感染性腹瀉大便中無(wú)活性大腸埃希菌的檢測(cè)結(jié)果分析

李代昆，李　莉，蔡　偉，余雪梅，封　雪，薛建江△，張德純

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 401331；2.重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與

腫瘤研究中心病原生物學(xué)教研室，重慶 400016)

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·論著·

感染性腹瀉大便中無(wú)活性大腸埃希菌的檢測(cè)結(jié)果分析

李代昆1，李莉1，蔡偉1，余雪梅1，封雪1，薛建江1△，張德純2

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 401331；2.重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與

腫瘤研究中心病原生物學(xué)教研室，重慶 400016)

摘要:目的分析糞便標(biāo)本分離的無(wú)活性大腸埃希菌的鑒定及耐藥性。方法對(duì)該院2013年1月至2015年6月臨床送檢的糞便標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)。結(jié)果共檢出61株無(wú)活性大腸埃希菌，18株能與志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。阿莫西林和替卡西林耐藥率為100%，哌拉西林、頭孢噻吩和復(fù)方磺胺甲噁唑耐藥率為78%，頭孢西丁和阿米卡星耐藥率為33%，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南和美羅培南耐藥率為0%。結(jié)論無(wú)活性大腸埃希菌能引起腹瀉，容易被誤診為志賀菌；耐藥性與普通大腸埃希菌無(wú)顯著不同。

關(guān)鍵詞:感染性腹瀉；無(wú)活性大腸埃希菌；鑒定；耐藥特性

無(wú)活性大腸埃希菌的生物學(xué)特性與志賀菌極為相似，而且部分菌株能與志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。在臨床病原菌診斷時(shí)，能與志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)的菌株很容易被誤判為志賀菌，而不與志賀菌診斷血清發(fā)生交叉凝集反應(yīng)的菌株則被漏判為腸道正常菌群。因此，無(wú)活性大腸埃希菌在我國(guó)的細(xì)菌感染性腹瀉病中起著重要作用，應(yīng)該得到臨床的足夠重視。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2015年6月本院未使用抗菌藥物腹瀉患者的稀便、水樣便、黏膿便或膿血便等276份標(biāo)本作為研究對(duì)象，檢測(cè)出無(wú)活性大腸埃希菌61株，其中有18株能與志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。

1.2儀器與試劑法國(guó)生物梅里埃公司ATB Express微生物鑒定和藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)。培養(yǎng)基包括血瓊脂平板、抗菌藥物巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、沙門-志賀菌瓊脂平板、沙保瓊脂平板，購(gòu)于鄭州安圖生物有限公司。微生物鑒定和藥敏試驗(yàn)板條包括革蘭陰性菌鑒定板條和腸桿菌科細(xì)菌藥敏試驗(yàn)板條，購(gòu)于法國(guó)生物梅里埃公司。志賀菌診斷血清購(gòu)于寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司。

1.3抗菌藥物種類阿莫西林(AMO)，阿莫西林/克拉維酸(AMC)，替卡西林(TIC)，替卡西林/克拉維酸(TCC)，哌拉西林(PIP)，哌拉西林/他唑巴坦(TZP)，頭孢噻吩(CEP)，頭孢呋辛(CXM)，頭孢西丁(FOX)，頭孢噻肟(CTX)，頭孢他啶(CAZ)，頭孢吡肟(FEP)，亞胺培南(IPM)，美羅培南(MEM)，慶大霉素(GEN)，妥布霉素(TOB)，阿米卡星(AMK)，奈替米星(NET)，環(huán)丙沙星(CIP)，復(fù)方磺胺甲噁唑(SXT)。

1.4方法將臨床送檢的糞便標(biāo)本按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)的要求，腹瀉患者的糞便采用相應(yīng)培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)；挑取SS平板上無(wú)色、半透明、圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、直徑1～2 mm的可疑菌落，用志賀菌診斷血清作凝集試驗(yàn)。使用法國(guó)生物梅里埃公司ATB微生物鑒定和藥敏試驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn)，操作及結(jié)果判斷嚴(yán)格按照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)公布的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。每月使用標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希菌(ATCC25922)進(jìn)行一次質(zhì)量控制。

2結(jié)果

2.1培養(yǎng)特性沙門-志賀菌瓊脂平板上無(wú)色、半透明、圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、直徑1～2 mm。

2.2血清學(xué)試驗(yàn)用志賀菌診斷血清作凝集試驗(yàn)，有18株能與志賀菌屬診斷血清凝集，其余43株為陰性。

2.3細(xì)菌鑒定法國(guó)生物梅里埃公司ATB Express微生物鑒定系統(tǒng)的鑒定結(jié)果為大腸埃希菌，補(bǔ)充動(dòng)力-吲哚-脲酶試驗(yàn)，動(dòng)力為陰性，綜合判斷為無(wú)活性大腸埃希菌。

2.4藥敏試驗(yàn)阿莫西林和替卡西林耐藥率為100%，哌拉西林、頭孢噻吩和復(fù)方磺胺甲噁唑耐藥率為78%，頭孢西丁和阿米卡星耐藥率為33%，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南和美羅培南耐藥率為0%，其他抗菌藥物的耐藥率為44%～55%。

3討論

引起腹瀉的志賀菌(我國(guó)主要為福氏志賀菌)和致瀉大腸埃希菌的研究頗為廣泛和深入，從微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)、感染性腹瀉發(fā)病機(jī)制、耐藥菌譜及其耐藥機(jī)制、新型治療方法及預(yù)防策略等方面進(jìn)行了研究[1-7]。在臨床實(shí)踐中，由于患者病情錯(cuò)綜復(fù)雜以及藥物使用千差萬(wàn)別，細(xì)菌感染性腹瀉的主要病原菌并非霍亂弧菌、志賀菌和沙門菌等經(jīng)典腸道病原菌，而是因腸道菌群失調(diào)使得某些條件致病菌大量繁殖，引發(fā)腹瀉。

研究者采用自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)對(duì)能與福氏志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)的菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，能與福氏志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)的病原菌不是福氏志賀菌，而是大腸埃希菌。將該細(xì)菌接種于克氏雙糖斜面瓊脂試管和動(dòng)力-吲哚-脲酶半固體瓊脂試管，結(jié)果表現(xiàn)為發(fā)酵葡萄糖不產(chǎn)氣、不發(fā)酵乳糖、無(wú)動(dòng)力、吲哚陽(yáng)性、脲酶陰性，這就是無(wú)活性大腸埃希菌。無(wú)活性大腸埃希菌與福氏志賀菌的生物學(xué)特性很相似，部分能與福氏志賀菌診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。

在腹瀉患者糞便中檢測(cè)到無(wú)活性大腸埃希菌的文獻(xiàn)報(bào)道很少[8-12]，很可能是大家仍在遵循傳統(tǒng)的大便細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，只關(guān)注志賀菌、沙門菌，而忽略菌群失調(diào)后條件致病菌的檢驗(yàn)。因此，需要高度重視容易被遺漏的無(wú)活性大腸埃希菌的檢測(cè)，才能為臨床治療提供更多微生物學(xué)支持。

本次檢測(cè)結(jié)果顯示，無(wú)活性大腸埃希菌的耐藥性較高，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[13-14]，認(rèn)為致瀉大腸埃希菌對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性不斷增加。在臨床用藥要結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選用敏感的抗菌藥物，合理進(jìn)行治療。

無(wú)活性大腸埃希菌能引起腹瀉，除易感人群的易感因素外，與該菌本身的致病因素有關(guān)。參考相關(guān)文獻(xiàn)資料[15]，可以直接檢測(cè)大腸埃希菌的毒力基因，為臨床提供更準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。該菌能引起腹瀉，作為大腸埃希菌的一個(gè)類型(無(wú)活性型)，是否與致瀉大腸埃希菌存在相同或相似的致病基因和耐藥基因，生物學(xué)特性與志賀菌極為相似的無(wú)活性大腸埃希菌，它們?cè)诨蛩绞欠褚埠芟嘟兀坑绕鋺?yīng)關(guān)注無(wú)活性大腸埃希菌是否含有志賀菌的致病基因和耐藥基因。進(jìn)一步研究無(wú)活性大腸埃希菌引起腹瀉的致病機(jī)制、流行病學(xué)調(diào)查、動(dòng)物模型構(gòu)建、耐藥機(jī)制，從而為腸道感染防治提供理論依據(jù)。

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Analysis of detection results of non active Escherichia coli in stool of infectious diarrhea

LiDaikun1，LiLi1，CaiWei1，YuXuemei1，F(xiàn)engXue1，XueJianjiang1△，ZhangDechun2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory，University-TownHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing401331,China;2.DepartmentofPathogenicBiology,MolecularofMedicineandTumorResearchCenter，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the identification and antibiotic resistance of non active Escherichia coli isolated from feces.MethodsClinical fecal specimens were collected from January 2013 to June 2015 for bacterial culture，identification and antimicrobial susceptibility testing．ResultsSixty-one strains of E.coli,inactive were detected，18 strains of which could be agglutinated with diagnostic serum of Shigella.Three stains could produce extented spectrum β-lactamases(ESBLs);The rate of antibiotic resistance of amoxicillin and ticarcillin was 100%，The rate of piperacillin，cephalothin and sulfamethoxazole was 78%，the rate of cefoxitin and amikacin was 33%，the rate of piperacillin/tazobactam，imipenem and meropenem was 0%.ConclusionNon active Escherichia coli can induce diarrhea，which is easily misdiagnosed as Shigella,the antimicrobial resistance between Escherichia coli and non active Escherichia coli is not significant difference.

Key words:infectious diarrhea；non active Escherichia coli；identification；antibiotic resistance

(收稿日期：2015-09-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.020

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0480-02

作者簡(jiǎn)介：李代昆，男，主管技師，主要從事臨床微生物學(xué)研究。△通訊作者，E-mail：1208456960@qq.com。