肉雞感染新城疫病毒的診斷

陳 浩（安徽省滁州溫氏畜牧有限公司，安徽 滁州 239500）

肉雞感染新城疫病毒的診斷

陳 浩
（安徽省滁州溫氏畜牧有限公司，安徽 滁州 239500）

某養(yǎng)雞場飼養(yǎng)的肉仔雞發(fā)生了一起以全身粘膜和漿膜出血，淋巴系統(tǒng)腫脹、出血和壞死為主要特征的傳染病，通過對(duì)病死雞的臨床癥狀觀察、病理剖檢、病毒分離、分離毒株血凝試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)，最終確定該雞場發(fā)生了雞新城疫病毒感染。

肉雞；新城疫病毒；診斷

雞新城疫（Newcastle disease，ND）是由雞新城疫病毒（Newcastle disease virus，ND）引起的一種多病型的高度接觸性、急性、烈性傳染病［1］，具有傳播速度快、發(fā)病率和死亡率高等特征［2］，是規(guī)模養(yǎng)殖場最容易發(fā)生的病毒傳染病之一，我國每年都有發(fā)病報(bào)道。新城疫病毒對(duì)所有家禽都易感，各種年齡和性別的雞都易感［3］。病雞和帶毒雞可以做為病毒傳播來源，受感染的雞在感染發(fā)病后的口和鼻分泌物中都可排出病毒，病毒感染后康復(fù)的雞也可以傳播病毒［4］。新城疫病毒感染一年四季都能發(fā)生，以春季多發(fā)，2016年3月，某規(guī)模肉雞飼養(yǎng)場飼養(yǎng)的肉仔雞發(fā)生了一起疑似新城疫病毒感染病例，經(jīng)臨床診斷和病毒分離鑒定最終確診為由新城疫病毒感染所致。

1　臨床癥狀觀察

2016年3月，某規(guī)模肉雞飼養(yǎng)場發(fā)生一起肉仔雞感染發(fā)病的情況，病雞表現(xiàn)食欲下降，精神萎靡，極少走動(dòng)，翅膀下垂，眼半閉半睜，病雞有咳嗽，呼吸困難，常常張口呼吸，糞便稀薄，呈黃綠色，發(fā)病后2～5 d死亡，病死率達(dá)60%左右。

2　病理剖檢

取病死雞剖檢可見全身粘膜和漿膜出血，淋巴系統(tǒng)腫脹、出血和壞死為主要特征。消化道和呼吸道病變明顯，腺胃粘膜水腫，腺胃乳頭出血、潰瘍、壞死；小腸和盲腸有大小不等的出血點(diǎn)，盲腸扁桃體腫大、出血和壞死；氣管出血和壞死；肺有淤血和水腫，腦膜充血和出血。

3　病毒分離

取病死肉雞的氣管等病變組織按1∶3比例加入滅菌生理鹽水研磨，12 000 r/min離心15 min，取上清液加青鏈霉素和卡那霉素（各2 000單位/mL）作用6 h后，接種10日齡SPF雞胚，0.1 mL/胚。每日照胚觀察雞胚死亡情況，24 h以內(nèi)的死胚棄去，雞胚集中死亡時(shí)間在24～72 h，收獲死亡雞胚的尿囊液，進(jìn)一步做分離株病毒的相關(guān)鑒定。

4　分離毒株的血凝試驗(yàn)

測定病毒分離時(shí)采集的尿囊液對(duì)1 %雞紅細(xì)胞的凝集性：采集2只公雞的抗凝血，混合后置于15.0 mL離心管中，加滅菌生理鹽水10 mL，1 500 r/min離心10 min，棄去上層液體，再加入滅菌生理鹽水10 mL，1 500 r/min離心10 min，重復(fù)操作2次后棄去上層液體。將下層紅細(xì)胞配成1%雞紅細(xì)胞懸液。在96孔微量血凝板中一橫排加上25 μL滅菌生理鹽水，第一個(gè)孔加上25 μL分離毒尿囊液，做倍比稀釋到橫排的倒數(shù)第二孔，棄去25 μL混懸液，每孔加25 μL1 %雞紅細(xì)胞懸液，微量振蕩器震蕩混合，放室溫20 min觀察血凝結(jié)果，分離毒尿囊液的血凝價(jià)為29。

5　中和試驗(yàn)

將分離毒尿囊液與等量抗新城疫病毒陽性血清作用1 h后，接種SPF雞胚10枚，24 h以內(nèi)的死胚棄去，24～120 h無雞胚死亡，觀察120 h后所有雞胚尿囊液做血凝試驗(yàn)。結(jié)果顯示，中和后的SPF雞胚尿囊液血凝試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，說明分離毒可以和新城疫陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，分離毒為新城疫病毒。

6　動(dòng)物回歸試驗(yàn)

將分離毒尿囊液作106倍稀釋后，腿部肌肉注射2月齡SPF雞10只，0.1 mL/只，同時(shí)取10只SPF雞注射滅菌生理鹽水作為對(duì)照，3 d后攻毒組試驗(yàn)雞開始發(fā)病，表現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、眼半閉半睜、咳嗽、呼吸困難、張口呼吸等癥狀，至攻毒后5 d，10只雞全部死亡，剖檢死亡雞可見典型的消化道和呼吸道病理變化。對(duì)照組10只雞全部健康，無不良臨床表現(xiàn)。

7　綜合診斷結(jié)果

根據(jù)養(yǎng)殖場發(fā)病肉雞的臨床癥狀和病理剖檢癥狀，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的病毒分離、血凝試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果，綜合判定該養(yǎng)殖場發(fā)生了新城疫病毒感染，對(duì)該養(yǎng)殖場采取病雞隔離飼養(yǎng)，飼養(yǎng)場嚴(yán)格消毒處理，緊急接種新城疫疫苗加強(qiáng)免疫，疫情得到有效控制。

8　討論

本研究通過對(duì)養(yǎng)殖場發(fā)病肉雞的臨床癥狀和病理剖檢癥狀觀察，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的病毒分離，血凝試驗(yàn)和中和試驗(yàn)結(jié)果，綜合判定該養(yǎng)殖場發(fā)生了新城疫病毒感染。病毒分離鑒定是疾病診斷最常規(guī)和可靠的試驗(yàn)方法，通過對(duì)該養(yǎng)殖場采取病雞隔離飼養(yǎng)，加強(qiáng)禽舍保溫防寒，加強(qiáng)飼料營養(yǎng)，飼養(yǎng)場采取嚴(yán)格消毒處理，對(duì)全群雞采取緊急接種新城疫疫苗加強(qiáng)免疫，疫情得到有效控制。雞舍一旦出現(xiàn)新城疫強(qiáng)毒感染，就很難凈化疾病［5］，所以對(duì)于新城疫的綜合防控，應(yīng)采取堅(jiān)持科學(xué)畜牧制度，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，堅(jiān)持疫苗免疫接種，防止新城疫強(qiáng)毒發(fā)生。雖然疫苗接種后可能會(huì)出現(xiàn)一些雞病情加重，加快死亡，但對(duì)未感染和未發(fā)病的雞群有很好的保護(hù)，由于雞群普遍接種新城疫疫苗免疫接種，雞苗中存在新城疫的母源抗體，所以雞群首免日齡過小可能會(huì)出現(xiàn)免疫失敗，母源抗體對(duì)新城疫的免疫有很大影響，母雞接種新城疫疫苗后，可將抗體通過卵黃傳播給雛雞，一般情況下，雛雞在3日齡時(shí)抗體滴度最高，之后逐漸下降，有母源抗體的雛雞對(duì)病毒有一定抵抗力，這常常導(dǎo)致疫苗接種的干擾作用，母源抗體在7日齡消失，可以進(jìn)行新城疫的首免；也可以在1日齡時(shí)使用滅活疫苗免疫，滅活疫苗受母源抗體的干擾少，或者使用滅活疫苗與活苗同時(shí)免疫，活苗對(duì)滅活疫苗有一定促進(jìn)作用，在有條件做血凝試驗(yàn)的雞場也可以根據(jù)HI試驗(yàn)結(jié)果免疫，在HI效價(jià)為23時(shí)接種效果最好。了解雞群的免疫狀況有助于雞群免疫程序的制定和完善，為健康養(yǎng)雞保駕護(hù)航。

［1］張玲，何娜，陳智，等.雞新城疫疫苗免疫效果的影響因素分析［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2016，32（2）：174.

［2］楊麗麗，鄒冬輝.新城疫病毒檢測方法的研究進(jìn)展［J］.吉林農(nóng)業(yè)，2015，（19）：90-91.

［3］朱小甫，吳旭錦，楊萍.雞新城疫病毒SXWN株的分離鑒定與基因分型［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016，（1）：160-163.

［4］趙秀麗.雞新城疫的流行特點(diǎn)及防控措施［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2015，31（7）：159-160.

［5］蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001，304-310.

（編輯：張淑鳳）

S858.32

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1006-799X（2016）13-0043-01