色譜技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

于　雪　辛瑩娟　蔣　緒

（咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西　咸陽(yáng)　712000）

色譜技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用

于雪辛瑩娟蔣緒

（咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西咸陽(yáng)712000）

藥物的質(zhì)量直接關(guān)系著藥品的有效性和安全性，手性藥物的質(zhì)量檢測(cè)成了藥物質(zhì)量控制的最有效的方法。其中，色譜技術(shù)是藥品分離、分析檢測(cè)的有效手段，比較常用的是高效液相色譜技術(shù)和毛細(xì)管電泳技術(shù)?；诖?，介紹兩種色譜技術(shù)的應(yīng)用，在一維液相色譜技術(shù)的基礎(chǔ)上闡述二維液相色譜技術(shù)及其兩種模式。

藥物分析；高效液相色譜；毛細(xì)管電泳；二維液相色譜

藥物從根本上來(lái)說(shuō)是一種商品，但其是一種特殊的商品。藥品質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到人的生命安全及藥物的有效性，所以對(duì)藥品質(zhì)量的控制有比其他商品更嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。因此，要利用各種手段和方法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行分析檢測(cè)，以控制和提高藥物的質(zhì)量。藥物分析在藥品生產(chǎn)和制造中起著決定性的作用，這也使得藥物分析成了一種專(zhuān)門(mén)的學(xué)科。

研究表明，在目前存在的所有藥物中，至少有50%的藥物含有一個(gè)不對(duì)稱(chēng)中心，有的含有多個(gè)。在這些藥物中，非天然性的藥物，經(jīng)過(guò)人工合成的手性藥，如阻斷劑、局部麻醉藥物及部分抗癲痛藥等都以其外消旋體供藥用。在人工合成的藥物經(jīng)消化系統(tǒng)進(jìn)入人體的循環(huán)后，由于酶、受體、蛋白質(zhì)將手性藥物分解成2種不同的化合物來(lái)進(jìn)行處理，因而同一種手性藥物對(duì)映體會(huì)產(chǎn)生不同的藥理作用，同時(shí)也有不同的代謝途徑，也有一些手性藥物會(huì)在映體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)化，這也就是為什么藥物能治療頑疾也能產(chǎn)生副作用的主要原因［1］。

1　常用的色譜技術(shù)

目前，世界上大多數(shù)國(guó)家的藥品管理部門(mén)在審批新的手性藥物時(shí)，會(huì)要求提供對(duì)手性藥物的每一種成分對(duì)映體的各種研究資料，包括藥理學(xué)、藥動(dòng)學(xué)、毒理學(xué)等多個(gè)方面。傳統(tǒng)的分離方法靈敏度和重現(xiàn)性欠佳，隨著色譜學(xué)的發(fā)展，再加上分析儀器技術(shù)的不斷進(jìn)步，人們發(fā)現(xiàn)用色譜是較為有效的分離分析方法。目前用在藥物分析檢測(cè)上的主要有2種常見(jiàn)的色譜技術(shù)，一種是高效液相色譜技術(shù)，一種是毛細(xì)管色譜技術(shù)。

1.1高效液相色譜技術(shù)

色譜是現(xiàn)代化學(xué)常用的分析、分離技術(shù)。最早發(fā)展起來(lái)的是氣相色譜技術(shù)，氣相色譜技術(shù)主要利用物質(zhì)的揮發(fā)性進(jìn)行檢測(cè)。但是，已知的化合物中有70%是非揮發(fā)性物質(zhì)，因此氣相色譜技術(shù)的應(yīng)用具有一定的局限性。高效液相色譜相對(duì)于氣相色譜來(lái)說(shuō)，具有分離分析速度快、適用性更廣泛等特點(diǎn)，對(duì)大多數(shù)的沸點(diǎn)高、分子較大、熱穩(wěn)定性能較差的化合物來(lái)說(shuō)，高效液相色譜分析比較實(shí)用且分析效果好，目前已成為藥品分析檢測(cè)非常重要的方法。

普通高效液相色譜分析技術(shù)雖然適用性強(qiáng)、效率高，但是也存在著缺陷，由于液相色譜的填料相對(duì)單一，分離只能針對(duì)某種物質(zhì)來(lái)進(jìn)行，很難通過(guò)簡(jiǎn)單的一次實(shí)驗(yàn)將所有待檢測(cè)物質(zhì)全部進(jìn)行分離分析檢測(cè)，這也是今后如何對(duì)普通的高效液相色譜分析進(jìn)行改進(jìn)的地方。

1.2毛細(xì)管色譜技術(shù)

毛細(xì)管色譜技術(shù)是20世紀(jì)80年代初期，將傳統(tǒng)的電泳技術(shù)和色譜技術(shù)結(jié)合起來(lái)發(fā)展而成的一種新的分離技術(shù)，其操作方便，分離模式多樣化，效率和效果都較好，分離速度也較為迅速，最突出的優(yōu)點(diǎn)是其試劑和樣品用量較少。其基本原理為將要分離的物質(zhì)分解成離子或帶電粒子，在電場(chǎng)的作用下這些離子或帶電粒子在毛細(xì)管中按淌度或分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離，其有多種分離模式。

近年來(lái)，毛細(xì)管電泳技術(shù)在醫(yī)學(xué)方面得到了廣泛的應(yīng)用，發(fā)展速度極快，很多國(guó)家將毛細(xì)管電泳技術(shù)用于分離測(cè)定藥品中雜質(zhì)和異構(gòu)體，成為了不少?lài)?guó)家法定的藥品檢測(cè)方法。其在一定程度上比高效液相色譜分析法更有優(yōu)勢(shì)，主要用于原料藥品中活性成分的檢定、離子測(cè)定、手性分離，還有對(duì)藥物成品性質(zhì)的鑒定，如pKa值、溶解度值的測(cè)定等。

2　二維液相色譜技術(shù)及其兩種模式

2.1二維液相色譜技術(shù)概述

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，也促使了越來(lái)越多的手性藥物的產(chǎn)生。這些手性藥物相對(duì)以往，從種類(lèi)和成分上都更為復(fù)雜。特別是隨著生物科技、蛋白組學(xué)、中西藥現(xiàn)代化研究的深入，普通的一維液相色譜技術(shù)已不能夠滿(mǎn)足要求，二維液相色譜技術(shù)的出現(xiàn)有力地推進(jìn)了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中復(fù)雜體系成分分離的進(jìn)一步發(fā)展［2］。Gidding指出二維液相色譜相對(duì)一維液相色譜具有更高的執(zhí)行效率、更好的分離效果和更高的峰容量，對(duì)復(fù)雜分離體系的適用性更強(qiáng)［3］。二維液相色譜正逐漸取代一維液相色譜成為醫(yī)學(xué)分離技術(shù)色譜發(fā)展新的方向。

二維液相色譜采用多次分離的技術(shù)進(jìn)行分析檢測(cè)，將不同的色譜連接起來(lái)，使得在一次色譜未分離的組分在接下來(lái)的第二維色譜中繼續(xù)進(jìn)行分離，并不斷重復(fù)這個(gè)過(guò)程，直至所有的組分均分離。二維液相色譜是兩種分離模式的結(jié)合，是多種一維液相色譜的組合。二維液相色譜根據(jù)一維分離組分是否完全轉(zhuǎn)到二維中，分為中心切割模式和全二維液相色譜兩種模式。

2.2二維液相色譜技術(shù)的兩種模式

中心切割模式將一維中的組分有選擇的分到第二維進(jìn)行分離檢測(cè)，這種做法可以有效減少外界的干擾，提高分離的純度。全二維液相色譜模式是將一維色譜柱操作后的全部組分完全轉(zhuǎn)入第二維進(jìn)行分離，這樣雖有干擾，但可以獲得所有的組分信息，比較適合于復(fù)雜樣品的分離檢測(cè)工作。相對(duì)于一維分離檢測(cè)法來(lái)說(shuō)，二維分離檢測(cè)可以大大提高樣品分離的純度，減少外界干擾，將樣品分離測(cè)定、濃縮凈化一次性處理，簡(jiǎn)化了程序，同時(shí)減小了在分離檢測(cè)過(guò)程中樣品的損失和受污染的風(fēng)險(xiǎn)，在實(shí)際的分離過(guò)程中要針對(duì)樣品和分離純度的要求來(lái)選擇分離檢測(cè)方法。

二維液相色譜的中心切割模式和全二維分離模式，在實(shí)際分離過(guò)程中主要考慮以下幾個(gè)重要因素。一是流動(dòng)相的兼容性。由于在做樣品分離檢測(cè)時(shí)，兩種模式的分離原理不同，這樣可以提供多種分離的選擇。但是，這兩種模式同時(shí)會(huì)造成溶劑系統(tǒng)的互斥，甚至有可能造成色譜柱損壞。所以，采取兼容的流動(dòng)相是二維液相色譜模式選擇首要考慮的問(wèn)題。二是分離速度的兼容性。二維分離是在第一維分離的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，如果第二維的分離速度慢，則第一維分離后的組分會(huì)在第二維分離的過(guò)程中重新混合，造成第一維分離工作的浪費(fèi)。所以，要第一維和第二維的分離速度兼容，第二維的分離速度要高于第一維的分離速度才行。三是第一維和二維色譜洗脫強(qiáng)度的兼容性。當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)第一維分離后進(jìn)入第二維的分離流程，這個(gè)過(guò)程中組分在經(jīng)過(guò)兩色譜柱之間的環(huán)線(xiàn)、檢測(cè)器的流程中很容易造成峰展寬，因此必須使第二維色譜的洗脫能力強(qiáng)于第一維。

3　結(jié)語(yǔ)

色譜技術(shù)在藥物檢測(cè)分離中起到非常大的作用，在實(shí)際的藥品檢測(cè)時(shí)要根據(jù)樣品性質(zhì)、純度需求、分離需要來(lái)選擇相應(yīng)的分離技術(shù)和模式。

［1］Ling Y S，Liang H J，Lin M H，et al.Two-dimensional LC-MS/MS to enhance cerarnide and phosphatidylcholine species profiling in mouse liver［J］.Biomed Chromatogr，2014 （9）：1284-1293.

［2］高輝，溫學(xué)森，馬小軍，等.二維液相色譜技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用［J］.藥物分析雜志，2007（4）：616-620.

［3］陳靜，劉召金，戴振宇，等.適用于質(zhì)譜分析的在線(xiàn)固相萃取除鹽方法［J］.色譜，2013（9）：894-897.

Application of Chromatography in Pharmaceutical Analysis

Yu XueXin YingjuanJiang Xu
（Xianyang Vocational and Technical College，Xianyang Shaanxi 712000）

The quality of the drug directly related to the effectiveness and safety of drugs，the quality of chiral drug testing has become the most effective method of drug quality control.Chromatography is an effective method for the separation and analysis of drugs.It is commonly used in high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis.Based on this，this paper introduced the application of two kinds of chromatographic techniques，and described the technology of two-dimensional liquid chromatography based on one dimensional liquid chromatography.

pharmaceutical analysis；high performance liquid chromatography；capillary electrophoresis；two-dimensional liquid chromatography

TQ460.7

A

1003-5168（2016）05-0132-02

2016-04-23

于雪（1984-），女，碩士，助教，研究方向：液相色譜、藥物蛋白相互作用。