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    Tdo2在大鼠圍著床期子宮中的表達(dá)規(guī)律研究

    2016-03-18 07:31:39王勝軒馬興紅
    黑龍江動物繁殖 2016年2期

    岳 巍,王勝軒,方 園,馬興紅

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

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    Tdo2在大鼠圍著床期子宮中的表達(dá)規(guī)律研究

    岳巍,王勝軒,方園,馬興紅

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

    摘要:深入研究哺乳動物胚胎著床的分子機(jī)理對提高動物繁殖率具有重要意義。本文以大鼠為動物模型,利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2基因在大鼠圍著床期的表達(dá)規(guī)律,探討了Tdo2基因在大鼠胚胎著床過程中可能發(fā)揮的作用。

    關(guān)鍵詞:胚胎著床;Tdo2;大鼠

    資助項(xiàng)目:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生SIPT計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號:201510224206)

    胚胎著床是指在卵巢激素的影響下,胚胎與子宮建立物理及生理聯(lián)系的過程[1]。胚胎著床是胚胎在子宮中進(jìn)一步發(fā)育的基礎(chǔ)。目前胚胎工程技術(shù)雖然已經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中,但是通過胚胎工程技術(shù)最后得到的動物出生率低,其主要原因是胚胎著床失敗[2]。因此,深入研究哺乳動物胚胎著床的機(jī)理對提高動物繁殖率,加快動物良種繁育具有重要意義。

    色氨酸是5-羥色胺生物合成的前體,5-羥色胺作為激素和神經(jīng)遞質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脈管系統(tǒng)、胃腸道中發(fā)揮各種不同的作用。5-羥色胺也在雌性生殖系統(tǒng)如卵巢、子宮、胎盤以及輸卵管、卵泡液中檢測到。色氨酸的代謝是調(diào)節(jié)5-羥色胺水平的重要機(jī)制。色氨酸的代謝與哺乳動物妊娠緊密相關(guān),參與色氨酸代謝的酶主要是TDO和IDO[3]。Tdo2參與小鼠蛻膜化過程[4],但Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達(dá)調(diào)節(jié)與功能還未見報(bào)道。本研究利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達(dá)規(guī)律,發(fā)現(xiàn)其可能參與調(diào)節(jié)大鼠蛻膜化過程。

    1材料與方法

    1.1大鼠早期妊娠取材

    下午3:00將性成熟雌性與雄性大鼠合籠,次日早晨檢查陰道涂片,將發(fā)現(xiàn)精子的當(dāng)天計(jì)為妊娠第1天。分別取妊娠第1~9天大鼠子宮組織。

    1.2原位雜交

    根據(jù)大鼠Tdo2序列(GenBank系列號:NM_022403.2)合成引物-CCTTTCCAGTTGCTGACCTC和TGGACCACAACATCACGTCT,PCR擴(kuò)增片段長428 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到PGEM-T 載體,測序驗(yàn)證克隆的方向與正確性,利用Roche公司的RNA標(biāo)記試劑盒標(biāo)記cRNA探針,原位雜交方法按文獻(xiàn)進(jìn)行[5]。

    2結(jié)果與討論

    由圖1可見,在妊娠1~6 d大鼠子宮未見Tdo2原位雜交信號。在妊娠第7天的子宮著床位點(diǎn)處系膜對側(cè)上皮下基質(zhì)細(xì)胞檢測到非常強(qiáng)的Tdo2雜交信號。隨著妊娠的進(jìn)行,Tdo2表達(dá)向系膜側(cè)擴(kuò)展,在妊娠第8天在整個(gè)胚胎周圍的子宮初級蛻膜區(qū)檢測到較強(qiáng)的Tdo2雜交信號,在次級蛻膜區(qū)有弱的信號。妊娠第9天,Tdo2雜交信號開始減弱,表達(dá)的模式與妊娠第8天類似。

    大鼠早期妊娠1~3 d胚胎在輸卵管中成熟,妊娠第4天胚胎進(jìn)入子宮,妊娠第5天胚胎在子宮中進(jìn)一步發(fā)育,直到妊娠第6天胚胎著床。妊娠第7~9天,胚胎進(jìn)一步侵入到子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,基質(zhì)細(xì)胞發(fā)生復(fù)雜的形態(tài)及生理生化變化,變?yōu)橥懩ぜ?xì)胞,這個(gè)過程稱為蛻膜化[6]。蛻膜細(xì)胞能保護(hù)胚胎免受母體免疫系統(tǒng)攻擊及提供胚胎早期發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)[6]。Hoxa-10是蛻膜化的重要調(diào)節(jié)分子,Hoxa-10基因敲除小鼠蛻膜化失敗,小鼠不育[7]。最近的研究顯示,Hoxa-10調(diào)節(jié)子宮Tdo2的表達(dá)[8]。Tdo2在大鼠的蛻膜組織中表達(dá),表明Tdo2可能與大鼠子宮蛻膜化密切相關(guān)。Tdo2在小鼠的蛻膜組織表達(dá),抑制Tdo2的功能干擾蛻膜化發(fā)生[4]。這些研究表明Tdo2可能在不同物種的蛻膜化過程中具有保守的功能。

    圖1 Tdo2基因在大鼠早期妊娠中的表達(dá)

    D1-D9代表早期妊娠第1~9天,D6NI代表早期妊娠第6天非著床位點(diǎn),D6IN代表早期妊娠第6天著床位點(diǎn)。星型標(biāo)記胚胎位置,AM代表系膜對側(cè),M代表系膜側(cè)。棕黑色斑點(diǎn)代表陽性雜交信號。

    3參考文獻(xiàn)

    [1]Wang H,Dey SK.Roadmap to embryo implantation:clues from mouse models[J].Nat Rev Genet 2006;7 (3):185-99.

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    [3]Stone TW,Darlington LG.Endogenous kynurenines as targets for drug discovery and development[J].Nat Rev Drug Discov 2002;1 (8):609-20.

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    [6]Ramathal CY,Bagchi IC,Taylor RN,etal.Endometrial decidualization:of mice and men[J].Semin Reprod Med 2010;28 (1):17-26.

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    作者簡介:岳巍(1995-),女,本科。

    收稿日期:2016-01-16

    中圖分類號:S814.3

    文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    文章編號:1005-2739(2016)02-0014-02

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