B族鏈球菌感染、預(yù)防及檢測(cè)研究進(jìn)展

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·綜述·

B族鏈球菌感染、預(yù)防及檢測(cè)研究進(jìn)展

王欣1，韓淵明2綜述，魏超君1△審校

(1.甘肅省人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，甘肅蘭州 730000；

2.甘肅省蘭州市第一人民醫(yī)院泌尿外科，甘肅蘭州 730050)

關(guān)鍵詞:B族鏈球菌；感染；預(yù)防；疫苗

B族鏈球菌(GBS)即無乳鏈球菌感染是造成孕產(chǎn)婦生殖道感染的重要原因，嚴(yán)重時(shí)更可引起如泌尿系感染、絨毛膜羊膜炎、產(chǎn)褥感染等。早產(chǎn)、胎膜早破和新生兒敗血癥等均與其感染有密切關(guān)系[1]。王兆莉等[2]的研究發(fā)現(xiàn)未發(fā)生胎膜早破的正常產(chǎn)婦其生殖道中GBS感染率遠(yuǎn)低于發(fā)生胎膜早破的產(chǎn)婦。孫瑜等[3]研究認(rèn)為陰道感染GBS后，該菌可繼續(xù)上行造成宮腔內(nèi)感染，引起絨毛膜羊膜炎，甚至造成胎兒死亡。

1GBS對(duì)孕產(chǎn)婦的影響

1.1GBS與胎膜早破(PROM)臨床研究證實(shí),泌尿生殖道的GBS感染可引起PROM、早產(chǎn)、絨毛膜羊膜炎[4-5]，且由于PRDM而引起早產(chǎn)的孕婦組GBS感染率明顯高于足月產(chǎn)的孕婦組[6]。

1.2GBS與早產(chǎn)當(dāng)GBS數(shù)量多且毒力強(qiáng)、孕婦免疫力低下或引起陰道炎的GBS上行造成PROM時(shí)，機(jī)體釋放的磷脂酶A2可刺激羊膜等組織產(chǎn)生細(xì)胞因子及前列腺素，它們引起子宮收縮導(dǎo)致早產(chǎn)發(fā)生[7-9]。Klebanoff等[10]研究表明,感染GBS的孕婦較健康孕婦發(fā)生早產(chǎn)的可能性增加20%～60%，且其分娩的胎兒為低或極低出生體質(zhì)量?jī)旱母怕室蚕鄳?yīng)增加。

1.3GBS與羊膜腔感染孕婦患細(xì)菌性陰道炎等疾病后致病菌上行造成胎盤、胎膜及羊水等感染即為羊膜腔感染。由于GBS對(duì)絨毛膜的穿透能力遠(yuǎn)大于其他可引起生殖道感染的致病菌如大腸埃希菌等,故由GBS造成的羊膜腔感染病情也更嚴(yán)重。

2GBS與新生兒及嬰兒感染

目前普遍以患兒發(fā)病時(shí)間及臨床表現(xiàn)的差異為分類依據(jù)，將新生兒和嬰兒GBS感染分為兩型。(1)早發(fā)型感染：患兒出生后7 d內(nèi)發(fā)生且以生后24 h內(nèi)發(fā)生多見，主要臨床表現(xiàn)為肺炎和敗血癥，其中GBS肺炎可有發(fā)紺、呼吸暫停及呼吸窘迫等嚴(yán)重癥狀。(2)晚發(fā)型感染：患兒出生7 d后至出生后3個(gè)月發(fā)生，多見于足月兒，常呈隱匿性發(fā)病，主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、嗜睡和顱內(nèi)高壓等，若伴發(fā)敗血癥則預(yù)后較差。

3GBS的檢測(cè)

3.1微生物學(xué)檢驗(yàn)方法GBS培養(yǎng)是檢測(cè)GBS感染的重要方法之一。雖然GBS培養(yǎng)所需時(shí)間較其他檢測(cè)方法長(zhǎng)且陽性率不高,但可利用培養(yǎng)出的細(xì)菌進(jìn)行進(jìn)一步深入研究，并且可根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感抗菌藥物治療。

3.2免疫學(xué)檢驗(yàn)方法

3.2.1乳膠凝集法實(shí)驗(yàn)原理為檢測(cè)GBS莢膜多糖抗原，采用吸附了抗GBS莢膜多糖抗體的膠乳混懸液進(jìn)行檢驗(yàn)。此種方法敏感度高，操作簡(jiǎn)便且成本低廉,適合進(jìn)行快速檢測(cè)時(shí)使用。

3.2.2免疫層析法免疫層析法是一種快速且步驟簡(jiǎn)單的檢測(cè)GBS抗原的方法。當(dāng)標(biāo)本含有GBS抗原時(shí)，其可與染料或膠體金等標(biāo)記的針對(duì)GBS的單克隆抗體特異性結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物可被固相化的多克隆抗體捕獲從而產(chǎn)生有色條帶[11]。

3.3分子生物學(xué)檢驗(yàn)方法

3.3.1斑點(diǎn)印跡法Mavenyengwa等[12]將GBS被熱十二烷基硫酸鹽溶液裂解的裂解物經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳轉(zhuǎn)移至PVDF膜后,依次與抗-R3單克隆抗體以及耦聯(lián)過氧化物酶的抗IgM抗體反應(yīng),產(chǎn)物與底物顯色后產(chǎn)生有色斑點(diǎn)。此方法特異性較高，但對(duì)操作人員及實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求嚴(yán)格。

3.3.2PCR技術(shù)

3.3.2.1常規(guī)PCRJordan等[13]采用單一PCR技術(shù)，Rallu等[14]使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)GBS的16S rDNA以及編碼C5a肽酶的scpB基因。Parham等[15]通過定量PCR技術(shù)檢測(cè)被探針捕獲到的GBS基因組DNA，該寡核苷酸探針長(zhǎng)度不同，以cfb基因?yàn)榘谢颉４朔椒蓪⑻禺愋缘腉BS基因片段濃集、純化，使得高效檢測(cè)GBS成為可能。

3.3.2.2多重PCRPoyart等[16]采用以莢膜多糖cps基因?yàn)榘谢虻亩嘀豍CR技術(shù)檢測(cè)已知的多種GBS莢膜多糖。Zeng等[17]、Zhao等[18]使用從Ⅰa到Ⅷ共9個(gè)GBS血清特異性基因以及7個(gè)表面蛋白抗原基因和cfb菌種特異性基因?yàn)榘谢?，設(shè)計(jì)出33種引物和34種探針，這種多重PCR-反向線點(diǎn)雜交技術(shù)(mPCR/RLB)可同時(shí)檢測(cè)GBS的分子血清型和表面蛋白基因。此技術(shù)與多重PCR方法相比提高了GBS檢測(cè)的靈敏度和特異性以及檢測(cè)效率，可避免交叉反應(yīng)，在大規(guī)模的GBS流行病學(xué)調(diào)查研究時(shí)更加適宜使用。此外，Wen等[19]采用DNA芯片技術(shù)檢測(cè)9種GBS血清型，可用于GBS血清特異性疫苗的研制以及GBS的發(fā)病機(jī)制研究。

4GBS預(yù)防策略的進(jìn)展

從妊娠期抗菌藥物預(yù)防(IAP)到疫苗，美國(guó)疾病預(yù)防控制中心于2010年頒布了《圍產(chǎn)期GBS預(yù)防指南》，針對(duì)妊娠期GBS的預(yù)防和控制提出了兩種方案，該方案已被美國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)院、護(hù)士助產(chǎn)士協(xié)會(huì)、藥理學(xué)會(huì)、流行病學(xué)會(huì)、兒科學(xué)會(huì)及微生物學(xué)會(huì)認(rèn)可。方案一：對(duì)所有孕婦于妊娠35～37周時(shí)進(jìn)行GBS篩查。方法是將陰道前端及直腸采集的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。因使用平板直接接種與使用增菌肉湯接種相比約有50%的GBS攜帶者出現(xiàn)假陰性結(jié)果，故推薦使用增菌肉湯培養(yǎng)來提高檢出率。對(duì)培養(yǎng)結(jié)果為陽性的孕婦進(jìn)行青霉素預(yù)防性治療。方案二：對(duì)下列高危情況者直接給予青霉素預(yù)防性治療：妊娠37周之前分娩、產(chǎn)時(shí)體溫大于或等于38 ℃，破膜時(shí)間大于或等于18 h、上次新生兒GBS感染史,以及本次妊娠有GBS菌尿。

研究表明，近年來GBS對(duì)青霉素耐藥率隨著抗菌藥物廣泛使用而逐漸升高，而對(duì)紅霉素和克林霉素的耐藥率已從小于5%升至20%～30%[20-21]。Pettersson等[22]認(rèn)為，IAP雖能使新生兒早發(fā)型GBS感染率降低，但新生兒晚發(fā)型GBS感染率不能降低。IAP還可能通過母體影響新生兒腸道內(nèi)環(huán)境，增加了由于耐藥的革蘭陰性菌引起的新生兒膿毒癥的發(fā)病率和病死率。因此，目前認(rèn)為疫苗接種是預(yù)防GBS感染的一種更加有效的方法，其不僅可防止新生兒發(fā)生GBS感染，而且也可預(yù)防諸如流產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)婦菌血癥[23-24]等其他GBS相關(guān)疾病的發(fā)生。

5結(jié)論

目前，新生兒GBS感染已引起全球公共衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的廣泛關(guān)注。GBS疫苗是預(yù)防感染的有效途徑，研發(fā)安全有效的GBS疫苗已成為熱點(diǎn)[25-26]，但仍有部分問題尚未解決[27]，例如如何延長(zhǎng)疫苗保護(hù)時(shí)間以及研制針對(duì)不同GBS血清型的疫苗。針對(duì)致病性強(qiáng)的GBS血清型如Ⅰa型、Ⅰb型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅴ型制備多效價(jià)GBS疫苗的技術(shù)仍處于臨床Ⅰ期、Ⅱ期實(shí)驗(yàn)階段[28]。GBS疫苗研制的重點(diǎn)主要集中在如何選用GBS表面蛋白方面，如C蛋白復(fù)合體中的A、B抗原[29]、RIB蛋白、R蛋白等；此外，載體蛋白與莢膜多糖耦聯(lián)的結(jié)合疫苗，以及基因工程疫苗等均在研制過程中。Valentin-Hansen等[30]的研究結(jié)果顯示目前GBS的蛋白-多糖疫苗已進(jìn)入三期臨床實(shí)驗(yàn)階段，這將對(duì)GBS感染的預(yù)防起到重大作用。

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(收稿日期：2015-12-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.038

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0521-03

作者簡(jiǎn)介：王欣，女，主管檢驗(yàn)師，主要從事微生物檢驗(yàn)研究?！魍ㄓ嵶髡撸珽-mail:weichaojun0312@126.com。