膽囊切除術后兔血清CCK8 的變化及意義

劉振華 王寧 張帥民 徐賢剛 黎濤 石承先△

(1.貴州省人民醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫(yī)院，貴州 貴陽 550002)

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膽囊切除術后兔血清CCK8 的變化及意義

劉振華1王寧2張帥民1徐賢剛1黎濤1石承先1△

(1.貴州省人民醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫(yī)院，貴州 貴陽 550002)

膽囊切除術； CCK8； oddi括約??； 兔

Oddi括約肌(SO)生理運動在維持正常膽道動力學中起著重要作用 ,其主要受神經、體液因素調節(jié)。CCK作為胃腸肽類激素之一對SO的調節(jié)具有重要作用[1]。在CCK家族中，縮膽囊素八肽(CCK8)生理作用最大。CCK可直接作用SO內的縮膽囊素A受體(CCKAR)發(fā)揮作用。膽囊切除術后綜合癥(PCS)概念的提出使得SO的病理生理受到高度重視，部分病因為SO功能障礙(SOD)[2]，本實驗通過觀察膽囊切除術后兔血清CCK8濃度的變化，探討CCK8與SO生理活動的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料與儀器 日本大耳白兔20只(購于貴州醫(yī)科大學動物實驗中心)，兔CCK-8 ELISA試劑盒(武漢華美生物技術有限公司)，LGR10-4.2 離心機(北京醫(yī)用離心機廠)，PZF-6021型干燥箱(中國上海)，BCD-00A型冰箱(青島海信)，ELx800UV型酶標儀(Bio-Tek公司)

1.2 各組動物處理 20只日本大耳白兔，雌雄不限，體質量(2.5±0.5) kg,經適應性飼養(yǎng)1周后隨機分成A、B兩組，每組10只。A組為對照組；B組為膽囊切除組。術前禁食12 h，禁水4 h，稱重后以25%烏拉坦經耳緣靜脈注射麻醉(2.5 mL/kg)。將兔固定于實驗臺上，剪去腹部體毛，常規(guī)消毒術野、鋪敷。取上腹正中切口5 cm，逐層止血，經腹白線進入腹腔，甲狀腺拉鉤牽拉腹壁，以生理鹽水紗布推開胃十二指腸，暴露兔肝門部，在右上腹部肝臟中找到膽囊。A組行單純觸摸膽囊后分兩層關腹；B組，開腹在膽囊三角中分清結構后，膽囊管與膽囊動脈一并結扎，順逆結合切除膽囊。術后飼養(yǎng)1個月，取下腔靜脈血留置標本。

1.3 兔縮膽囊素八肽的測定 推開十二指腸，10 mL注射器取下腔靜脈血5 mL，在生化速凝管冷凝約30 min，3 000 r/min離心機離心5 min，取上層血清2 mL，貯于-80 ℃冰箱保存待測CCK-8濃度。取完標本后經耳緣靜脈注射40 mL空氣處死兔。嚴格按照兔CCK-8 Elisa試劑盒說明書操作，用酶標儀在 450 nm 波長測量各孔的光密度(OD值)。

2 結 果

兩組兔血清中CCK8濃度的比較，A組血清CCK-8濃度為(195.69±23.07) pg/mL，B組兔血清CCK8濃度為(117.72±26.55) pg/mL，B組較A組顯著降低(P<0.01)。

3 討 論

膽囊、膽總管和SO三者是統(tǒng)一、協(xié)調的結構，在消化系統(tǒng)中起著重要作用。膽胰腸結合部是人體解剖結構和生理調控最為復雜的區(qū)域之一，SO是位于膽管、胰管和十二指腸結合部位的神經肌肉復合體，是膽汁和胰液的最終流出道，膽囊平滑肌的收縮和SO開放是一組協(xié)同的過程, 也是排出膽囊內容物以及排空膽囊的生理基礎。這一運動除了受豐富的內臟運動神經來支配外，還受膽囊收縮素和促胰液素等體液因素調節(jié)。

CCK最早由Ivy和 Oldberg 首先在小腸黏膜抽提液中發(fā)現(xiàn),并因其有促進膽囊收縮的功能而得名[3]。根據(jù)肽段的長度不同，目前發(fā)現(xiàn)的CCK有CCK83,CCK58,CCK39,CCK22,CCK8,CCK1等[4]，其中CCK8的生理效應最大。生理條件下 ,由十二指腸黏膜分泌的CCK使膽囊收縮時也伴有SO舒張,而膽囊舒張時則SO呈收縮狀態(tài)。有研究[5]顯示餐后生理劑量CCK通過非腎上腺素能—非膽堿能抑制性神經元介導抑制SO的周期性收縮和降低SO基礎壓 ,促使膽囊排空；此外,刺激迷走神經使膽囊收縮而SO松弛。相反,切斷迷走神經后膽囊擴張而SO收縮。這種膽囊與SO活動在功能上的協(xié)調關系受神經和體液的雙重調節(jié)。Q.Zheng等[6]對家兔進行膽囊空腸吻合后SO緊張性收縮加強,而自發(fā)性收縮減弱,其原因為手術后SO對激素作用的敏感性下降了，提示在SOD的病人行膽囊空腸吻合可能起不了治療作用。但膽囊切除術后，膽囊與oddi括約肌的這種協(xié)調關系是否受影響并不清楚。G.T.Krishnamurthy等[7]研究發(fā)現(xiàn) ,括約肌痙攣病人在使用CCK8后膽囊收縮，膽汁返流入肝內外膽管，而停止注射時膽汁返流人膽囊。然而在臨床上可見到，在膽囊切除術后，在除外膽管結石及上腹其他疾病后，仍有近10%的患者發(fā)生類似膽絞痛的癥狀，一般稱為PCS，其原因并不十分清楚。本實驗顯示，膽囊切除術后CCK8的濃度明顯下降。這種下降是否會使Oddi括約肌緊張度增加，松弛不夠，是否就是膽囊切除術后暴飲暴食后膽汁排出受限而誘發(fā)膽絞痛的原因，有待進一步研究。

[1] 徐華, 吳叔明. Oddi氏括約肌的運動功能及影響因素[J]. 國外醫(yī)學：消化系疾病分冊,2003,23(4):239-242.

[2] Toouli J. The sphincter of Oddi and acute pancreatitis-revisited[J]. HPB (Oxford),2003,5(3):142-145.

[3] Tusher V G, Tibshirani R, Chu G. Significance analysis of microarrays applied to the ionizing radiation response.[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(9):5116-5121.

[4] 陳大慶, 倪宏. 縮膽囊素生物學作用的多樣性[J]. 國外醫(yī)學：兒科學分冊,2002,29(3):164-166.

[5] Dong M, Sonoda Y, Kawamoto M, et al. Duodenum is important for the sphincter of Oddi motor response to cholecystokinin octapeptide in conscious dogs[J]. J Gastroenterol,2005,40(4):389-395.

[6] Zheng Q, Chen Y. The Effects of Cholecystojejunostomy and Biliary Drainage on Biliary Motor[J].Huazhong UnivSci Technolog Med Sci，2002,22:144-147.

[7] Kurishnamurthy GT.Kurishnamurthy S，Waston RD.Characterization of basal hepatic bile flow and the effects of intravenous cholecystokinm on the live.sphincter.and gallbladder in patients with sphincter of Oddi spasm[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging，2004，31：85-93.

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1000-744X(2016)07-0714-02

2016-04-25)

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