微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定健骨注射液中微量元素的含量

嚴(yán) 赟，王 娟，羅 軼（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，南寧 530021）

微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定健骨注射液中微量元素的含量

嚴(yán) 赟＊，王 娟，羅 軼#（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，南寧 530021）

目的：建立測定健骨注射液中鋰（Li）、鈹（Be）、鎂（Mg）、鋁（Al）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鈷（Co）、鎳（Ni）、銅（Cu）、鋅（Zn）、砷（As）、硒（Se）、銣（Rb）、鍶（Sr）、銀（Ag）、鎘（Cd）、銫（Cs）、鋇（Ba）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鈾（U）23種微量元素含量的方法。方法：采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法。射頻功率為1 550 W，采樣深度為8 mm，冷卻溫度為2Ⅱ，碰撞氣為氦氣，載氣（氬氣）流量為1.03 L/min，積分時間為0.5 s，等離子氣流量為15 L/min，分子渦輪泵轉(zhuǎn)速為200 L/s，四級桿真空度為1.75×10－3Pa，采樣錐孔徑為1.0 mm，截取錐孔徑為0.4 mm，數(shù)據(jù)采集重復(fù)次數(shù)為3次。結(jié)果：Li、Be、Mg、Al、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、As、Se、Rb、Sr、Ag、Cd、Cs、Ba、Pb、U檢測質(zhì)量濃度線性范圍均為0～100 ng/ml，Hg為0～2.0 ng/ml（r均≥0.999 6）；檢測限為0.005～1.652 μg/L；精密度、重復(fù)性試驗的RSD＜7%；所用儀器測定的準(zhǔn)確度良好；加樣回收率分別為90.03%～96.11%、88.25%～96.76%、83.54%～92.01%、85.02%～99.18%、91.87%～94.62%、90.31%～92.28%、89.82%～96.99%、83.45%～89.56%、88.55%～92.39%、92.68%～95.18%、89.04%～93.81%、94.76%～103.11%、96.76%～101.39%、98.36%～105.27%、106.97%～119.89%、97.36%～103.46%、89.11%～90.73%、92.37%～95.62%、95.78%～98.22%、91.59%～97.18%、93.93%～97.12%、96.86%～99.22%、106.14%～110.07%，RSD＝0.48%～4.24%，n＝6。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，適用于健骨注射液中23種微量元素的同時測定。

健骨注射液；微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法；微量元素

健骨注射液由戰(zhàn)骨（莖）單味藥材組成，具有活血散瘀、強筋健骨、驅(qū)風(fēng)止痛[1]的功效，臨床常用于治療頸椎病、肩周炎、骨性關(guān)節(jié)炎、肩峰下撞擊等[2-3]。微量元素作為藥物藥性物質(zhì)基礎(chǔ)的重要組成部分，與藥物的藥性、藥效乃至毒副作用密切相關(guān)，因此微量元素的準(zhǔn)確測定對于用藥有效性、安全性以及有害元素的限量標(biāo)準(zhǔn)制定都有著十分重要的意義。而健骨注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中并無微量元素的測定方法。因此，筆者參考相關(guān)文獻[4-5]，采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）建立了測定健骨注射液中23種微量元素含量的方法，以期為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7700X型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；Mars6型微波消解儀（美國CEM公司）；Milli-Q Advantage A10型超純水機（美國Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

健骨注射液（廣西南寧百會藥業(yè)集團有限公司，批號：1304001、1304002、1304003，規(guī)格：2 ml/支）；國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)柑橘葉（中國地質(zhì)科學(xué)院地球物理地球化學(xué)勘查研究所，批號：BW10020）；鋰（Li）、鈹（Be）、鎂（Mg）、鋁（Al）、釩（V）、鉻（Cr）、錳（Mn）、鐵（Fe）、鈷（Co）、鎳（Ni）、銅（Cu）、鋅（Zn）、砷（As）、硒（Se）、銣（Rb）、鍶（Sr）、銀（Ag）、鎘（Cd）、銫（Cs）、鋇（Ba）、鉛（Pb）、鈾（U）多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（美國Agilent公司，批號：13-05YPY2，質(zhì)量濃度均為10 μg/ml）；汞（Hg）標(biāo)準(zhǔn)溶液（中國計量科學(xué)研究院，批號：14087，質(zhì)量濃度：1 000 μg/ml）；鍺（Ge）、銦（In）、鉍（Bi）、鈧（Sc）混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液（美國Agilent公司，批號：1-46MKBY2，質(zhì)量濃度：10 μg/ml）；硝酸為分析級，水為高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗條件

ICP-MS條件——射頻功率：1 550 W；采樣深度：8 mm；冷卻溫度：2Ⅱ；碰撞氣：氦氣；載氣（氬氣）流量：1.03 L/min；積分時間：0.5 s；等離子氣流量：15 L/min；分子渦輪泵轉(zhuǎn)速：200 L/s；四級桿真空度：1.75×10－3Pa；采樣錐孔徑：1.0 mm；截取錐孔徑：0.4 mm；數(shù)據(jù)采集重復(fù)次數(shù)：3次。微波消解程序：消解功率為1 600 W，以7Ⅱ/min升溫至120Ⅱ，保持5 min，再以5Ⅱ/min升溫至160Ⅱ，保持3 min，最后以3Ⅱ/min升溫至180Ⅱ，保持20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合內(nèi)標(biāo)溶液 精密量取Ge、In、Bi、Sc混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸稀釋制成質(zhì)量濃度為500 ng/ml的混合內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 混合外標(biāo)溶液和Hg外標(biāo)溶液 精密量取多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸制成質(zhì)量濃度分別為0、1、5、10、20、50、100 ng/ml的系列混合外標(biāo)溶液。精密量取Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸制成質(zhì)量濃度分別為0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ng/ml的系列Hg外標(biāo)溶液。

2.2.3 供試品溶液 取樣品2 ml，置于聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸6 ml，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置于微波消解儀中，按“2.1”項下微波消解程序進行消解，放冷，置于120Ⅱ電熱板上加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)濃縮至約2 ml，放冷，轉(zhuǎn)移至50 ml塑料量瓶中，用水定容，搖勻，即得。

2.2.4 空白對照溶液 按“2.2.3”項下方法從“加硝酸6 ml”起操作，平行制備空白對照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項下混合內(nèi)標(biāo)溶液適量，并取“2.2.2”項下系列混合外標(biāo)溶液和Hg外標(biāo)溶液適量，按“2.1”項下試驗條件進樣測定，分別記錄響應(yīng)值A(chǔ)s1、As2和As3。以As2（As3）與As1的比值（y）為縱坐標(biāo)、待測元素質(zhì)量濃度（x，ng/ml）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程、線性范圍與檢測限Tab 1 Regression equation，linear range and detection limit

2.4 檢測限考察

取“2.2.4”項下空白對照溶液適量，按“2.1”項下試驗條件重復(fù)進樣測定11次，計算儀器響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對應(yīng)的各待測元素質(zhì)量濃度即為檢測限，詳見表1。

2.5 精密度試驗

取多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液和“2.2.2”項下系列混合外標(biāo)溶液、Hg外標(biāo)溶液各適量，分別按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應(yīng)值。結(jié)果，各元素各質(zhì)量濃度響應(yīng)值的RSD均在0.24%～6.89%（n＝6）范圍內(nèi)，表明本方法精密度良好[6]。

2.6 準(zhǔn)確度試驗

取國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)柑橘葉適量，按“2.2.3”項下方法制備柑橘葉供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應(yīng)值。結(jié)果，各元素的測定結(jié)果均在標(biāo)準(zhǔn)值范圍內(nèi)，表明本試驗所用儀器測定的準(zhǔn)確度良好。

2.7 重復(fù)性和加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號：1304001）2 ml，分別精密加入加多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 ml、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 ml，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應(yīng)值并計算加樣回收率，結(jié)果見表2。因樣品中部分元素含量低于檢測限，故方法重復(fù)性以加樣回收率的RSD表示。由表2可知，本方法重復(fù)性良好。

表2 重復(fù)性和加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6，%）Tab 2 Repatability and results of recovery test（n＝6，%）

2.8 樣品微量元素測定

取3批樣品各2 ml，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄響應(yīng)值并計算樣品含量，結(jié)果見表3。由表3可知，各待測元素的測定結(jié)果均符合2015年版《中國藥典》（四部）的相關(guān)規(guī)定[6]。

3 討論

2015年版《中國藥典》（四部）規(guī)定中藥注射液按各品種最大日劑量計算，含Pb、Cd、As、Hg、Cu分別不得超過12、3、6、2、150 μg。按照健骨注射液用法用量及規(guī)格折算，其每天最大使用量為4 ml。本研究各待測元素按測得的含量計算，均符合《中國藥典》規(guī)定。目前，世界主要國家和組織對進口藥材中重金屬殘留量都有嚴(yán)格規(guī)定?！稓W洲藥典》以及《日本藥典》均對中藥材或植物藥中重金屬元素作出限量規(guī)定，香港地區(qū)則針對中成藥注冊提出安全性要求，規(guī)定了重金屬元素的殘留量限度。但目前我國藥典僅對部分中藥材和中藥注射液有重金屬殘留量規(guī)定，鑒于在我國中藥材和中藥注射液使用量很大，為了提高藥物安全性，完善有害元素的限量和限度規(guī)定是很有必要的。本研究探索了以微波消解ICP-MS法測定健骨注射液中23種微量元素含量的方法，并使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和加樣回收對方法進行了驗證。結(jié)果表明，本方法簡便、準(zhǔn)確，適用于健骨注射液中23種微量元素的同時測定。

表3 樣品含量測定結(jié)果（n＝2，ng/ml）Tab 3 Results of trace elements determination of samples（n＝2，ng/ml）

[1] 衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥成方制劑：第十四冊[S].1998：108.

[2] 王紅梅，陳俊亭，戚思華.健骨注射液頸椎旁神經(jīng)阻滯聯(lián)合牽引治療神經(jīng)根型頸椎病的臨床觀察[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，47（4）：382.

[3] 李新洲，梁連錦.小針刀療法配合健骨注射液治療肩周炎的效果分析[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，35（5）：75.

[4] 黃訓(xùn)瑞.ICP-MS法測定生脈注射液中5種重金屬元素的含量[J].中國藥房，2014，25（17）：1 619.

[5] 高廣慧，趙飛，王鳳嬌，等.ICP-MS標(biāo)準(zhǔn)加入法考察復(fù)方氨基酸注射液中鋁元素殘留量[J].藥物分析雜志，2014，34（12）：2 207.

[6] 國家藥典委員會：中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：4、376.

（編輯：劉 柳）

Contents Determination of Trace Elements in Jiangu Injection by Microwave Digestion-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry

YAN Yun，WANG Juan，LUO Yi（Institute of Food and Drug Control，Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530021，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the contents determination of Li，Be，Mg，Al，V，Cr，Mn，F(xiàn)e，Co，Ni，Cu，Zn，As，Se，Rb，Sr，Ag，Cd，Cs，Ba，Hg，Pb and U in Jiangu injection.METHODS：Microwave digestion-inductively coupled plasma mass spectrometry（MD-ICPMS）was adopted.RF power was 1 550 W，sampling depth was 8 mm，coolant temperature was 2Ⅱ，collision gas was He gas，the flow rate of the carrier gas（argon gas）was 1.03 L/min，integration time was 0.5 s，plasma gas flow rate was 15 L/min，molecular turbo pumb speed was 200 L/s，quadrupole degree of 1.75×10－3Pa，sampling cone aperture was 1.0 mm，interception cone aperture was 0.4 mm，and the data collection was repeated 3 times.RESULTS：The linear ranges of Li，Be，Mg，Al，V，Cr，Mn，F(xiàn)e，Co，Ni，Cu，Zn，As，Se，Rb，Sr，Ag，Cd，Cs，Ba，Pb and U were all in 0-100 ng/ml（r≥0.999 6），Hg was 0-2.0 ng/ml（r≥0.999 6）；the limit of detection was 0.005-1.652 μg/L；RSDs of precisionand reproducibility tests were lower than 7%；the accuracy determined by the instrument in the test was good；recoveries were 90.03%-96.11%，88.25%-96.76%，83.54%-92.01%，85.02%-99.18%，91.87%-94.62%，90.31%-92.28%，89.82%-96.99%，83.45%-89.56%，88.55%-92.39%，92.68%-95.18%，89.04%-93.81%，94.76%-103.11%，96.76%-101.39%，98.36%-105.27%，106.97%-119.89%，97.36%-103.46%，89.11%-90.73%，92.37%-95.62%，95.78%-98.22%，91.59%-97.18%，93.93%-97.12%，96.86%-99.22%and 106.14%-110.07%，RSD＝0.48%～4.24%，n＝6.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate，and suitable for the simultaneous determination of 23 trace elements in Jiangu injection.

Jiangu injection；Microwave digestion-inductively coupled plasma mass spectrometry；Trace element

R927

A

1001-0408（2016）36-5153-03

2015-12-30

2016-03-14）

＊主管藥師。研究方向：藥物分析。電話：0771-5828708。E-mail：Yanyun1144@163.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：藥物分析。電話：0771-5828498。E-mail：luoyi20010211@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2016.36.36