兩頭尖藥材的紫外光譜鑒別研究

趙麗茹 李金花 路曉玉 曲帥 趙利利 蔡廣知

【摘要】目的 采用紫外光譜測(cè)定方法，鑒別不同產(chǎn)地兩頭尖藥材，建立正品兩頭尖藥材的紫外光譜共有圖譜。方法 取不同產(chǎn)地的兩頭尖藥材，經(jīng)70%乙醇提取后，進(jìn)行紫外光譜掃描，得到不同的紫外光譜圖。結(jié)果 不同產(chǎn)地的兩頭尖藥材的紫外光譜非常相近。吸光度值略有差異。正品和偽品的紫外光譜有顯著差異。結(jié)論 本研究采用紫外光譜法，首次建立了兩頭尖藥材的紫外指紋圖譜，不同產(chǎn)地兩頭尖藥材的紫外圖譜較為相似，少數(shù)略有不同。說(shuō)明各產(chǎn)地兩頭尖藥材的相似程度較大。采用紫外光譜法能夠兩頭尖藥材的真?zhèn)巍?/p>

【關(guān)鍵詞】?jī)深^尖;紫外光譜;鑒別

【中圖分類號(hào)】R282.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2019.28..03

【Abstract】Objective The authenticity identification of Anemones raddeanae Rhizona（AR） were conducted by establish the common pattern of UV spectrum.MethodsAR collected from different areas were extracted by 70% ethanol and UV spectrum scanning were determined by UV spectrophotometry.Results The UV spectra of AR from different areas are very similar.The absorbance is slightly different. There is a significant difference in the UV spectrum between the authentic and the counterfeit.Conclusion For the first time，this study has set up an UV fingerprint of AR. The principal components of AR collected from different regions are very similar.The authentic and the counterfeit of AR can be quickly identified UV spectrum.

【Key words】Anemones raddeanae Rhizoma;UV spectrum;identification

兩頭尖藥材為毛茛科植物多被銀蓮花Anemone raddeana Regel的干燥根莖，性辛，熱;有毒。歸脾經(jīng)。具有祛風(fēng)濕，消癰腫的功效[1]。其主要化學(xué)成分有皂苷類、內(nèi)酯類、揮發(fā)油和油脂類等[2]。研究表明其具有顯著的抗腫瘤、抑菌、抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗鎮(zhèn)靜等作用[3]。臨床上被廣泛應(yīng)用，如被患者熟知的中成藥活絡(luò)丹、再造丸，它們的主要成分就是兩頭尖藥材[3]。筆者研究團(tuán)隊(duì)在兩頭尖藥材的質(zhì)量研究方面做了許多工作，包括兩頭尖的HPLC指紋圖譜研究[4]，用HPLC-ELSD法測(cè)定了中藥兩頭尖中竹節(jié)香附素A[5]。其他文獻(xiàn)中關(guān)于兩頭尖藥材質(zhì)量研究方面的報(bào)道很少。尤其在光譜鑒別方面，尚未見(jiàn)報(bào)道。本文首次采用紫外光譜法對(duì)兩頭尖藥材進(jìn)行鑒別。

紫外指紋圖譜技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn)，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于中藥材的質(zhì)量鑒別方面。紫外吸收光譜曲線的峰形、峰高、峰面積有一定的差異，可以將不同產(chǎn)地藥材的紫外光譜的指紋特性進(jìn)行比較，從而對(duì)不同產(chǎn)地藥材進(jìn)行分析鑒別。如陳先良等[6]對(duì)不同產(chǎn)地的杜仲進(jìn)行了紫外光譜鑒別研究。此外通過(guò)比較紫外圖譜的差異，還能快速簡(jiǎn)便的鑒別藥材的種類，鑒別不同藥材的炮制品等。如楊天偉等[7]對(duì)不同產(chǎn)地、種類牛肝菌進(jìn)行了紫外光譜鑒別分析。紫外指紋圖譜在中藥鑒別等方面有了廣泛的應(yīng)用，但在兩頭尖藥材鑒別方面的應(yīng)用卻未見(jiàn)報(bào)道。本文利用紫外光譜技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的兩頭尖藥材進(jìn)行測(cè)定，圖譜比對(duì)，首次建立了兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜的共有模式，為更好的、更快速的評(píng)價(jià)兩頭尖藥材的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試藥與試劑

甲醇（分析純）、正丁醇（分析純）、乙醇（分析純）。

1.2 儀器

TU-1810型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）

AB-135-S 型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）

1.3 中藥兩頭尖藥材

兩頭尖藥材經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)肖寄平教授鑒定均為毛莨科植物多被銀蓮花Anemones raddeanae Regel的干燥根莖，其產(chǎn)地詳情見(jiàn)表1。

1.4 混淆品

包括3個(gè)混淆品：天葵子、九節(jié)菖蒲、香附。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品的處理

取兩頭尖藥材粉末（過(guò)80目篩）約2.5 g，置于帶蓋錐形瓶中，加入70%乙醇10倍量，超聲40 min后，過(guò)濾，即得。

2.2 光譜條件

掃描波長(zhǎng)范圍：500 nm～190 nm

比色皿：石英比色皿

空白：甲醇溶液

2.3 提取條件優(yōu)選

2.3.1 提取溶劑的選擇

2.3.1.1 提取溶劑類型的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)分別取甲醇、乙醇、正丁醇三種溶劑，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果乙醇提取的溶液在190～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有明顯的紫外吸收峰，而且吸收峰數(shù)量多于其它溶劑提取液，因此，用乙醇作為最佳提取溶劑。

2.3.1.2 提取溶劑濃度的優(yōu)化

分別取100%、70%、50%三個(gè)濃度的乙醇溶液，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果50%乙醇提液，難以濾過(guò)，100%和70%乙醇提取液，紫外吸收峰的個(gè)數(shù)和吸收強(qiáng)度沒(méi)有明顯差別。結(jié)合節(jié)能等綜合因素考慮，選擇70%乙醇作為最終的提取溶劑。

2.3.1.3 提取溶劑劑量的優(yōu)化

分別取10倍量、20倍量、30倍量70%乙醇，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果紫外圖譜差異不顯著。故選擇10倍量的提取劑量作為最佳選擇。

2.3.2 提取方法的選擇

選擇簡(jiǎn)單回流、索氏提取、超聲提取，三種提取方式進(jìn)行比較。結(jié)果三種提取方法的差別不太大，考慮操作的簡(jiǎn)便性和時(shí)間成本，最終選擇超聲提取法。

2.3.3 提取時(shí)間的選擇

選擇20 min，40 min，60 min三個(gè)時(shí)間點(diǎn)來(lái)對(duì)超聲提取法的提取時(shí)間進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，提取20 min時(shí)藥材提取不夠充分，提取液的紫外吸收峰不明顯;超聲40 min和超聲60 min樣品提取效果相近，所以選擇超聲提取40min作為最佳提取時(shí)間。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證[8]

取同—兩頭尖供試品溶液，按照選定的光譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄紫外光譜譜圖中共有吸收峰的吸光度值，計(jì)算平均RSD值為1.034%（n=5）。由精密度試驗(yàn)結(jié)果表明，本儀器的精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性考察

取兩頭尖供試品溶液，按選定的光譜條件分別在0，2，4，8，12，24h進(jìn)行測(cè)定，記錄光譜圖，計(jì)算紫外光譜圖中共有吸收峰的RSD值為0.921%（n=6）。結(jié)果表明，樣品在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性考察

取同—產(chǎn)地的的兩頭尖藥材五份，參照供試品溶液的制備方法，按照選定的光譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，記錄光譜譜圖，計(jì)算紫外光譜圖中共有吸收峰的 RSD值為1.24%（n=5）。結(jié)果表明，本方法的重復(fù)性較好。

2.5 紫外光譜指紋圖譜的建立

2.5.1 兩頭尖藥材紫外的測(cè)定

取18批不同產(chǎn)地的兩頭尖樣品和3個(gè)混淆品，按照樣品溶液的制備方法進(jìn)行處理，用紫外光譜儀測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。

3 結(jié)果與討論

本文將18批不同產(chǎn)地的兩頭尖樣品和3個(gè)混淆品經(jīng)過(guò)提取后，樣品溶液在500～190 nm的波長(zhǎng)進(jìn)行紫外光譜掃描測(cè)定。得出不同產(chǎn)地兩頭尖藥材和偽品的紫外光譜圖。正品藥材的紫外圖譜顯示，其主成分分別在238 nm、336 nm、344 nm左右有三個(gè)最大吸收峰。不同產(chǎn)地的正品兩頭尖藥材雖然產(chǎn)地不同，但是主要組成成分相似。只是不同圖譜的主要吸收峰的吸光度值略有差異。說(shuō)明不同產(chǎn)地正品兩頭尖藥材的主成分大致相同，但是含量存在差異。而混淆品的紫外光譜圖表明，其圖譜形狀與正品圖譜明顯不同，由于其吸收波長(zhǎng)跟正品的吸收波長(zhǎng)差異明顯，說(shuō)明通過(guò)紫外掃描圖的數(shù)據(jù)可以快速對(duì)樣品和混淆品進(jìn)行鑒別。

本文采用紫外光譜法對(duì)兩頭尖藥材進(jìn)行了鑒別研究。建立了正品兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜。通過(guò)方法學(xué)考察，本方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性都較好。可以作為鑒別兩頭尖藥材的可靠方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.2015版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：168-169.

[2] 云旭龍，蔡廣知，貢濟(jì)宇.兩頭尖研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代養(yǎng)生，2017，04：30-31.

[3] 周鴻立，孫永旭，李 勇，等.兩頭尖的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（5）：1239-1241.

[4] 張彥飛，李智萌，趙利利，等.兩頭尖HPLC指紋圖譜研究[J].中國(guó)藥房，2015，27（3）：399-401.

[5] 張彥飛，劉 丹，張 蕾，等. HPLC-ELSD 法測(cè)定中藥兩頭尖中竹節(jié)香附素 A[J].中成藥，2014，36（9）：1930-1932.

[6] 陳先良，陶金秋，凡小慶，等.不同產(chǎn)地杜仲的紫外光譜鑒別研究[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2011，28（1）：303-305.

[7] 楊天偉，李 濤，張 霽，等.不同產(chǎn)地、種類牛肝菌的紫外光譜鑒別分析[J].食品工業(yè)，2015，36（9）：208-212.

[8] 李智敏，王元忠，王瀚墨，等.不同產(chǎn)地茯苓皮紫外指紋圖譜的分析與鑒別[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，37（6）：902-908.

本文編輯：趙小龍