調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與自身免疫性疾病研究進(jìn)展

鄭學(xué)軍,阮海玲,楊金良,羅寰,任占芬,趙亞君

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，河北 張家口 075000)

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調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與自身免疫性疾病研究進(jìn)展

鄭學(xué)軍,阮海玲,楊金良,羅寰,任占芬,趙亞君

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，河北 張家口 075000)

關(guān)鍵詞：B淋巴細(xì)胞；調(diào)節(jié)性B細(xì)胞；免疫調(diào)節(jié)；自身免疫性疾病

B淋巴細(xì)胞在機(jī)體的適應(yīng)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，主要通過(guò)產(chǎn)生抗體、提呈抗原和產(chǎn)生細(xì)胞因子(如IL-4、IL-6等)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。但是，機(jī)體內(nèi)也存在著一種數(shù)量雖少但功能獨(dú)特且能發(fā)揮免疫抑制功能的B淋巴細(xì)胞，研究人員將這種B細(xì)胞稱(chēng)為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，功能缺失可導(dǎo)致自身免疫系統(tǒng)平衡紊亂，引起自身免疫疾病。現(xiàn)就調(diào)節(jié)性B細(xì)胞功能、標(biāo)記物和相關(guān)自身免疫疾病進(jìn)行綜述。

1調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)

1996年有學(xué)者于實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)的模型中提出B細(xì)胞存在負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能[1]。自此，此型B細(xì)胞亞群正式引起研究者關(guān)注。1997年，Mizoguchi等正式提出了“調(diào)節(jié)性B細(xì)胞”這一新名詞，并在炎性腸病(inflamlnatorybowel disease，IBD)小鼠模型中發(fā)現(xiàn)了調(diào)節(jié)性B細(xì)胞存在的有力證據(jù)[2]。在之后的研究里，學(xué)者們陸續(xù)在更多的小鼠模型中證實(shí)B細(xì)胞參與免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制，Miyagaki等在B細(xì)胞缺陷小鼠EAE模型中發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞經(jīng)脂多糖刺激后可以減緩免疫進(jìn)程，并能通過(guò)分泌細(xì)胞因子IL-10抑制過(guò)度炎癥反應(yīng)[3]。有研究者在小鼠EAE模型中驗(yàn)證了B細(xì)胞可以分泌IL-10，并調(diào)節(jié)CD4+、CD25+T細(xì)胞減輕疾病對(duì)機(jī)體的損傷。近年來(lái)不斷有研究證明人體內(nèi)也有調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的存在。2010年Zhu XM等首次報(bào)道了人類(lèi)外周血中的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，表型為CD19+、CD24+、CD38+細(xì)胞，主要以濃度依賴(lài)和接觸依賴(lài)的方式顯著抑制CD4+T細(xì)胞的表達(dá)，抑制促炎癥因子的分化[4]。2013年Fumzawa-Carballeda等在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)CD19+、CD24+、CD38+B細(xì)胞可以分泌IL-10。Noh等認(rèn)為CD19+、CD5+、Foxp3+B細(xì)胞可能為人體內(nèi)潛在的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞群。之后，在多發(fā)性硬化等多種疾病患者體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)分泌產(chǎn)生IL-10的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞數(shù)量減少。小鼠調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的抑制作用主要依賴(lài)IL-10，但并非絕對(duì)依賴(lài)IL-10。與之相反的是，Yan SX等學(xué)者則認(rèn)為，人類(lèi)表型為CD19+、CD24+、CD38+細(xì)胞的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞經(jīng)過(guò)CD40的刺激后，可以抑制Th1的分化，并且主要是通過(guò)IL-10的分泌完成此抑制作用，而并不依賴(lài)TGF-β[5]。近年來(lái)，大量研究證明，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可以調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞的分化，Ding T等通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，健康人體內(nèi)的CD19+、CD24+、CD38+細(xì)胞可以分泌IL-10，抑制原始輔助T細(xì)胞向Th1/Th2分化[6]。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞無(wú)論在體內(nèi)還是體外均可影響CD4+T細(xì)胞的進(jìn)一步分化，不僅影響Th1/Th2而且影響Th17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化，所以，有理由相信調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在許多疾病中發(fā)揮重要的負(fù)性免疫調(diào)控作用。

2調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的標(biāo)記和種類(lèi)

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在不同的種屬表型不同，不同的疾病中表型也不同，目前尚無(wú)統(tǒng)一定論。有關(guān)人類(lèi)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的研究應(yīng)用最多的細(xì)胞表面標(biāo)記為CD19、CD5、CD24、CD38、CD27、IL-10等。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的種類(lèi)眾多，研究者依據(jù)其起源及分泌的細(xì)胞因子的不同，將調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分為3大類(lèi)：①產(chǎn)生IL-10的相關(guān)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(來(lái)源于Br1)，又稱(chēng)為B10細(xì)胞，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌的IL-10通過(guò)抑制Th1和Th2細(xì)胞的極化，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，并可以抑制單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子和趨化因子，還可以抑制MMP、IL-1的釋放，促進(jìn)IL-l受體拮抗劑產(chǎn)生；②產(chǎn)生TGF-β的相關(guān)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(來(lái)源于Br3)，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可以通過(guò)分泌TGF-β誘導(dǎo)效應(yīng)性T細(xì)胞凋亡，該類(lèi)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與B10細(xì)胞的不同之處是在體內(nèi)不擴(kuò)增；③表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的相關(guān)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，研究者認(rèn)為該類(lèi)細(xì)胞是與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+、CD25+、Foxp3+T細(xì)胞)相對(duì)應(yīng)的一類(lèi)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞。

3調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的活化

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的分化和激活方式大致分為2種：固有性和適應(yīng)性。在早期的固有免疫中B1細(xì)胞和邊緣區(qū)B細(xì)胞(marginal zone B cells，MZB)可以不依賴(lài)T細(xì)胞發(fā)揮作用，濾泡B細(xì)胞(follicular B cells，F(xiàn)OB)則在T細(xì)胞幫助下調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫。在B細(xì)胞亞群中，B1α、FOB、MZB和T2．MZP(邊緣區(qū)前體B細(xì)胞表型)等亞型細(xì)胞均可以分泌IL-10，發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞需要細(xì)胞間信號(hào)的激發(fā)才能發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。Kim SJ等將誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞活化的信號(hào)分為內(nèi)源性和外源性2種[7]。刺激分子CD40作為內(nèi)源性信號(hào)在T細(xì)胞介導(dǎo)的B細(xì)胞活化中至關(guān)重要，CD40-CD40L的相互作用可以引起自身免疫病小鼠模型中的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞活化，免疫調(diào)節(jié)作用增強(qiáng)。已有研究證實(shí)MZB細(xì)胞在Toll樣受體激動(dòng)劑的誘導(dǎo)下可以產(chǎn)生IL-10，減緩疾病進(jìn)展。

4調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的功能

4.1抑制炎癥過(guò)度反應(yīng)

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在炎癥微環(huán)境下通過(guò)分泌IL-10、TGF-β等抑炎性細(xì)胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-10可抑制巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞活化，減少其分泌促炎細(xì)胞因子，抑制CD4+T細(xì)胞增殖，進(jìn)而下調(diào)Th1/Th2細(xì)胞平衡，但此功能可能需要IL-21的參與及CD40與T細(xì)胞之間的相互作用。而負(fù)性免疫調(diào)節(jié)因子TGF-β能抑制多種免疫活性細(xì)胞的增殖和分化，并可抑制多種炎癥因子如IL-2、INF-1的分泌，通過(guò)調(diào)節(jié)Th17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡來(lái)抑制疾病進(jìn)展。

4.2調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖

研究證實(shí)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞不僅可以通過(guò)Fas/FasL介導(dǎo)的凋亡機(jī)制抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的增殖，還通過(guò)直接的主要組織相容性復(fù)合體(MHC)和B7共刺激分子途徑促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化和增殖，進(jìn)而抑制免疫反應(yīng)。

4.3中和毒性物質(zhì)

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞還可中和毒性物質(zhì)，加速清除具有自身抗原活性的凋亡小體。

5調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)

SLE是由于患者體內(nèi)免疫耐受異常和B細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中存在輕重不一的缺陷，從而導(dǎo)致體內(nèi)自身反應(yīng)性B細(xì)胞顯著增多，產(chǎn)生以ANA和抗dsDNA抗體為代表的多種自身抗體，并隨著病程進(jìn)展免疫復(fù)合物沉積于組織、臟器而發(fā)病。傳統(tǒng)研究認(rèn)為，B細(xì)胞是SLE發(fā)生、發(fā)展的“始作俑者”，但是調(diào)節(jié)性B細(xì)胞負(fù)向免疫調(diào)控機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及深入研究逐漸改變了此觀(guān)點(diǎn)。新近的研究表明，功能各異的B細(xì)胞亞群貫穿于SLE發(fā)病的不同時(shí)期，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在SLE發(fā)病早期發(fā)揮保護(hù)作用，而效應(yīng)性B細(xì)胞主要在SLE發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮致病作用，B細(xì)胞及其亞群與SLE的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究證實(shí)SLE患者體內(nèi)存在明顯的免疫細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)失調(diào)，其中以Th細(xì)胞亞群的失衡最為關(guān)鍵，Th1/Th2細(xì)胞比值上調(diào)及Th1細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)程度與SLE疾病活動(dòng)度密切相關(guān)。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌的IL-10可以下調(diào)炎性細(xì)胞因子分泌，抑制炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，恢復(fù)Th1/Th2細(xì)胞失衡，抑制疾病的進(jìn)程及轉(zhuǎn)歸。IL-10可有效抑制效應(yīng)性T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞，還可抑制體內(nèi)炎性因子的產(chǎn)生。研究證實(shí)，SLE患者體內(nèi)存在調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的功能被抑制甚至失活。Blair等由競(jìng)爭(zhēng)性抗CD40抗體活化后的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞轉(zhuǎn)移到MRL/Ipr(SLE動(dòng)物模型)小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可明顯改善小鼠的腎病癥狀，提高小鼠的存活率。Presa等[8]證實(shí)CD19+、CD24+、CD38+B細(xì)胞的抑制功能與IL-10、CD80和CD86有關(guān)，而不依賴(lài)于TGF-131，提出SLE患者中該類(lèi)亞群細(xì)胞存在功能缺陷，分泌IL-10減少，不能抑制效應(yīng)性T細(xì)胞產(chǎn)生致炎因子，致使Th1細(xì)胞因子增多，SLE病情加重，從而證實(shí)CD19+、CD24+、CD38+B細(xì)胞在SLE的發(fā)病中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

人體內(nèi)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞并非單一依靠IL-10發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，研究提示SLE的發(fā)生發(fā)展可能與淋巴細(xì)胞亞群之間的復(fù)雜免疫調(diào)控有關(guān)。Lykken等[9]認(rèn)為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞存在于SLE患者外周血和受累皮膚中，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血循環(huán)中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例增高，且其分泌IL-10的能力增加。SLE復(fù)發(fā)時(shí)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞比例增加，當(dāng)疾病緩解時(shí)降低，并且其比例增加與濾泡輔助性T細(xì)胞(T follicular helper cells，Tfh)在體內(nèi)的擴(kuò)增有關(guān)，而Tfh細(xì)胞來(lái)源的IL-21能夠促進(jìn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分化及IL-10的產(chǎn)生。該研究提示Tfh細(xì)胞和B細(xì)胞亞群共同參與了SLE的發(fā)生發(fā)展。

6調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與RA

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以慢性、對(duì)稱(chēng)性、多關(guān)節(jié)非化膿性炎癥為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病，可伴關(guān)節(jié)外損害，如血管炎、心包炎、肺間質(zhì)纖維化、周?chē)窠?jīng)炎、皮下結(jié)節(jié)及眼部疾患等。晚期關(guān)節(jié)可出現(xiàn)不同程度的強(qiáng)直和畸形，喪失關(guān)節(jié)功能，致殘率高。多見(jiàn)于中年女性，我國(guó)患病率約為0.32%～0.36%，約有41%的患者在發(fā)病1年后出現(xiàn)骨侵蝕。對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與RA關(guān)系的認(rèn)識(shí)，首先源自于CIA小鼠的研究，關(guān)于CIA的研究證實(shí)了B10細(xì)胞的負(fù)向調(diào)節(jié)作用及治療潛能。Liu X等[10]研究發(fā)現(xiàn)向CIA鼠體內(nèi)注射已活化的野生鼠B細(xì)胞可抑制Th1 細(xì)胞的分化及關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展，而注射來(lái)源于IL-10缺陷鼠的B細(xì)胞則未發(fā)現(xiàn)此抑制功能。同樣，從關(guān)節(jié)炎小鼠脾細(xì)胞分離的B細(xì)胞在體外被anti-IL-10/anti-IL-10R處理后，則不能阻止受體小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。Zhang J等[11]研究發(fā)現(xiàn)，向CIA鼠體內(nèi)注射調(diào)節(jié)性B細(xì)胞后，CIA小鼠本身體內(nèi)的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞也會(huì)相應(yīng)增加，這些調(diào)節(jié)性B細(xì)胞為在脾臟中高表達(dá)CD21、CD23和IgM的T2-MZP B前體細(xì)胞，這群細(xì)胞在正常小鼠體內(nèi)分泌IL-10較少，但在炎癥環(huán)境刺激下數(shù)量會(huì)大大增加。向CIA鼠注射來(lái)源于疾病緩解期DBA/1鼠的CD21hiCD23+IgM+B細(xì)胞，能通過(guò)IL-10的分泌抑制CIA進(jìn)展，減輕疾病的嚴(yán)重程度。最近研究表明,調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可以抑制Th17細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性關(guān)節(jié)炎，并且能抑制Th17的增殖和分化。在CIA小鼠的脾臟和引流淋巴結(jié)中，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞數(shù)量明顯降低，Th17細(xì)胞數(shù)量明顯增加。然而，給予體外擴(kuò)增的CD1dhiCD5+B細(xì)胞后，Th17細(xì)胞數(shù)量減少。將CD1dhiCD5+B細(xì)胞與幼稚CD4+T細(xì)胞體外共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)CD4+T分化受抑制，增殖減少。而且，過(guò)繼轉(zhuǎn)移Th17細(xì)胞于IL-17-/-DBA/1鼠能誘導(dǎo)CIA。進(jìn)一步研究顯示，CD1dhiCD5+B細(xì)胞體內(nèi)輸注給CIA小鼠后可有效抑制CIA的進(jìn)展，緩解臨床癥狀，減輕關(guān)節(jié)組織損傷。并通過(guò)體內(nèi)定位顯示發(fā)現(xiàn)輸注的CD1dhiCD5+B細(xì)胞可聚集在關(guān)節(jié)中。另一項(xiàng)研究表明，與野生型小鼠對(duì)照，缺乏B10嵌合體小鼠關(guān)節(jié)炎進(jìn)展更迅速，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量顯著減少，Th1和Th17細(xì)胞數(shù)量顯著增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的誘導(dǎo)與T2-MZP調(diào)節(jié)性B細(xì)胞有關(guān)，將WT小鼠的T2-MZP調(diào)節(jié)性B細(xì)胞過(guò)繼性轉(zhuǎn)移給患有關(guān)節(jié)炎的IL-10-/-小鼠可增加Treg的數(shù)量和減少Th1與Th17細(xì)胞的數(shù)量，最終使這些細(xì)胞的數(shù)量和野生型小鼠的水平相當(dāng)，從而抑制了炎癥反應(yīng)。關(guān)于CIA小鼠的研究表明調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在阻止關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。

7調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與炎癥性腸病(inflammatory bowel disease IBD)

在研究IBD發(fā)病機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)Bregs參與疾病的發(fā)生發(fā)展。IBD是一種自身免疫性疾病，以腸道炎癥及腸黏膜損傷為主要特點(diǎn)，免疫功能紊亂在IBD的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。主要包括兩類(lèi)，第一類(lèi)由Th1途徑介導(dǎo)，稱(chēng)作克羅恩病(CD)，為IBD的主要類(lèi)型，并主要由Tregs調(diào)節(jié)；第二類(lèi)即UC，由Th2途徑介導(dǎo)。Mizoguchi等以TCRa敲除(TCRa KO)的小鼠作為模型，可以觀(guān)察到伴隨著UC的發(fā)生，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生自身抗體，這一點(diǎn)初步證實(shí)了B細(xì)胞在這種疾病中具有病原性，但對(duì)比缺乏B細(xì)胞的TCRat雙敲除(TCRatⅡD KO)小鼠，TCRa KO小鼠的炎癥要輕得多，在一定程度上證明了B細(xì)胞也可能在調(diào)節(jié)UC中起到積極的作用。為證實(shí)這種作用，Dumoitier等[12]將TCRa KO小鼠體內(nèi)外周B細(xì)胞轉(zhuǎn)移給3～4周齡的TCRat ⅡD KO小鼠，能夠發(fā)現(xiàn)后者的UC惡化趨勢(shì)明顯減緩，同時(shí)，如果將TCRa KO小鼠體內(nèi)的成熟B細(xì)胞移植給已發(fā)生UC的TCRa ⅡD KO小鼠身上，會(huì)顯著減少后者體內(nèi)具有致病性的CD4+TCRa-8+T細(xì)胞。而且，相比其它疾病，Bregs在UC中的作用似乎更明顯。向BALB/C小鼠或裸鼠(nu/nu)植入Tregs缺失的T細(xì)胞，可引起自發(fā)性的胃炎、甲狀腺炎、卵巢炎及睪丸炎等疾病，但不會(huì)出現(xiàn)UC。而對(duì)于缺乏B細(xì)胞的SCID小鼠來(lái)說(shuō)，植入Treg缺乏的CD4+T細(xì)胞后會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)性的UC癥狀。這就進(jìn)一步證明了B細(xì)胞在調(diào)節(jié)UC中的作用。

8調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與自身免疫性糖尿病

B淋巴細(xì)胞不是僅分泌自身抗體的被動(dòng)效應(yīng)性細(xì)胞，其在調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答過(guò)程中也發(fā)揮重要作用。B淋巴細(xì)胞反應(yīng)失調(diào)可能導(dǎo)致免疫反應(yīng)的衰減，從而導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。在脾臟中發(fā)現(xiàn)的邊緣性B細(xì)胞(MZB細(xì)胞)可能在活化初始的CD4+T細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。NOD小鼠在5周齡時(shí)較B6小鼠可以檢測(cè)到更多的MZB細(xì)胞。除脾臟外，NOD小鼠的胰腺淋巴結(jié)(PLNs)及胰腺中也存在MZB細(xì)胞。這些MZB細(xì)胞能夠加工及提呈胰島素，被認(rèn)為是PLNs中的主要自身抗原提呈細(xì)胞。Kim等[13]對(duì)NOD小鼠胰島中浸潤(rùn)性B淋巴細(xì)胞的研究顯示，B淋巴細(xì)胞可以刺激T細(xì)胞的活化。胰島中的浸潤(rùn)性B細(xì)胞被歸為第三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(tertiary lymphoid structures，TKS)，TLs在糖尿病發(fā)生中不是必需的，因?yàn)樵谮吇蜃覥XC配體13(CXCLl3)缺陷即破壞了TLS結(jié)構(gòu)的小鼠中，B細(xì)胞受體的多樣性及糖尿病的發(fā)生并未受到影響。TLS具有生發(fā)中心，其中的B淋巴細(xì)胞有著不同的輕鏈。這使胰島中的B淋巴細(xì)胞較PLNs有著更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，并能增強(qiáng)抗原活性。這些發(fā)現(xiàn)為胰島中存在T-B細(xì)胞相互作用提供了證據(jù)。另一些研究提示，胰島素不是對(duì)外周蛋白有反應(yīng)性的胰島浸潤(rùn)性B淋巴細(xì)胞識(shí)別的唯一抗原。胰島中T-B細(xì)胞相互作用對(duì)維持CD4+T細(xì)胞的活性及致病性是必需的。然而，研究發(fā)現(xiàn)活化的B淋巴細(xì)胞卻對(duì)T1DM起維持耐受和提供保護(hù)的作用。在小鼠5～6周齡時(shí)重復(fù)靜脈輸注1.2×10 7個(gè)接受過(guò)B細(xì)胞抗原受體(BCR)刺激的NOD小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞，既可以延遲T1DM的發(fā)病時(shí)間又可以降低發(fā)病率。在小鼠9周齡時(shí)開(kāi)始治療只能延遲T1 DM的發(fā)病時(shí)間。研究顯示這種效應(yīng)是IL-10依賴(lài)性的，因?yàn)檩斪⒒罨腎L-10-/-B淋巴細(xì)胞不能阻止NOD小鼠發(fā)生T1DM。輸注活化的B淋巴細(xì)胞的治療作用與CD4+T細(xì)胞向Th2型細(xì)胞轉(zhuǎn)變有關(guān)。提示存在可能：治療性輸注自體調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞可能減少T1DM高危人群發(fā)生糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。Dhaeze研究顯示[14]，用脂多糖激活的B淋巴細(xì)胞作用于NOD小鼠能上調(diào)FasL水平并使TGF-β分泌增加，從而抑制自身免疫性糖尿病的發(fā)生。與IL-10分泌型調(diào)節(jié)性B細(xì)胞不同，TGF-β分泌型調(diào)節(jié)性B細(xì)胞雖然可以在體外成功誘導(dǎo)，但在體內(nèi)是不存在的。因此體外誘導(dǎo)分泌TGF-β的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可以為自身免疫性糖尿病的治療提供新方法。

去除B淋巴細(xì)胞治療自身免疫性糖尿病對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞影響T1DM時(shí)β細(xì)胞破壞的免疫發(fā)病機(jī)制與T淋巴細(xì)胞的自身免疫相關(guān)，B淋巴細(xì)胞在許多T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的疾病中同樣發(fā)揮著重要作用。B淋巴細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞，高表達(dá)與主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ類(lèi)分子結(jié)合的抗原，通過(guò)表位擴(kuò)展將抗原多肽的內(nèi)隱表位提供給非耐受的T淋巴細(xì)胞識(shí)別，從而在發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用?？笴D20單克隆抗體(利妥昔單克隆抗體，ritux—imab)能選擇性的衰減B淋巴細(xì)胞。給予利妥昔單克隆抗體后，B淋巴細(xì)胞的暫時(shí)性消除能減緩自身免疫介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞的破壞。將利妥昔單克隆抗體作用于表達(dá)人CD20(hCD20)的轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)，在4～9周齡去除B淋巴細(xì)胞可以使一部分小鼠延遲或避免發(fā)生糖尿病。在發(fā)病后再給藥，35%的小鼠糖尿病出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)，并可維持較長(zhǎng)時(shí)間。

9調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與多發(fā)性硬化(MS)

MS的主要特點(diǎn)是主要累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)白質(zhì)炎性脫髓鞘病變，其病理特征是髓鞘崩解和脫失、少突膠質(zhì)細(xì)胞變性增生及血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)。其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一般認(rèn)為與免疫、病毒感染、遺傳等因素有關(guān)。EAE的病理變化和發(fā)病機(jī)制與MS極其相似，為MS的研究提供了可靠的動(dòng)物模型。

Yousefi的動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)[15]，B細(xì)胞缺失尤其是Bregs缺失，可導(dǎo)致髓磷脂堿性蛋白(MBP)肽所致EAE加重，無(wú)法像正常小鼠一樣自發(fā)性緩解。同時(shí)uMT小鼠(B細(xì)胞成熟功能缺陷)比野生型小鼠病情更嚴(yán)重，而且不能完全恢復(fù)。因此，推測(cè)B細(xì)胞參與了EAE的疾病緩解過(guò)程。后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞可以通過(guò)B7H誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)選擇性出現(xiàn)于活化Tregs,并通過(guò)B7H與ICOS的相互作用促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-10和CD4+、CD25+Tregs的形成，抑制EAE加重。同時(shí)，B細(xì)胞中髓樣分化抗原88(MyD88)信號(hào)可促進(jìn)EAE的恢復(fù)。Fillatreau等發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞缺失的小鼠發(fā)生EAE，且用髓磷脂少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)免疫后沒(méi)有緩解，而對(duì)照組小鼠通過(guò)MOG免疫相關(guān)的CD40刺激B細(xì)胞產(chǎn)生IL-10而使疾病康復(fù)。Baba研究[16]發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞在TLR激動(dòng)劑刺激下產(chǎn)生的IL-10及B細(xì)胞的TLR信號(hào)均可抑制Th1和Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，聰而促進(jìn)EAE的恢復(fù)。

Miyagaki等研究[17]發(fā)現(xiàn)，在EAE起始階段利用妥昔單抗去除B細(xì)胞后，小鼠并沒(méi)有因?yàn)锽細(xì)胞減少、抗體產(chǎn)生減少而出現(xiàn)臨床癥狀的減輕，相反表出更為嚴(yán)重的病理表現(xiàn)。在疾病起始階段，這群細(xì)胞在脾臟內(nèi)迅速擴(kuò)增，與其調(diào)節(jié)作用平行。但是，一旦患上EAE，B10細(xì)胞并不能抑制進(jìn)展階段的EAE。相反，Tregs在疾病進(jìn)展階段顯著擴(kuò)增，與晚期病程的負(fù)性調(diào)節(jié)平行，消除Tregs加重晚期病程。因此，提示B細(xì)胞優(yōu)先控制疾病的啟動(dòng)，而Tregs主要是控制疾病的晚期進(jìn)展[14]。另外，B細(xì)胞轉(zhuǎn)移可引起EAE小鼠CNS中Tregs轉(zhuǎn)錄因子P3(Foxp3)表達(dá)呈IL-10依賴(lài)性增加，單B細(xì)胞和Foxp3+Tregs是重疊還是獨(dú)立發(fā)揮作用影響EAE的免疫過(guò)程尚未得到明確。

在MS等自身免疫疾病中，Bregs比健康對(duì)照組明顯減少，在疾病惡化時(shí)，幼稚/記憶Bregs比例降低[15]。2010年Ochoa-Repáraz等[16]發(fā)現(xiàn)通過(guò)口服抗生素治療EAE，可誘導(dǎo)腸道相關(guān)淋巴組織(GALT)中CD5+B細(xì)胞亞群增殖。通過(guò)轉(zhuǎn)移抗生素誘導(dǎo)產(chǎn)生的CD5+B細(xì)胞治療EAE，其通過(guò)改變Th1/Th17的比例來(lái)增強(qiáng)Th2型免疫反應(yīng)，顯著減輕EAE嚴(yán)重性。在懷孕期間可增強(qiáng)緩解MS，提示提高雌激素(E2)水平可以發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

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[責(zé)任編輯：李薊龍]

DOI：10.3969/j.issn.1673-1492.2016.04.026

中圖分類(lèi)號(hào)：R 392

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C

作者簡(jiǎn)介：鄭學(xué)軍(1972-)，男，河北獻(xiàn)縣人，副主任醫(yī)師，研究方向：高尿酸血癥診治研究。

來(lái)稿日期：20160317