東莞地區(qū)嬰幼兒先天性耳聾的基因檢測(cè)結(jié)果探析

戴桂林， 劉彥慧， 高宇琳， 李見(jiàn)章， 尹寶珠

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預(yù)防保健

東莞地區(qū)嬰幼兒先天性耳聾的基因檢測(cè)結(jié)果探析

戴桂林， 劉彥慧， 高宇琳， 李見(jiàn)章， 尹寶珠

（廣東省東莞市婦幼保健院， 廣東 東莞 523000）

【摘 要】目的：調(diào)查東莞地區(qū)非綜合性遺傳性耳聾的致聾基因分布特征，為政府制定優(yōu)生優(yōu)育計(jì)劃、提高人口素質(zhì)、降低人口出生缺陷提供科學(xué)依據(jù)。方法：對(duì)200例先天性耳聾患兒，抽取患者的外周血2～3mL，利用耳聾基因芯片對(duì)與非綜合性遺傳性耳聾密切相關(guān)的4個(gè)致聾基因SLC26A4（PDS）（IVS7-2A＞G、2168G）、GJB2（299delAT、235delC、176del16bp及35delG）、GJB3（C538T）和線粒DNA 12SrRNA（A1555G、C1494T）上的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：在本組患者中，有15例檢出GJB2基因突變（22%），10例檢出SLC26A4基因突變（14.3%），DNA12SrRNA基因突變3例（4.4%），沒(méi)有檢出有GJB3基因突變患兒。結(jié)論：東莞地區(qū)非綜合性遺傳性耳聾的有效檢出率與全國(guó)調(diào)查結(jié)果相當(dāng)，其中GJB2基因突變檢出率最高，SLC26A4基因突變檢出率其次，再次是線粒體DNA12SrRNA基因突變，可見(jiàn)利用耳聾基因檢測(cè)技術(shù)對(duì)目標(biāo)人群進(jìn)行耳聾基因篩查，是減少聾兒出生的重要途徑。

【關(guān)鍵詞】先天性耳聾； 非綜合性耳聾； 基因檢測(cè)

為實(shí)現(xiàn)耳聾早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)所采取重要手段即新生兒聽(tīng)力篩查，然而目前發(fā)現(xiàn)很多耳聾是遲發(fā)性的，在出生時(shí)并不表現(xiàn)聽(tīng)力損失（如藥物性耳聾和大前庭水管綜合征），因此單純新生兒聽(tīng)力篩查產(chǎn)生了局限性，考慮在其基礎(chǔ)上聯(lián)合耳聾基因分子篩查，是能降低聾兒發(fā)病率的有效辦法。目前，人類(lèi)基因組計(jì)劃已基本完成，同時(shí)遺傳病檢測(cè)、干預(yù)技術(shù)的得到完善，為規(guī)?；A(yù)防耳聾帶來(lái)了新機(jī)遇，即準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)遺耳聾病因后引入耳聾預(yù)防及阻斷措施，有效地阻斷遺傳性耳聾的傳遞。我國(guó)遺傳性耳聾的分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示：聾人群體中遺傳性耳聾比例較高，SLC26A4 （PDS）、GJB2、線粒體基因（DNA12SrRNA）（母系遺傳）突變是造成中國(guó)人耳聾的主要遺傳致病因素［1］，因此，我們對(duì)東莞地區(qū)200例先天性耳聾患者進(jìn)行了基因檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料：2013年3月至2015年3月經(jīng)東莞市新生兒聽(tīng)力篩查診斷中心確診為先天性耳聾的嬰幼兒患者中隨機(jī)抽取200例，男122例，女78例，最小患兒為90d，最大的患兒3歲，采用自制的調(diào)查問(wèn)卷對(duì)患者姓名、性別、年齡等基本資料、家族耳聾病史、其他疾病史以及聽(tīng)損傷高危因素進(jìn)行采集。

1.2 方 法

1.2.1 聽(tīng)力診斷測(cè)試前行常規(guī)外耳道檢查，特殊情況下可借助耳內(nèi)鏡清除外耳道耵聹。使用儀器為：丹麥MADSEN公司OTOflex100中耳分析儀、丹麥CapellA Plus診斷型全功能耳聲發(fā)射儀、美國(guó)Smart Ep聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位儀、美國(guó)Smart Ep聽(tīng)覺(jué)穩(wěn)態(tài)誘發(fā)（ASSR）電位儀以及行為測(cè)聽(tīng)進(jìn)行檢查，以 V波反應(yīng)閾值≤30dBnHL為聽(tīng)力正常、31d～50dBnHL為輕度耳聾、51 ～70dBnHL為中度耳聾、71～90dBnHL為重度耳聾、V波閾值＞90dBnH為極重度耳聾。

1.2.2 基因檢測(cè)在患兒合法監(jiān)護(hù)人的知情并簽署知情同意書(shū)的基礎(chǔ)上采集血外周血2～3mL，送至東莞市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，利用已獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）批準(zhǔn)的微陣列芯片法遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒［2］，對(duì)與非綜合性遺傳性耳聾密切相關(guān)的4個(gè)致聾基因SLC26A4（PDS）（IVS7-2A＞G、2168G）、GJB2（299delAT、235delC、176del16bp及35delG）、GJB3（C538T）和線粒 DNA12SrRNA （A1555G、C1494T）上的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，完成上述操作后，還需要對(duì)工作液進(jìn)行分裝和標(biāo)記，放置在零下80℃的溫度環(huán)境下長(zhǎng)期保存。

1.3 數(shù)據(jù)管理：將本次研究的所有資料和數(shù)據(jù)，包括知情同意書(shū)、問(wèn)卷調(diào)查表、聽(tīng)力檢測(cè)的結(jié)果、血液樣本和基因組的DNA的樣品按順序輸入電腦，建立只有一個(gè)流水號(hào)的Excel文件，對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行管理，以便于查看和調(diào)閱。同時(shí)，建立紙質(zhì)檔案，用代碼保存計(jì)算機(jī)內(nèi)對(duì)應(yīng)的電子檔案，并確保資料的對(duì)應(yīng)性，交由專(zhuān)人保管。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS22.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1 聽(tīng)力檢測(cè)結(jié)果：200例患兒經(jīng)過(guò)聽(tīng)力診斷和病史分析都確診為先天性耳聾，其中14例為單側(cè)耳聾，186例為雙側(cè)耳聾。根據(jù)聽(tīng)力損害的程度，90耳為輕度和中度損傷，296耳為重度損害或重度以上的損害。

2.2 基因檢測(cè)結(jié)果據(jù)先天性耳聾的流行病學(xué)在200例先天性耳聾患兒中有約70例為先天性非綜合性耳聾［3］，15例檢出GJB2基因突變，檢出率為21.4%（15/ 70），2個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)同時(shí)發(fā)生突變的患者有 3例，176del16bp和235del C同時(shí)突變2例，299delAT AT 和235del C同時(shí)突變的有1例；10例檢出SLC26A4基因突變，檢出率為14.3%（10/70），經(jīng)過(guò)MRI（magnetic resonance imaging，核磁共振）和CT掃描都是 LVAS （large vestibular aqueduct syndrome，大前庭導(dǎo)水管綜合征）患兒；線粒體DNA12SrRNA基因突變3例，檢出率為4.3%（3/70），沒(méi)有檢出有GJB3基因突變患兒。

3　討 論

先天性耳聾一半是由遺傳因素造成，另一半則是由環(huán)境因素引起［4］。在認(rèn)為是遺傳性的病例中，綜合征型占30%，非綜合征型占70%。而在非綜合征型病例中，約77%的病例是常染色體隱性遺傳，22%是常染色體顯性遺傳，X-連鎖和線粒遺傳方式約1%。據(jù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與耳聾相關(guān)基因較多，但僅其中少數(shù)幾個(gè)單基因?yàn)槎@患者的主要致病基因，其中4個(gè)最常見(jiàn)的致遺傳性耳聾基因?yàn)椋篠LC26A4、GJB2、GJB3、線粒體DNA12SrRNA。夏家輝院士［5］發(fā)現(xiàn)中國(guó)本土首個(gè)耳聾相關(guān)基因即為GJB3基因，目前在臨床上檢出率比較低。

本研究隨機(jī)抽取2013年3月～2015年3月經(jīng)東莞市新生兒聽(tīng)力篩查診斷中心確診為先天性耳聾的嬰幼兒200例，利用耳聾基因芯片對(duì)與非綜合性遺傳性耳聾密切相關(guān)的4個(gè)致聾基因SLC26A4（PDS）（IVS7 -2A＞G、2168G）、GJB2（299delAT、235delC、176del16bp 及35delG）、GJB3（C538T）和線粒體 DNA12S rRNA （A1555G、C1494T）上的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，200例患兒中約有70例先天性非綜合性耳聾，15例檢出GJB2基因突變（22%），10例檢出SLC26A4基因突變（14.3%），DNA12SrRNA基因突變3例（4.4%），沒(méi)有檢出有GJB3基因突變患兒，這與我國(guó)遺傳性耳聾的分子流行病學(xué)有關(guān)：造成我國(guó)人口耳聾的主要遺傳因素是SLC26A4（PDS）、GJB2、線 粒 體 基 因DNA12SrRNA突變，所占比例分別為14.5%、21%、4. 4%基本一致。SLC26A4是綜合征性耳聾Pendred綜合征和非綜合征性隱性遺傳性耳聾LVAS的責(zé)任基因。Pendred綜合征除表現(xiàn)有耳聾、甲狀腺腫大，我國(guó)主要為L(zhǎng)VAS，因此患兒僅表現(xiàn)出耳聾，因前庭導(dǎo)水管為聯(lián)系顱腔和內(nèi)耳通道，異常擴(kuò)大后，頭部碰撞或感冒等均可引起顱內(nèi)壓變化導(dǎo)致LVAS患兒的聽(tīng)力下降，早期行基因診斷為患兒監(jiān)護(hù)做陪護(hù)知道，減少或消除外界因素導(dǎo)致患兒病情加重的幾率。GJB2基因突變導(dǎo)致雙側(cè)、語(yǔ)前、對(duì)稱(chēng)性耳聾，對(duì)聽(tīng)力損失程度范圍較大，包括輕度至極重度，但其中多數(shù)屬重度或極重度。線粒體DNA12SrRNA突變攜帶者對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物敏感，低劑量時(shí)就可引起耳鳴，甚至?xí)霈F(xiàn)嚴(yán)重聽(tīng)力減退。由于線粒體DNA遵循母系遺傳，因此若通過(guò)基因診斷確診出1例患者即可推算出家族中存在至少10例攜帶者?？梢罁?jù)其指導(dǎo)攜帶者禁止服用氨基糖苷類(lèi)抗生素，避免耳聾發(fā)生，同時(shí)對(duì)后代藥物使用有指導(dǎo)意義。本研究采用已獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）批準(zhǔn)的微陣列芯片法遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒［2］，對(duì)與遺傳性耳聾密切相關(guān)的4個(gè)致聾基因SLC26A4（PDS）、GJB2、GJB3和線粒體DNA12S rRNA上的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。與傳統(tǒng)測(cè)序方法相比，具備快速、低成本、高準(zhǔn)確性、高通量等優(yōu)勢(shì)，且操作簡(jiǎn)單，易于標(biāo)準(zhǔn)化，達(dá)到臨床耳聾基因檢測(cè)要求及需要。使臨床醫(yī)生可從病因?qū)W角度輔助診斷耳聾患兒，為尋找真正病因提出參考，同時(shí)對(duì)患者用藥及生活注意事項(xiàng)具有指導(dǎo)意義，為婚育指導(dǎo)及遺傳咨詢(xún)提供理論依據(jù)及科學(xué)手段。

【參考文獻(xiàn)】

［1］ 戴樸，劉新，于飛，等.18個(gè)省市聾校學(xué)生非綜合征性聾病分子流行病學(xué)研究（I）-GJB2 235delC和線粒體DNA12SRNA A1555G突變篩查報(bào)告［J］.中華耳科學(xué)雜志，2006，4：1～5.

［2］ Li CX，Pan Q，Guo YG，et al.Construction of a multiplex allele-specific PCR-based universal array（ASPUA）and its applicationto hearing loss screening［J］.Hum Mutat，2008，29：306～314.

［3］ Morto C C，Nance W E.Newoborn hearing secreening a silent revolution［J］.N Engl Med，2006，354：2151～2164.

［4］ Nance W E.The genetics of deafness［J］.Ment Retard Dev Disabil Res Rev，2003，9：109～119.

［5］ Xia JH，Liu CY，Tang BS，et al.Mutations in the gene encoding gap junction protein beta-3 associated with autosomal dominant hearing impairment［J］.Nat Cenet，1998，20：370.

【文章編號(hào)】1006-6233（2016）07-1219-02

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.07.068

【基金項(xiàng)目】廣東省科技局項(xiàng)目，（編號(hào)：20131051010178）