平菇和榆黃蘑及其培養(yǎng)料中吡蟲啉的殘留分析方法*

常津毓，常 義，侯志廣，逯忠斌，王 巖，張 浩**

（1．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118；2．吉林省墑情監(jiān)測(cè)中心，吉林 長(zhǎng)春 130033）

〈病蟲害防治〉

平菇和榆黃蘑及其培養(yǎng)料中吡蟲啉的殘留分析方法*

常津毓1，常 義2，侯志廣1，逯忠斌1，王 巖1，張 浩1**

（1．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118；2．吉林省墑情監(jiān)測(cè)中心，吉林 長(zhǎng)春 130033）

建立了一種采用子實(shí)體噴藥、培養(yǎng)料拌藥，在不同時(shí)期采集樣品、提取和凈化的方法，以分析吡蟲啉在榆黃蘑、平菇及其培養(yǎng)料中的殘留量。結(jié)果表明，在榆黃蘑和平菇及其培養(yǎng)料中的吡蟲啉，其降解過(guò)程均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，在平菇、榆黃蘑和其培養(yǎng)料中，吡蟲啉半衰期分別為3．8 d、3．1 d和14．0 d。在收獲時(shí)期，平菇、榆黃蘑及其培養(yǎng)料中的吡蟲啉殘留量近似于美國(guó)規(guī)定的吡蟲啉在野生蘑菇農(nóng)藥殘留限量（maximum residue limit，MRL）0．02 mg·kg-1。表明試驗(yàn)建立的方法準(zhǔn)確可靠，為在平菇和榆黃蘑上制定MRL值提供了科學(xué)依據(jù)。

吡蟲啉；食用菌；殘留；消解動(dòng)態(tài)

吡蟲啉是硝基亞甲基類殺蟲劑，化學(xué)式為C9H10ClN5O2，由德國(guó)拜耳公司于20世紀(jì)80年代中期研發(fā)，于1991年投放市場(chǎng)，目前已在60種農(nóng)作物上使用。在20世紀(jì)90年代初期，中國(guó)開始研發(fā)吡蟲啉，于1992年生產(chǎn)登記[1]。吡蟲啉具有廣譜、低毒、高效，不易產(chǎn)生抗性，對(duì)動(dòng)植物安全等特點(diǎn)，并兼具胃毒、觸殺和內(nèi)吸等多重交互作用。主要防治對(duì)象是同翅目、半翅目昆蟲，如飛虱、粉虱、蚜蟲、葉蟬、薊馬等；對(duì)雙翅目、鞘翅目和鱗翅目的某些害蟲，如稻負(fù)泥蟲、稻象甲、潛葉蛾等也有防治效果[2-3]。吡蟲啉作為高效殺蟲劑，能有效防治菌類生長(zhǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的蟲害[4]。食用菌子實(shí)體中含有豐富蛋白質(zhì)，其含量約為鮮重3%～4%，是一種綠色健康食品，受到廣泛關(guān)注[5-6]。目前吡蟲啉作為一種高效、廣譜的農(nóng)藥已經(jīng)在茶葉、糧食、水果等作物中廣泛應(yīng)用，科研人員對(duì)其的殘留動(dòng)態(tài)規(guī)律進(jìn)行了大量研究[7-8]，但在食用菌方面未見報(bào)道。本文建立一種高效、實(shí)用的平菇和榆黃蘑中吡蟲啉殘留的分析方法，為食用菌安全施藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

10%吡蟲啉可濕性粉劑，江蘇龍燈化學(xué)有限公司。弗羅里硅土、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉、乙腈、丙酮、正己烷均為分析純；吡蟲啉農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品純度均為99%；Agilent 1100A液相色譜儀。

1.2 試驗(yàn)方法

1．2．1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（1）培養(yǎng)料試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)菌菜栽培基地進(jìn)行。處理1：10%吡蟲啉可濕性粉劑按1%拌入培養(yǎng)料中（即把吡蟲啉30%可濕性粉劑10 g放在1 000 g培養(yǎng)料混合均勻）；處理2：空白對(duì)照。

施藥后0、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、14 d、21 d、28 d、35d、42 d、60 d分別在試驗(yàn)組和空白對(duì)照組采集培養(yǎng)料各1．0 kg，密封冷凍待測(cè)。

（2）子實(shí)體試驗(yàn)設(shè)計(jì)

共設(shè)5個(gè)處理3次重復(fù)。處理1：10%吡蟲啉可濕性粉劑2 g·m-2兌水1 000 mL，噴施于平菇子實(shí)體上；處理2：10%吡蟲啉可濕性粉劑2 g·m-2兌水1 000 mL，噴施于榆黃蘑子實(shí)體上；處理3：空白對(duì)照。

在平菇和榆黃蘑子實(shí)體生長(zhǎng)到直徑約2 cm時(shí)施藥1次，于施藥后0、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d分別在試驗(yàn)組和空白組收集樣品各500 g，密封冷凍待測(cè)。

（3）培養(yǎng)料和子實(shí)體最終殘留試驗(yàn)

每次收獲時(shí)都采集子實(shí)體樣品，樣品密封后存放于冰箱中待測(cè)；培養(yǎng)料樣品則在最終收獲時(shí)采集，保存待測(cè)定。

1．2．2 分析測(cè)定條件

Agilent 1100液相色譜儀紫外檢測(cè)器C18反相色譜柱，波長(zhǎng)230 nm，水∶乙腈=30∶70（v∶v），柱溫30℃，流速0．8 mL·min-1；進(jìn)樣量為10 μL。

1．2．3 樣品處理

（1）子實(shí)體提取與凈化

準(zhǔn)確稱取平菇、榆黃蘑樣品各5．0 g，將其加入裝有30 mL乙腈和10 mL蒸餾水的組織搗碎機(jī)中，勻漿5 min。減壓抽濾，濾液放入100 mL裝有15．0 g氯化鈉的具塞量筒，用手搖晃1 min，靜置1 h使其分層。

取250 mL圓底燒瓶，將20 mL上層液移入其中，并置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，待提取液濃縮至近干。將3．0 g無(wú)水硫酸鈉、3．0 g弗羅里硅土、5．0 g無(wú)水硫酸鈉裝入玻璃層析柱。先用10 mL正己烷預(yù)活化層析柱，用丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液溶解濃縮液，過(guò)層析柱，然后用20 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）的混合液淋洗層析柱，最后用50 mL丙酮/正己烷（20∶80，v∶v）混合液洗脫層析柱，最終收集70 mL洗脫液。取圓底燒瓶，將收集到的全部（70 mL）洗脫液轉(zhuǎn)移到瓶中，并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將其旋干，用乙腈定容至1．0 mL，待液相色譜測(cè)定。

（2）培養(yǎng)料提取與凈化

取三角瓶，加入30 mL乙腈和5 mL蒸餾水，稱取食用菌培養(yǎng)料5．0 g置于三角瓶中，將三角瓶置于30℃水浴振蕩器上振蕩1 h（200 r·min-1）。靜置10 min后，減壓抽濾，濾液100 mL放入裝有15．0 g氯化鈉具塞量筒，用手搖晃1 min，靜置1 h使其分層。濃縮與凈化同上。

（3）添加回收率試驗(yàn)

以榆黃蘑和平菇2種食用菌及其培養(yǎng)料為對(duì)象，分別在0．1 mg·kg-1、0．5 mg·kg-1、2．5 mg·kg-1三個(gè)濃度水平下做添加回收試驗(yàn)，5次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

采用外標(biāo)法定量，各組分的峰面積（y）和質(zhì)量濃度（x，mg·kg-1）建立線性關(guān)系方程。吡蟲啉的標(biāo)準(zhǔn)方程為y=35．118x＋4．0736，r=0．9951。

2.2 添加回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．2．1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

添加回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，添加回收率均在80%～120%，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。

2．2．2 最小檢出量與最低檢測(cè)濃度

吡蟲啉在所設(shè)定儀器的條件下，最小檢出量為0．5 ng。在平菇、榆黃蘑及其培養(yǎng)料中的最低檢測(cè)濃度分別為0．02 mg·kg-1、0．0212 mg·kg-1、0．0204 mg·kg-1。

2.3 消解動(dòng)態(tài)結(jié)果

吡蟲啉在培養(yǎng)料中的消解動(dòng)態(tài)曲線見圖1。

從圖1看出，吡蟲啉在培養(yǎng)料中消解曲線方程為C=13．789e-0．0652t，相關(guān)系數(shù)R2=0．9347，半衰期14．0 d。吡蟲啉在2種食用菌中消解動(dòng)態(tài)曲線見圖2。

從圖2可知，吡蟲啉在平菇子實(shí)體中的消解曲線方程為C=1．527e-0．197t，相關(guān)系數(shù)R2=0．9643，半衰期3．8 d（培養(yǎng)料不拌藥）；在榆黃蘑子實(shí)體中的消解曲線方程為C=1．2827e-0．2308t，相關(guān)系數(shù)R2=0．993，半衰期3．1 d（培養(yǎng)料不拌藥）。

表1 吡蟲啉添加回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab．1 Results on spiked recoveries of imidacloprid

圖1 吡蟲啉在培養(yǎng)料中的消解動(dòng)態(tài)曲線Fig．1 Digestion dynamic of imidacloprid in substrates

圖2 吡蟲啉在2種食用菌中的消解動(dòng)態(tài)曲線Fig．2 Digestion dynamic of imidacloprid in two edible fungi

2.4 最終殘留結(jié)果

在收獲期平菇和榆黃蘑的子實(shí)體中吡蟲啉殘留量全都小于0．02 mg·kg-1；其培養(yǎng)料中殘留量約等于0．02 mg·kg-1。

3 結(jié)論與討論

本文以平菇、榆黃蘑、及其培養(yǎng)料為研究對(duì)象，建立了一種簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)吡蟲啉殘留分析的方法。平均添加回收率分別為80．5%～100．3%，符合農(nóng)藥殘留分析標(biāo)準(zhǔn)。最小檢出量為0．5 ng，最低檢出濃度為0．02 mg·kg-1。吡蟲啉在榆黃蘑上原始沉積量為1．2546 mg·kg-1，在平菇上的原始沉積量為1．4564 mg·kg-1，培養(yǎng)料中原始沉積量為11．0643 mg·kg-1。吡蟲啉在榆黃蘑、平菇及其培養(yǎng)料中半衰期分別為2．6 d、2．7 d和14．0 d。

本文建立的殘留分析方法回收率良好，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。伴隨著吡蟲啉應(yīng)用日益廣泛，我國(guó)規(guī)定了其在其它作物上的MRL值，但沒(méi)有規(guī)定在食用菌上最高殘留限量值[9]，本試驗(yàn)的目的是為規(guī)定我國(guó)食用菌吡蟲啉的MRL值提供參考。吡蟲啉在菌類子實(shí)體及培養(yǎng)料中的降解過(guò)程均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，屬于易降解農(nóng)藥。美國(guó)規(guī)定吡蟲啉在野生蘑菇的農(nóng)藥最高殘留限量（MRL值）為0．2 mg·kg-1[10]。建議我國(guó)規(guī)定吡蟲啉在食用菌中的MRL值為0．2 mg·kg-1。

[1]王振榮，李布青．農(nóng)藥商品大全[M]．北京：中國(guó)商業(yè)出版社，1996：306-307．

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Residual Dynamic of Imidacloprid in Pleurotus ostreatus, Pleurotus citrinopileatus and Its Substrates

CHANG Jin-yu1,CHANG Yi2,HOU Zhi-guang1,LU Zhong-bin1,WANG Yan1,ZHANG Hao1
(1．College of Resource and Environment,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China; 2．Jilin Moisture Content Monitoring Center,Changchun 130033,China)

This paper has made a method which spraying imidacloprid on fruiting bodies,and mixing substrates with the pesticide to analyze the residues of imidacloprid in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus．The results showed that imidacloprid of the degradation process in P.ostreatus,P.citrinopileatus and their substrates were in line with a kinetic equation, half-period of imidacloprid in two kind of edible fungi and substrates were 3．1 d-3．8 d,and 14．0 d respectively．The imidacloprid residues at harvest period of P.ostreatus,P.citrinopileatus and substrates were likely equal to the MRL which the US ruled in fungi is 0．02 mg·kg-1．The method was accurate and reliable,providing a scientific basis for our country in the MRL established on edible fungi．

imidacloprid;edible fungi;residues dissipation;dynamics

S646.9

A

1003-8310（2016）01-0062-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2016．01．017

吉林省世行貸款農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全項(xiàng)目（2011-Z28）。

常津毓（1988-），男，在讀碩士研究生，主要從事農(nóng)藥殘留技術(shù)研究。E-mail:351649711＠qq．com

**通信作者：張浩（1964-），女，博士，教授，主要從事農(nóng)藥環(huán)境毒理及生物測(cè)定研究。E-mail:haozhang100＠163．com

2015-11-15