脂蛋白(a)-P研究進(jìn)展*

付曉艷，李　莉 綜述，朱槿宏,何津春△ 審校

( 1.蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，蘭州 730000；2.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，蘭州 730000)

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·綜述·

脂蛋白(a)-P研究進(jìn)展*

付曉艷1，李莉2綜述，朱槿宏2,何津春2△審校

( 1.蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，蘭州 730000；2.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，蘭州 730000)

關(guān)鍵詞:脂蛋白(a)；脂蛋白(a)顆粒；免疫固定電泳；核磁共振光譜法

脂蛋白(a)[Lp(a)]是人體內(nèi)一種特殊的大分子脂蛋白，血漿中Lp(a)水平升高可增加患動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的風(fēng)險(xiǎn)。長(zhǎng)期以來(lái)，臨床已經(jīng)習(xí)慣使用Lp(a)-C或Lp(a)-M預(yù)測(cè)Lp(a)相關(guān)AS風(fēng)險(xiǎn)的高低[1-5]。但值得注意的是，致AS因子是Lp(a)-P而不是Lp(a)-C或Lp(a)-M。最新研究表明，Lp(a)-P最能代表Lp(a)的真實(shí)水平，對(duì)AS的預(yù)測(cè)價(jià)值較Lp(a)-C或Lp(a)-M高。下面本文就Lp(a)-P的研究進(jìn)展做一綜述。

1Lp(a)的結(jié)構(gòu)

Lp(a)主要由低密度脂蛋白顆粒(由載脂蛋白B100和脂質(zhì)組成)與載脂蛋白(a) [Apo(a)]通過(guò)二硫鍵連接組成[4]。Apo(a)是高度糖基化的蛋白質(zhì)，含有1個(gè)蛋白酶樣結(jié)構(gòu)域和1個(gè)kringle結(jié)構(gòu)域,kringle結(jié)構(gòu)域中有1個(gè)K5和若干個(gè)K4。Apo(a)中的K4有10種不同亞型(T1～T10),除T2的拷貝數(shù)從3～43個(gè)不等,其他9型均含有1個(gè)拷貝，所以K4-2型的重復(fù)數(shù)決定了Apo(a)分子的大小，它是導(dǎo)致Lp(a)相對(duì)分子質(zhì)量個(gè)體間差異較大[(180～800)×103不等]的主要原因。此外不同個(gè)體間乃至同一個(gè)體不同Lp(a)-P中所含膽固醇量的差異也是導(dǎo)致Lp(a)分子量個(gè)體間差異的原因之一[4-5]。

23種Lp(a)相關(guān)生物標(biāo)志物

不同研究者發(fā)現(xiàn)，對(duì)AS預(yù)測(cè)價(jià)值較高的Lp(a)相關(guān)生物標(biāo)志物有Lp(a)-M、Lp(a)-C和Lp(a)-P 3種。其中Lp(a)-M是用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定載脂蛋白(a)質(zhì)量[Apo(a)-mass]表示的，測(cè)定結(jié)果用mg/L表示；Lp(a)-C是通過(guò)電泳法測(cè)定Lp(a)-P所攜帶的膽固醇，測(cè)定結(jié)果用mmol/L表示，也有文獻(xiàn)將測(cè)定結(jié)果用mg/L表示[6]； Lp(a)-P是近年提出的較新的生物標(biāo)志物，Lp(a)-P是通過(guò)免疫固定電泳法(IFE)或核磁共振波譜(NMRs)直接測(cè)定其在血漿中的濃度，測(cè)定結(jié)果用nmol/L表示[4-6]。

3Lp(a)顆粒測(cè)定研究進(jìn)展

3.1Lp(a)顆粒測(cè)定背景Lp(a)-M測(cè)定是最早使用的Lp(a)動(dòng)脈粥樣硬化生物標(biāo)志物，但早期免疫分析所用的抗體主要是針對(duì)Apo(a)K4-2型抗原表位，但該區(qū)域分子大小不一且抗體親和力強(qiáng)弱不一導(dǎo)致Lp(a)-M測(cè)定準(zhǔn)確性受到質(zhì)疑。美國(guó)西雅圖的華盛頓大學(xué)西北脂類(lèi)研究實(shí)驗(yàn)室提出針對(duì)Apo(a)K4-9型抗原表位的ELISA，雖然不受Apo(a)分子大小異質(zhì)性的影響，但只適用 ELISA,不適用于全自動(dòng)生化分析儀的免疫比濁法[7]。由于免疫學(xué)方法測(cè)定Lp(a)-M存在的困難，故研究者提出用測(cè)定Lp(a)-C代替Lp(a)-M[3,8]，然而隨著肥胖及代謝綜合征發(fā)病率的上升，使得Lp(a)-C這一標(biāo)志物相對(duì)其他標(biāo)志物而言預(yù)測(cè)價(jià)值降低[9]。

鑒于Lp(a)-M或Lp(a)-C測(cè)定存在缺陷，以及大量薈萃分析發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白顆粒(LDL-P)較低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)是更好地預(yù)測(cè)AS發(fā)生的生物標(biāo)志物[10-14]。研究者推斷Lp(a)-P在預(yù)測(cè) AS發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)上優(yōu)于 Lp(a)-M或Lp(a)-C[2-6,8]。此后，研究發(fā)現(xiàn)，Lp(a)-P測(cè)定不受其分子大小及其他脂蛋白的影響，可以代表Lp(a)濃度的唯一特征，成為研究熱點(diǎn)[2,15-18]。

3.2Lp(a)顆粒測(cè)定方法關(guān)于脂蛋白顆粒的測(cè)定，研究較多的是高密度脂蛋白顆粒和LDL-P，測(cè)定方法及應(yīng)用日漸成熟。目前測(cè)定方法常用的有3種：超速離心法、IFE、NMRs[10]。文獻(xiàn)中報(bào)道較多的是后兩種[4,11]，現(xiàn)分別介紹如下。

3.2.1IFEIFE是一種用于分析樣品中特異性抗原的技術(shù)，首先將蛋白質(zhì)混合物在固相載體上進(jìn)行區(qū)帶電泳，再與特異性抗體反應(yīng)，從而檢出與抗體結(jié)合的相應(yīng)抗原。Philip等[4]通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，建立了一種適用于臨床常規(guī)檢測(cè)Lp(a)-P的[Lp(a)]，此方法準(zhǔn)確度高(CV<10%)、線性范圍為50～800 nmol/L、精密度較好且不受Apo(a)分子大小的影響。該法首先將血清中的脂蛋白經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離成不同區(qū)帶,其次在含Apo(a)的脂蛋白區(qū)帶中Apo(a)可與抗Apo(a)抗體結(jié)合，用酸性紫染色可見(jiàn)到脂蛋白固定條帶，清洗后使用比濁法測(cè)定Apo(a)的總量[包括Lp(a)、VLDL、IDL和LDL中的Apo(a)]，根據(jù)公式[4]可通過(guò)Lp(a)中Apo(a)濃度計(jì)算出Lp(a)-P的濃度。計(jì)算公式如下：Lp(a)-P(nmol/L)=Apo(a)總量×Lp(a)條帶占總面積百分比×18.52，其中18.52=Lp(a)中Apo(a)濃度×10/(apo-B相對(duì)分子質(zhì)量×106)。

3.2.2NMRsNMRs是基于電磁波照射待測(cè)物質(zhì)，使原子核發(fā)生能級(jí)躍遷，產(chǎn)生一定核磁共振信號(hào)，進(jìn)而得到NMRs。NMRs之所以可應(yīng)用于Lp(a)-P測(cè)定，主要是利用了不同大小的Lp(a)-P甲基基團(tuán)天然質(zhì)子NMR特征。Lp(a)的磁學(xué)特性使不同大小顆粒中的脂質(zhì)發(fā)出不同的頻率和形狀信號(hào)[11]。對(duì)照已知的每一類(lèi)顆粒的甲基信號(hào)頻率和特征，記錄血漿中待測(cè)脂蛋白顆粒所產(chǎn)生的信號(hào)，可以通過(guò)數(shù)學(xué)計(jì)算的方法計(jì)算出不同脂蛋白的數(shù)目和脂蛋白顆粒的大小。NMRs測(cè)定脂蛋白的最大優(yōu)勢(shì)是該法測(cè)定整個(gè)顆粒而不僅是某一化學(xué)成分的濃度。由于每個(gè)Lp(a)-P中的Lp(a)-C不是恒量，個(gè)體間差異較大，因此Lp(a)-C不能反映相應(yīng)冠心病危險(xiǎn)等級(jí)[12]。而NMRs不受個(gè)體間差異的影響，即一定濃度的脂蛋白亞類(lèi)總是產(chǎn)生同等大小的甲基化信號(hào)。但大小接近的脂蛋白顆粒，其甲基信號(hào)頻率和特征的變化在波譜上不易顯現(xiàn)出來(lái)，因此這些脂蛋白顆粒仍是代表一組脂蛋白，這點(diǎn)值得注意。

3.3Lp(a)-P與Lp(a)-M、Lp(a)-C相比的優(yōu)勢(shì)多項(xiàng)研究表明，LDL-P濃度在預(yù)測(cè)AS危險(xiǎn)性方面比LDL-C更敏感，因此理論上推測(cè)Lp(a)-P預(yù)測(cè)AS的靈敏度比Lp(a)-C更高[10-14]。目前這一推測(cè)已經(jīng)得到證實(shí)[2,16-18]。早期Sniderman等[19]通過(guò)Meta分析顯示,當(dāng)Lp(a)-M處于臨界值時(shí)，不同Lp(a)-P濃度的患者發(fā)生心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)不同；2012年Matthew等通過(guò)對(duì)144例AS一級(jí)、二級(jí)預(yù)防者研究發(fā)現(xiàn)，Lp(a)-P與Lp(a)-C的不一致性高達(dá)23%，近年來(lái)該結(jié)論也被其他研究者證實(shí)[13-15]；2014年Hopwell等[15]通過(guò)對(duì)995例冠心病患者研究發(fā)現(xiàn)， Lp(a)-P比Lp(a)-M和Lp(a)-C測(cè)定更能預(yù)測(cè)冠心病的風(fēng)險(xiǎn)；研究還發(fā)現(xiàn)小分子Apo(a)患者具有更高的Lp(a)-P濃度，更易導(dǎo)致AS。

4結(jié)語(yǔ)與展望

Lp(a)作為AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素已得到公認(rèn)，但目前關(guān)于Lp(a)仍有許多未解決的問(wèn)題，例如，其代謝機(jī)制尚不清楚，其測(cè)定單位和度量標(biāo)準(zhǔn)在不同的實(shí)驗(yàn)室之間不一致等。一些研究者常混淆Lp(a)的3種生物標(biāo)志物，因此有必要使更多臨床醫(yī)生了解Lp(a)測(cè)定的意義[5,16]。未來(lái)需要確定一種能夠真實(shí)反映Lp(a)水平且易于檢測(cè)的生物標(biāo)志物，目前最新研究認(rèn)為L(zhǎng)P(a)-P就是這樣一種生物標(biāo)志物。學(xué)者們一致認(rèn)為，現(xiàn)在及未來(lái)就是要通過(guò)國(guó)際間的合作在不同人群中研究 LP(a)-P引起的 AS風(fēng)險(xiǎn)，從而為L(zhǎng)p(a)-P是目前發(fā)現(xiàn)的最好的AS風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志物這一觀點(diǎn)提供支持。

今后Lp(a)-P研究方向可能出自以下幾方面：(1)選擇Lp(a)-P正常，但Lp(a)-M和Lp(a)-C升高或降低的，或Lp(a)-P升高或降低而Lp(a)-M和Lp(a)-C在正常參考范圍內(nèi)的標(biāo)本來(lái)比較3種生物標(biāo)記，證實(shí)三者在預(yù)測(cè)AS發(fā)生的優(yōu)缺點(diǎn)；(2)應(yīng)用高場(chǎng)多維NMRs優(yōu)化LP(a)-P測(cè)定方法，使其更加適合常規(guī)臨床檢測(cè)；(3)對(duì)于高Lp(a)-P的動(dòng)物模型，尋找新型的治療手段降低血漿Lp(a)-P；(3)在臨床上驗(yàn)證Lp(a)-P預(yù)測(cè)AS發(fā)病率的臨床價(jià)值及治療手段，確定AS的醫(yī)學(xué)決定水平，以便制訂干預(yù)人群和治療目標(biāo)，在一級(jí)、二級(jí)預(yù)防中都有重要意義。

綜上所述，Lp(a)-P對(duì)AS的發(fā)生具有良好的預(yù)測(cè)價(jià)值，相信今后在基礎(chǔ)和臨床的不同層面上會(huì)有更廣泛的研究和應(yīng)用。

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*基金項(xiàng)目：國(guó)家“十五”重大科技專(zhuān)項(xiàng)(2002BA711A08-17)；教育部科技基礎(chǔ)平臺(tái)建設(shè)(505015)；甘肅省自然科學(xué)研究基金(1308RJZA218，1302FKDA034)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.029

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)13-1822-03

(收稿日期：2016-03-05修回日期：2016-05-15)

△通訊作者，E-mail：jinchunhe@163.com。