)不同基因型屠宰性狀分析(表3),結(jié)果表明,各個(gè)品種蒙古羊、小尾寒羊、藏羊和甘肅高山細(xì)毛的基因型間BB型個(gè)體的胴體重最小二乘均值顯著高于 AA型(P<0.05),灘羊?yàn)闃O顯著(P<0.01)。對(duì)于凈肉重各基因型之間沒(méi)有顯著差異，對(duì)于凈肉率除小尾寒羊各基因型之間沒(méi)有顯著差異。對(duì)于眼肌面積除藏羊外其他4個(gè)綿羊品種基因型BB個(gè)體顯著大于基因型AA個(gè)體(P<0.05)。對(duì)于屠宰率指標(biāo)藏羊和蒙古羊之間各基因型間沒(méi)有顯著性,但其他3個(gè)綿羊品種間的BB型屠宰率最小二乘均值顯著高于AA型(P<0.05)。

2.6PRKAG3不同基因型肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析

PRKAG3基因第4,5外顯子和第4內(nèi)含子突變位點(diǎn)不同基因型肉質(zhì)性狀分析(表4),結(jié)果表明,突變位點(diǎn)對(duì)5個(gè)綿羊品種的失水率有顯著影響(P<0.05)。蒙古羊和灘羊的剪切力基因型BB個(gè)體顯著低于AA型個(gè)體(P<0.05)。灘羊與甘肅高山細(xì)毛羊的基因型BB個(gè)體與AA型個(gè)體pH值有顯著差異(P<0.05)，但總的趨勢(shì)是BB型優(yōu)于AA型,其失水率較高,剪切力較低。

表4　不同基因型肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析

3討論與結(jié)論

自20世紀(jì)初,隨著生活水平的提高以及對(duì)食品安全的考慮,人們對(duì)草食畜肉類的需求量呈逐年增加,導(dǎo)致羊肉價(jià)格不斷上揚(yáng),綿羊的發(fā)展方向由毛用轉(zhuǎn)向肉毛兼用或肉用,綿羊的品種和類型的結(jié)構(gòu)相應(yīng)的發(fā)生了變化。自改革開(kāi)放以來(lái),受世界養(yǎng)羊業(yè)由毛用向肉用轉(zhuǎn)型的趨勢(shì)影響,以及國(guó)內(nèi)羊肉需求量增加、羊肉價(jià)格不斷攀升等市場(chǎng)因素推動(dòng),羊肉生產(chǎn)得到迅速發(fā)展。甘肅省作為我國(guó)五大牧區(qū)之一,肉羊生產(chǎn)發(fā)展迅猛,但隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活質(zhì)量的提高,人們也越來(lái)越關(guān)注羊肉的品質(zhì),PRKAG3基因是影響羊肉品質(zhì)的候選基因,它主要在骨骼肌中特異性表達(dá),目前已被作為影響肉質(zhì)性狀的一個(gè)主要基因在家畜上廣泛研究。

李夢(mèng)云等[19]研究表明，二甲雙胍可激活PRKAG3基因的表達(dá),進(jìn)而影響豬生長(zhǎng)性能和肉質(zhì)，同時(shí)馬琳旭等[20]證實(shí)，日糧中添加甜菜堿可以不同程度地提高育肥豬PRKAG3基因的表達(dá)量。哈?！ぐ涂说萚21]對(duì)雞的PRKAG3研究發(fā)現(xiàn)其變異對(duì)pH值有顯著影響。李靜[22]對(duì)延邊黃牛研究發(fā)現(xiàn)PRKAG3基因突變對(duì)天冬氨酸有一定的正面影響，對(duì)谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、精氨酸和纈氨酸含量均有一定的負(fù)面影響。田萬(wàn)強(qiáng)[23]在牛PRKAG3基因上共檢出45個(gè)SNPs位點(diǎn)，關(guān)聯(lián)分析表明,突變位點(diǎn)對(duì)牛的不同性狀均有影響。靳海等[24]研究表明，山羊的PRKAG3基因5′調(diào)控區(qū)和外顯子13存在大量變異位點(diǎn)。王耀武[25]研究表明在脂肪生成以及脂肪沉積組織中，不同綿羊PRKAG3基因的表達(dá)水平上有顯著差異。陶曉臣等[26-27]研究結(jié)果表明不同綿羊PRKAG3基因mRNA表達(dá)量差異不顯著。盧亞洲[28]對(duì)PRKAG3基因外顯子多態(tài)位點(diǎn)與綿羊肉品質(zhì)性狀指標(biāo)關(guān)聯(lián)性進(jìn)行了分析發(fā)現(xiàn)，PRKAG3多態(tài)位點(diǎn)與灘羊肉質(zhì)顏色和pH值存在互作效應(yīng)，差異極顯著。

本研究在綿羊的PRKAG3基因外顯子4，5和內(nèi)含子4進(jìn)行多態(tài)位點(diǎn)分析,在內(nèi)含子4的第23 bp處發(fā)現(xiàn)一個(gè)A>G堿基突變所造成AA、AB、BB 3種基因型,AA為優(yōu)勢(shì)基因型,A為優(yōu)勢(shì)等位基因。對(duì)5個(gè)綿羊品種進(jìn)行純合度(Ho)、雜合度(He)、有效等位基因(Ne)、多態(tài)信息含量(PIC)和χ2檢驗(yàn)分析結(jié)果表明,5個(gè)綿羊品種的PIC值均為0.25~0.50,為中度多態(tài),PIC值分析說(shuō)明,本研究所檢測(cè)到的變異位點(diǎn)在各個(gè)綿羊群體中都存在一定的遺傳變異。經(jīng)χ2檢驗(yàn),藏羊偏離哈代-溫伯格平衡狀態(tài),這可能是由于人工飼養(yǎng)選育結(jié)果而改變的,其余綿羊品種在該位點(diǎn)均處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài)。灘羊的雜合度比其他各品種高,表明灘羊PRKAG3 基因的多態(tài)性相對(duì)較高。

對(duì)各個(gè)基因型進(jìn)行屠宰及肉品質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)性分析,屠宰性狀表明各個(gè)品種蒙古羊、小尾寒羊、藏羊和甘肅高山細(xì)毛的基因型間BB型個(gè)體的胴體重最小二乘均值顯著高于AA型(P<0.05),灘羊?yàn)闃O顯著(P<0.01)。說(shuō)明在屠宰方面,此變異位點(diǎn)對(duì)灘羊的影響更大一些。凈肉重性狀指標(biāo)沒(méi)有顯著性差異，凈肉率指標(biāo)除小尾寒羊其他各基因型之間沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明此變異位點(diǎn)對(duì)凈肉重和凈肉率的影響不大。肉品質(zhì)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)多態(tài)位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的失水率基因型效應(yīng)有達(dá)到顯著水平的趨勢(shì),此多態(tài)位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的失水率BB基因型最小二乘均值顯著高于AB或AA基因型最小二乘均值(P<0.05)。對(duì)于剪切力除甘肅高山細(xì)毛羊外其他4個(gè)品種均有顯著性影響趨勢(shì),說(shuō)明此變異位點(diǎn)對(duì)甘肅高山細(xì)毛羊剪切力影響較小。盧亞洲[28]對(duì)PRKAG3基因外顯子多態(tài)位點(diǎn)與綿羊肉品質(zhì)性狀指標(biāo)關(guān)聯(lián)性進(jìn)行了分析發(fā)現(xiàn),PRKAG3多態(tài)位點(diǎn)與灘羊肉質(zhì)顏色和pH值存在互作效應(yīng),差異極顯著。本研究所出現(xiàn)的性狀差異可能是由于多數(shù)性狀存在品種與基因型的互作效應(yīng)所致，但這也可能是由于屠宰個(gè)體數(shù)少所造成的抽樣誤差。盡管如此,筆者仍可以看出,PRKAG3 不同基因型個(gè)體的各屠宰指標(biāo)確有明顯差異。因此,PRKAG3 基因有可能作為一個(gè)候選基因用于綿羊產(chǎn)肉性能的分子標(biāo)記輔助選擇。

在甘肅境內(nèi)典型養(yǎng)殖模式下甘肅高山細(xì)毛羊、小尾寒羊、藏羊、蒙古羊和灘羊5個(gè)綿羊品種的PRKAG3基因產(chǎn)生了不同的多態(tài)性,基因型和品種間的互作效應(yīng)可能造成了不同綿羊品種的屠宰性能和肉品質(zhì)性能的差異性。但總的來(lái)說(shuō),PRKAG3基因的變異引起了綿羊肉品質(zhì)的變化。

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PRKAG3 Gene SNPs of Sheep and Correlation Analysis of Meat Quality Traits

WANG Hua1,WEI Yubing2,TONG Jianwei2,ZHANG Mingjun1,WANG Jianfu1,WANG Xinrong1,CHENG Shuru1

(1.Faculty of Animal Science and Technology,Gansu Agricultural University,Lanzhou730070,China;2.Pingshanhu Animal Husbandry Station of Ganzhou Country,Zhangye City,Gansu Province,Zhangye734000,China)

Abstract：In order to study the relationship between the PRKAG3 gene polymorphism and slaughter performance,meat quality of 5 sheep breeds(Gansu alpine fine wool sheep,Small tail han sheep,Tibetan,Mongolian sheep and Tan-sheep which were fed in a typical farming mode of Gansu province) in Gansu province at the molecular level and to explore the possibility of improving the slaughter performance and quality of sheep meat by using PRKAG3 as candidate gene,the polymorphism of exon 4,5and introns 4,a total of 321 bp,of PRKAG3 gene was detected by PCR-SSCP in 5 sheep breeds,and the association between PRKAG3 gene polymorphism and slaughter performance,meat quality in aged 9 month were analyzed.The results showed:that B allele had a base transformation of A>G at the 2 689th bp in intron 4 formed AA,AB and BB genetypes.The gene homozygosity (Ho)were 0.67,0.69,0.76,0.69 and 0.59 respectively;the heterozygosity were 0.333 3,0.306 1,0.244 9,0.307 7 and 0.408 2,respectively;the effective number of alleles (Ne) were 1.62,1.66,1.69,1.48 and 1.79;the polymorphism information content (PIC) were 0.31,0.32,0.33,0.27 and 0.34,respectively.In addition to the Tibetan sheep other four sheep breeds on this loci in a Hardy-Weinberg equilibrium state by Chi-square test.Association analysis of the SNPs with meat quality traits was carried out.The result showed that the mutation loc of PRKAG3 gene was significantly associated (P<0.05) with meat water loss rate,genotype BB between individual′s body weight was significantly higher than AA type (P<0.05),Tan-sheep was very significant(P<0.01).The eye muscle area was significantly greater between a BB genotype and AA type (P<0.05).So,PRKAG3 gene can be used as a candidate gene for marker-assisted selection of sheep meat performance and meat quality.

Key words:Sheep;PCR-SSCP;PRKAG3 gene;Meat quality traits;Association analysis

doi:10.7668/hbnxb.2016.01.022

中圖分類號(hào)：Q78;S858.03

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-7091(2016)01-0134-07

作者簡(jiǎn)介：王華(1990-),男,山東臨沂人,在讀碩士,主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究。通訊作者：成述儒(1976-),男,甘肅張掖人,副教授,博士,碩士生導(dǎo)師,主要從事生物技術(shù)與動(dòng)物育種研究。

基金項(xiàng)目：甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開(kāi)發(fā)項(xiàng)目(GNSW-2012-26)

收稿日期：2015-11-23