冀北山區(qū)野生紅柴胡組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊 050018）

冀北山區(qū)野生紅柴胡組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

李冬杰

（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊 050018）

以冀北山區(qū)野生藥用植物紅柴胡的腋芽為外植體，以MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L為增殖培養(yǎng)基，以1/2MS+IBA 0.5mg/L為生根培養(yǎng)基，采用漸進(jìn)法煉苗，注重適時(shí)移栽，成活率達(dá)到90%以上，且苗齊苗壯。

紅柴胡；腋芽；組織培養(yǎng)

紅柴胡（B.scorzonerifolium Willd.）是為傘形科柴胡屬多年生草本植物，為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，以根入藥，主治感冒、發(fā)熱、寒熱等癥狀[1]。藥理實(shí)驗(yàn)表明，柴胡皂苷具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、抗炎、保肝、抗腫瘤等多種功效[2]。紅柴胡主要分布在壩上高原，海拔1200m以上，光照充足，品質(zhì)上佳，是冀北山區(qū)野生珍稀藥用植物[3]。由于過(guò)度采挖，野生資源逐漸枯竭，在冀北山區(qū)僅零星分布，數(shù)量稀少。本文所建立的紅柴胡組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)，對(duì)其資源保護(hù)及合理開(kāi)發(fā)利用具有一定的指導(dǎo)意義。

1 材料

試驗(yàn)材料為野生紅柴胡帶腑芽莖段，采自河北省壩上地區(qū)。

2 方法

以MS為基本培養(yǎng)基。（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L。（2）增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L。（3）生根培養(yǎng)基：1/2MS+ IBA 0.5mg/L。以上培養(yǎng)基中均加入3%的蔗糖和0.8%瓊脂，pH5.8，培養(yǎng)溫度為（24依2）℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)40μmol/m2·s左右。

2.1 芽的誘導(dǎo)

將腋芽莖用流水沖洗，在超凈臺(tái)里用75%酒精浸泡30s，無(wú)菌水漂洗2次，每次1～2min；再用升汞水溶液消毒8～10min，無(wú)菌水漂洗3次，每次1～ 2min。切成0.5cm的帶芽莖段，接種到培養(yǎng)基（1）中進(jìn)行芽誘導(dǎo)。5d后芽體開(kāi)始萌動(dòng)，經(jīng)過(guò)20d芽可長(zhǎng)出新葉。

2.2 增殖培養(yǎng)

將誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的無(wú)菌芽轉(zhuǎn)接至叢生芽增殖培養(yǎng)基（2）中培養(yǎng)，進(jìn)行繼代增殖。經(jīng)過(guò)短暫的停滯期，3d后即能觀察到新芽開(kāi)始繼續(xù)生長(zhǎng)，莖段基部伴有少量愈傷組織生成，10d后開(kāi)始從腋芽處分化出叢生芽，30d后叢生芽長(zhǎng)到3～4cm，增殖系數(shù)可達(dá)3～5。

2.3 生根培養(yǎng)

將生長(zhǎng)健壯的單苗接種到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，7d后可見(jiàn)葉片明顯增大，開(kāi)始有根形成，15d不定根長(zhǎng)達(dá)2～3cm。20d每苗生根數(shù)5～6條，生根率91%。

2.4 煉苗與移栽

待根長(zhǎng)到2～3cm時(shí)，將其從培養(yǎng)室中移到溫度較低、自然光照的室內(nèi)4～5d后，開(kāi)瓶練苗2～3d再移栽。栽植前將培養(yǎng)土滅菌，苗栽后澆透水。初期加蓋塑料薄膜保濕保溫，濕度保持在80%，溫度控制在（18依2）℃，每日自然光照10h。7d后揭去薄膜，移栽14d后統(tǒng)計(jì)，成活率90%以上。成苗后移栽至苗圃。

3 討論

目前，有關(guān)柴胡的組織培養(yǎng)研究盡管已有報(bào)道，但仍有不少問(wèn)題需深入研究[4]。本文對(duì)以下幾個(gè)方面進(jìn)行了改進(jìn)，首先在外植體的選擇上，盡管柴胡的外植體選擇較廣泛，包括葉片、葉柄、莖段、腋芽都可以進(jìn)行快繁[5]，但選用分化能力最強(qiáng)的外植體對(duì)組培的成功很關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)直接采用帶芽莖段，其芽的誘導(dǎo)啟動(dòng)快、芽增殖效果也好。另外，在外植體的選擇問(wèn)題上，還注重了采用同一基因型的植株作為外植體。

在柴胡快繁的激素配比方面，多數(shù)采用的是細(xì)胞分裂素6-BA、KT，與生長(zhǎng)素NAA、2，4-D和IAA的配比[6-7]。本實(shí)驗(yàn)采用了6-BA與IBA的組合，結(jié)果顯示其對(duì)芽的誘導(dǎo)、芽增殖效果均佳。

在柴胡適時(shí)移栽研究方面，有報(bào)道成活率在95%以上，移栽2～3周后，可長(zhǎng)出葉片[7]。本實(shí)驗(yàn)采用了漸進(jìn)法，即閉瓶煉苗逐漸到開(kāi)瓶煉苗，此時(shí)恰好根長(zhǎng)到2～3cm時(shí)，苗高2～3cm時(shí)，移栽時(shí)機(jī)最適，成活率能達(dá)到90%以上，且苗齊苗壯，整體提高了組培的效率。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：中醫(yī)藥科技出版社，2010：263-264.

［2］呂曉慧，孫宗喜，蘇瑞強(qiáng)，等.柴胡及其活性成分藥理研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（12）：105-107.

［3］王玉慶，牛顏冰，秦雪梅.野生柴胡資源調(diào)查［J］.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，27（1）：103-107.

［4］胡海英，吳曉玲.銀柴胡離體培養(yǎng)與毛狀根誘導(dǎo)技術(shù)初步研究［J］.生物技術(shù)進(jìn)展，2015，5（6）：436-437.

［5］徐潔森，趙立子，魏建和.北柴胡花藥愈傷組織高效再生體系的建立［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38（21）：3661-3665.

［6］郝建平，徐麗霞，楊東方.北柴胡愈傷組織誘導(dǎo)、分化及不定芽增殖條件研究［J］.中草藥，2008，39（8）：1234-1238.

［7］姚智，高文遠(yuǎn)，李克峰.柴胡愈傷組織生長(zhǎng)和不定根誘導(dǎo)的研究［J］.中草藥，2007，38（2）：275-278.

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of B.scorzonerifolium Willd.in Mountainous Area of Northern Hebei Province

LI Dong-jie
（Department of Biological Science and Engineering,Hebei University of Science and Technology,Shijiazhuang，Hebei 050018）

To establish the tissue culture and rapid propagation system of the wild medicinal plant B.scorzonerifolium Willd.in the mountain area of northern Hebei,the axillary buds were used as the explants,and the suitable medium for induction, propagation and rooting was selected.The results showed that the seedlings survival rate was more than 90%,and the seedlings were vigorous through asymptotic method training and transplanting in suitable time when the inducing,proliferation and rooting culture medium was MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L，MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.5mg/L and 1/2MS+IBA0.5 mg/L respectively.

B.scorzonerifolium Willd；Tuber with buds；Tissue culture

S567.79

A

1002-3356（2016）04-0034-02

2016-06-22

資助：河北省科技支撐計(jì)劃（14237503D）

李冬杰（1966-），碩士，教授，主要從事生物技術(shù)方面的教學(xué)與科研工作。E-mail：ldj618@I63.com。