血清可溶性Fas、FasL與慢性丙型肝炎患者抗病毒療效的關(guān)系

李文虎，林淑珍，李新城

(1.東莞市厚街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心全科，廣東 東莞 523900；2.東莞市厚街醫(yī)院感染科，廣東 東莞 523900)

血清可溶性Fas、FasL與慢性丙型肝炎患者抗病毒療效的關(guān)系

李文虎1，林淑珍2，李新城1

(1.東莞市厚街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心全科，廣東 東莞 523900；2.東莞市厚街醫(yī)院感染科，廣東 東莞 523900)

目的 探討血清可溶性Fas、FasL與慢性丙型肝炎(CHC)患者抗病毒療效的關(guān)系。方法選擇2014年1月至2015年1月期間在我院及協(xié)作單位就診的40例CHC患者作為病例組，另選20例在我院及協(xié)作單位無償獻(xiàn)血的健康者作為對照組。病例組患者于治療前、治療4周、24周時測定血清可溶性Fas、FasL水平，健康組于病例組患者治療前同期測定上述參數(shù)，比較兩組的差異；并根據(jù)丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)是否轉(zhuǎn)陰將病例組分為兩個亞組(RVR組和nRVR組)，進(jìn)行比較分析。結(jié)果治療前病例組患者的血清可溶性Fas、FasL水平分別為(17.67±2.90)μg/L、(0.165±0.013)μg/L，明顯高于對照組的(7.87±1.24)μg/L、(0.098±0.007)μg/L，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；治療4周后，RVR組患者的血清可溶性Fas、FasL分別為(11.56±2.82)μg/L、(0.109±0.010)μg/L，明顯低于nRVR組的(16.93±2.56)μg/L、(0.161±0.017)μg/L，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且病例組血清可溶性Fas、FasL高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；治療結(jié)束后24周，RVR組患者的血清可溶性Fas、FasL水平分別為(8.95±1.49)μg/L、(0.099±0.008)μg/L，明顯低于nRVR組的(12.07±2.45)μg/L、(0.145±0.014)μg/L，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但病例組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論慢性丙型肝炎患者治療后血清可溶性Fas、FasL含量降低，趨向于正常值，治療后24周血清可溶性Fas、FasL接近正常值。因此，血清可溶性Fas、FasL水平可預(yù)測慢性丙型肝炎患者的治療效果。

可溶性Fas；可溶性FasL；慢性丙型肝炎；療效

慢性丙型肝炎(Chronic hepatitis C，CHC)不及時治療會引起肝臟組織發(fā)生壞死、纖維化等炎癥性病理改變，最終發(fā)展為肝硬化或肝癌病變，對患者的生活及生命質(zhì)量都產(chǎn)生巨大影響，增加了家庭醫(yī)療費用，造成了社會負(fù)擔(dān)[1-2]。最近研究發(fā)現(xiàn)，血清可溶性Fas、FasL與慢性丙型肝炎療效有一定的關(guān)系。Fas及以及Fas配體(FasL)為一對膜蛋白，主要介導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，二者相結(jié)合，對Fas細(xì)胞凋亡起到了誘導(dǎo)作用，故Fas-FasL系統(tǒng)具有誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的效果，當(dāng)其功能發(fā)生異常后可引發(fā)肝臟疾病[3-4]。為了進(jìn)一步探究血清可溶性Fas、FasL與慢性丙型肝炎療效之間的關(guān)系，筆者進(jìn)行此項研究，以期為慢性丙型肝炎的臨床治療與療效預(yù)測提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2015年1月在我院及協(xié)作單位就診且符合以下納入和排除標(biāo)準(zhǔn)的40例慢性丙型肝炎患者為病例組，所有患者均符合2004年《丙型肝炎防治指南》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男性23例，女性17例，年齡29～61歲，平均(49.36±6.74)歲。另選取在我院及協(xié)作單位無償獻(xiàn)血的健康者20例作為對照組，均知情同意，簽署知情同意書，其中男性11例，女性9例，年齡32～59歲，平均(48.86±5.97)歲。兩組受檢者的性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)初治患者；(2)年齡16～65歲，性別不限；(3)抗HCV呈陽性表達(dá)，且陽性表達(dá)不低于6個月者；篩選時抗HCV陽性，且有陽性病史至少6個月；(4)納入本研究前四周內(nèi)血漿HCV RNA高于10E3 IU/ml者；(5)同意在參加本研究期間不接受其他非干擾素的抗病毒治療。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)同時合并有乙肝病毒或者艾滋病毒感染者；(2)日飲酒量高于30 g/d；(3)同時合并有肝臟其他疾病者。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 病例組患者入組后給予普通干擾素500萬U，皮下注射治療，一周三次；利巴韋林(rRibavirin，RBV)，口服，劑量為10.6～15 mg/(kgd)，以連續(xù)治療48周為一個療程。

1.3.2 觀察指標(biāo) 比較治療前后病例組受檢者血清可溶性Fas、FasL。治療4周及24周后，根據(jù)丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)是否轉(zhuǎn)陰，將病例組分為兩亞組：RVR組和nRVR組，比較兩亞組血清可溶性Fas、FasL。

1.2.3 檢測方法 采用夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測兩組受檢者血清可溶性Fas、FasL水平及甲乙丙及戊型肝炎病毒抗原、抗體，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作；肝功能用常規(guī)生化法；HCV RNA定量檢測送廣州中山大學(xué)達(dá)安檢驗中心完成。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，連續(xù)型資料統(tǒng)計比較前予以正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組受檢者的血清可溶性Fas、FasL水平比較 治療前及治療4周后病例組受檢者的血清可溶性Fas、FasL高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。治療24周后，病例組血清可溶性Fas、FasL水平高于對照組，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組受檢者的血清可溶性Fas、FasL水平比較(±s)

表1 兩組受檢者的血清可溶性Fas、FasL水平比較(±s)

項目 組別 治療前4周后24周后可溶性Fas (μg/L)可溶性FasL (μg/L)對照組(n=20)病例組(n=40) t值P值對照組(n=20)病例組(n=20) t值P值7.87±1.24 17.67±2.90 12.304 0.000 0.098±0.007 0.165±0.013 6.789 0.005 7.79±1.56 13.83±1.98 7.895 0.004 0.096±0.005 0.139±0.010 4.983 0.011 7.82±1.34 10.07±1.76 2.457 0.059 0.097±0.008 0.108±0.011 1.765 0.098

2.2 RVR組和nSVR組患者的可溶性Fas、FaSL比較 治療4周后，nRVR組血清可溶性FAS、FasL水平顯著高于RVR組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。治療24周后，nRVR組血清可溶性Fas、FasL水平顯著高于RVR組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 RVR組和nSVR組患者的可溶性Fas、FaSL比較(±s)

表2 RVR組和nSVR組患者的可溶性Fas、FaSL比較(±s)

時間 組別 可溶性Fas(μg/L)可溶性FasL(μg/L)治療4周后治療24周后RVR組(n=17) nRVR組(n=23) t值P值SVR組（n=25) nSVR組(n=15) t值P值11.56±2.82 16.93±2.56 5.443 0.009 8.95±1.49 12.07±2.45 3.876 0.037 0.109±0.010 0.161±0.017 5.782 0.007 0.099±0.008 0.145±0.014 4.491 0.018

3 討 論

丙型肝炎是我國病毒性肝炎中唯一發(fā)病率增加的疾病病種[5]。針對丙型肝炎的抗病毒治療及其療效和對預(yù)后的影響已成為近年來醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點，醫(yī)務(wù)工作者希望加強(qiáng)這些方面的研究，以獲得丙型肝炎早期診斷和治療的相關(guān)資料，從而提高丙型肝炎的治愈率[6]。

FasL是一種死亡因子，F(xiàn)as是前者的受體，兩者均可分泌或脫落到細(xì)胞外，成為可溶性功能活性分子。當(dāng)T淋巴細(xì)胞的FasL與某細(xì)胞的Fas結(jié)合后，會導(dǎo)致表達(dá)Fas的細(xì)胞凋亡[7]。病毒性肝炎發(fā)病的重要機(jī)制之一為由Fas-FasL系統(tǒng)介導(dǎo)下的肝細(xì)胞凋亡，肝細(xì)胞表面Fas抗原由于肝炎病毒的刺激而增多，同時肝炎病毒又誘導(dǎo)CTL表達(dá)FasL。由此可見，F(xiàn)as與FasL共同引發(fā)和誘導(dǎo)了病毒性肝炎患者肝細(xì)胞的凋亡。這一凋亡過程正常發(fā)生時，病毒性感染的肝細(xì)胞中DNA被降解，有效重質(zhì)量病毒基因的復(fù)制擴(kuò)散[8-9]。有學(xué)者用免疫組化法研究慢性丙肝患者干擾素治療前后肝穿刺標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)在HCV RNA陰性組，干擾組治療后Fas抗原水平比治療前明顯降低，但HCV RNA陽性組，干擾素治療后Fas表達(dá)水平無明顯差異，說明Fas的持續(xù)表達(dá)與HCV持續(xù)感染有關(guān)[10-11]。許多資料顯示，病毒陽性肝組織Fas表達(dá)水平明顯高于病毒陰性肝組織，本次研究中，干擾素治療前，病例組血清可溶性FasL、FasL水平明顯高于對照組(P＜0.05)，與文獻(xiàn)報道基本一致[12-15]，這與肝炎病毒刺激肝細(xì)胞胞表達(dá)Fas抗原增多，又誘導(dǎo)FasL過表達(dá)有關(guān)[16]。相關(guān)文獻(xiàn)報道[17]，病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)可用于抗丙型肝炎病毒治療療效的評價，故此次實驗中，研究者采用病毒學(xué)應(yīng)答作為評價慢性丙肝治療效果的標(biāo)準(zhǔn)。治療4周后，RVR組血清可溶性FasL、FasL水平明顯低于nRVR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，這說明當(dāng)治療有效后，HCVRNA轉(zhuǎn)陰的患者的血清可溶性FasL、FasL水平水平開始降低；治療結(jié)束后24周隨訪發(fā)現(xiàn)，RVR組血清血清可溶性FasL、FasL平均水平明顯低于nRVR組(P＜0.05)，與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，也說明當(dāng)治療有效后，HCV RNA轉(zhuǎn)陰的患者血清可溶性FasL、FasL水平降低，且逐漸趨向于對照組正常血清可溶性FasL、FasL水平。并且從RVR也說明隨著治療時間的增長，治療效果的增加，血清可溶性FasL、FasL水平降低程度越來越明顯，當(dāng)治療后24周檢測時，血清可溶性FasL、FasL水平已經(jīng)與正常對照組的水平無明顯差異，提示血清可溶性FasL、FasL水平可以作為慢性丙型肝炎抗病毒預(yù)后評價指標(biāo)。此外，研究中還發(fā)現(xiàn)用夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清可溶性FasL、FasL水平時，需要注意：(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線要做好，檢測試劑質(zhì)量需合格，具體操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行，保證樣品稀釋倍數(shù)準(zhǔn)確；(2)加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡；(3)溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個因素，試劑盒不同則溫育時間和溫度均不同，故不可隨意更改溫育時間和溫度，否則會產(chǎn)生試驗結(jié)果誤差；(4)洗板時要避免洗液從孔外溢出；(5)加入洗液靜置1 min后甩掉板孔中的洗液且要用力拍干；(6)及時換掉用過的吸水紙，以避免影響結(jié)果。

綜上所述，血清可溶性FasL、FasL水平與丙型肝炎抗病毒治療效果密切相關(guān)，有助于慢性丙型肝炎抗病毒治療更早的判斷預(yù)后，指導(dǎo)治療。

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Relationship between serum soluble Fas/soluble FasL and antiviral efficacy of patients with chronic hepatitis C.

Li Wen-hu1,LIN Shu-zhen2,LI Xincheng1.1.Department of Gneral Practice,Houjie Community Health Service Center of Dongguan,Dongguan 523900,Guangdong,CHINA;2.Department of Infectious Disease,Dongguan Houjie Hospital, Dongguan 523900,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between serum soluble Fas/soluble FasL and antiviral efficacy in patients with chronic hepatitis C(CHC).MethodsA total of 40 cases of CHC patients,who were admitted to our hospital and cooperative units from January 2014 to January 2015,was selected as the case group,and 20 cases of healthy cases of voluntary blood donors were enrolled as a control group.The serum levels of soluble Fas and soluble FasL before treatment,4 weeks and 24 weeks after treatment in two groups were determined and compared.According to the results of HCV RNA,the case group was further divided into two subgroups(RVR group and nRVR group)for analysis.ResultsThe serum soluble Fas and soluble FasL levels before treatment in case group[(17.67±2.90)μg/L, (0.165±0.013)μg/L,respectively]were significantly higher than control group[(7.87±1.24)μg/L,(0.098±0.007)μg/L, respectively)(P＜0.05).After 4 weeks of treatment,the serum levels of soluble Fas and soluble FasL in RVR group [(11.56±2.82)μg/L,(0.109±0.010)μg/L,respectively]were significantly lower than nRVR group[(16.93±2.56)μg/L, (0.161±0.017)μg/L,respectively](P＜0.05).Moreover the serum soluble Fas and soluble FasL levels in case group were significantly higher than control group(P＜0.05).After 24 weeks of treatment,the serum soluble Fas and soluble FasL levels in RVR group[(8.95±1.49)μg/L,(0.099±0.008)μg/L,respectively]were significantly lower than nRVR group [(12.07±2.45)μg/L,(0.145+0.014)μg/L,respectively](P＜0.05),while there was no statistical significance difference between case group and control group(P＞0.05).ConclusionAfter 24 weeks of treatment,the levels of serum soluble Fas and soluble gradually decreased to normal in patients with chronic hepatitis C,so the serum levels of soluble Fas and soluble FasL can be used to predict therapeutic effect of patients with chronic hepatitis C.

Soluble Fas;Soluble FasL;Chronic hepatitis C;Therapeutic effect

R512.6+3

A

1003—6350（2016）09—1397—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.09.008

2015-12-09)

東莞市2014年度科技計劃項目（編號：201410515000589）

基金項目：李文虎。E-mail：2055363462@qq.com