疑難血型鑒定與分析1例

王向紅　邢巧玲　李雅潔　羅敏莉　韓省華　楊翠麗　毛麗梅

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疑難血型鑒定與分析1例

王向紅邢巧玲李雅潔羅敏莉韓省華楊翠麗毛麗梅

目的對1例疑難血型臨床樣本進行檢測及分析，為輸血科血型鑒定，交叉配血提供實踐依據(jù)。方法分別用不同試劑公司的微柱凝膠單克隆抗體卡和ABO血清，血球試劑，采用經(jīng)典試管法，卡式法，唾液HAB血型物質(zhì)測定，吸收放散試驗。結(jié)果此標本血型是AxB血型。結(jié)論此標本鑒定血型表型是AxB亞型。

ABO血型系統(tǒng)；ABO正反定型不符；血型亞型；AxB亞型

人類紅細胞血型是屬于同種異型抗原，目前已發(fā)現(xiàn)紅細胞血型系統(tǒng)35個，ABO血型基因位點在第9號染色體上，一般不改變，但某些因疾病的原因如白血病或?qū)嶓w瘤等有可能致使ABO血型系統(tǒng)抗原減弱，此種減弱一般是暫時性，隨著疾病的緩解逐漸恢復(fù)原來的血型。ABO血型的準確鑒定十分重要，血型錯誤可影響輸血工作，ABO血型鑒定錯誤是引起溶血性輸血反應(yīng)的最主要原因，嚴重可危及患者生命。在血型鑒定中，ABO亞型常導(dǎo)致血型錯判，交叉配血不合[1]。

1　資料與方法

1.1一般資料孕婦孕39周，肝功能、腎功能檢查均正常，梅毒、表面抗原、丙肝抗體、艾滋病均陰性，因貧血，血色素76 g/L來我院生產(chǎn)。在生產(chǎn)前備血，空腹抽取靜脈血2 ml,EDTA抗凝。

1.2試劑與儀器ABO、RhD血型微柱凝膠正反定型檢測卡(單克隆抗體)、ABO反定型紅細胞、血型鑒定質(zhì)控品，符合國家標準，所有試劑均在有效期內(nèi)，試劑專用血型血清學離心機，免疫微柱孵育器。實驗前所有正反定型檢測卡，試管法正反定型試劑均用質(zhì)控品做質(zhì)控，相差不到1+。

1.3方法

1.3.1血型鑒定

1.3.2微柱凝膠法單克隆抗體，經(jīng)典試管法進行ABO正反定型：微柱凝膠卡法，采集患者的靜脈離心，血制備成0.8%懸液紅細胞和血清標本。取微柱凝膠正反定型試劑卡，將受檢者紅細胞懸液按每管50 μl加入，將受檢者血清每管50 μl加入微管中，再將反定型試劑A1、B細胞分別加入微管中，即刻使用專用離心機離心，取出判定結(jié)果，同時做自身對照。分別置于室溫、4℃、37℃，用經(jīng)典試管法，按照全國臨床檢驗操作規(guī)程(第3版)操作和標準進行結(jié)果判斷[2]。

1.3.3唾液HAB血型物質(zhì)測定：按照全國臨床檢驗操作規(guī)程(第3版)操作和標準進行結(jié)果判斷[2]。

1.3.4吸收放散試驗：按照全國臨床檢驗操作規(guī)程(第3版)操作和標準進行結(jié)果判斷[2]。

2　結(jié)果

2.1ABO正反定型使用長春博迅生物技術(shù)有限責任公司和江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司ABO正反定型凝膠卡，在室溫、4℃、37℃不同溫度下正定型抗A最高是1+；抗B：4+；抗A+B：4+，反定型在室溫、4℃、37℃不同的溫度下A1c：1+；Bc：0；Oc：0，自身對照：0。

2.2試管法鑒定使用上海血液生物醫(yī)藥公司、中國醫(yī)學科學院輸血研究所不同試劑公司的血型試劑，在室溫、4℃、37℃不同的溫度下，正定型抗-A最高1+，抗-B ：4+，抗-A+B ：4+，抗-A1最高：1+，抗-H： 4+, 反定型結(jié)果：A1抗原最高：2+，B抗原：0，O抗原:0，自身對照:0，使用上海血液生物醫(yī)藥公司和長春博迅生物技術(shù)有限責任公司的試劑反定型結(jié)果相同見，符合AxB亞型特點，確定標本為AxB亞型，進一步做基因?qū)W實驗證實。

2.3吸收放散試驗受檢者放散使用立即離心和二次離心結(jié)果2+。

3　討論

臨床輸血首先要避免亞型漏檢或?qū)喰驼`判，ABO血型系統(tǒng)的抗原除經(jīng)典的A、B、O以外，還包括多種亞型血型，比如有A2、Ax、CisAB、Ael、Bm等，ABO亞型共同的血清學特點是A和B亞型紅細胞與A型和B型紅細胞主要區(qū)別表現(xiàn)在紅細胞膜上抗原決定簇數(shù)量上，有時肉眼幾乎看不到凝集，不規(guī)則抗體可以出現(xiàn)同時存在不規(guī)則抗-A1，抗B1， 判斷ABO亞型主要觀察與H抗體的凝集會增強[3]，可增加抗-AB、抗-H、抗-A1試劑做正定型提供更多的分析數(shù)據(jù)[4]，亞型吸收能力低于正常紅細胞，但放散能力強于正常紅細胞，唾液中的型物質(zhì)以能否檢測到A或B物質(zhì)等來確定，亞型是造成ABO血型正反定型不符的主要原因之一[5]。臨床實驗室易將A型，B型亞型誤認為O型，AB亞型誤認為A型或B型，給輸血科的血型鑒定帶來一定困難[6]。若出現(xiàn)正反定型結(jié)果不符，正定型小于4+，正反定型相差2+ 以上時，要進行血型鑒定分析，正確判定ABO血型。

A1型紅細胞上有A和A1兩種抗原，A2細胞上僅有A抗原。臨床實驗室易將AxB誤定為B型，為確保安全輸血安全，應(yīng)使用ABO正反定型方法進行鑒定。AxB型血清中的抗-A1抗體較弱，有時是冷凝集。AxB亞型要與亞型B(A)型相區(qū)別，AxB型中A1細胞凝集較弱，有時需要4℃加強。B(A)型的H抗原增強明顯成3+以上，反定型與A1細胞凝集強于3+以上，部分和A2細胞凝集。另外也要與CisAB做一區(qū)別，兩者的遺傳方式相似，與抗A血清反應(yīng)較強，與自然發(fā)生的人血清抗B弱凝集或不凝集，血清中有弱的抗-B。

臨床上常用的單克隆ABO血型試劑不能全部識別略有變化的ABO血型，造成不同試劑公司的單克隆試劑ABO血型抗原系統(tǒng)表位A或B抗原檢測結(jié)果上的差異和漏檢，尤其對亞型，所以發(fā)現(xiàn)正反定型不符時要使用不同試劑公司的試劑做重復(fù)試驗，并且對不同的試劑公司的試劑做質(zhì)控對照。除新生兒標本外，必須加用抗抗-AB血清，抗-H血清，抗-A1對鑒定和區(qū)分亞型有一定的意義，正反血型定型不一致的標本還可以做吸收放散試驗來證實標本是否含有弱的抗-A和弱的抗-B，做吸收放散試驗時最好利用人源性抗-A(B)或3份以上的單克隆抗體試劑的混合后進行試驗，同時進行唾液中血型物質(zhì)的測定，用以輔助判斷血型。

發(fā)現(xiàn)ABO正反血型鑒定不相符時，首先排除操作上的錯誤，其次是受檢者是否是年齡<1或>60，患者的丙種球蛋白是否減低[7]，患者血清與O型普篩紅細胞的反應(yīng)與試劑紅細胞是否一樣，患者是否是白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸或直腸癌，支原體肺炎，自身免疫性溶血，肝硬化等[8]，混合視野反應(yīng)是否是輸血后標本等來自于標本本身原因后進行血型試驗，方法應(yīng)選擇經(jīng)典的試管法，在4℃、37℃和室溫下進行試驗，一般在4℃和室溫條件下活性較強，37℃時活性較弱,唾液HAB血型物質(zhì)測定，吸收放散試驗等方法綜合評價[9]，同時有條件可用分子生物基因?qū)W實驗證實。

本實驗使用不同試劑公司的試劑和不同方法的結(jié)果是：用微柱凝膠單克隆抗體卡式法，正定型：與抗-A血清反應(yīng)最高1+，與抗-B血清反應(yīng)均顯示正常預(yù)測的4+，與抗-A+B血清反應(yīng)均為4+，反定型樣本血清與A1細胞反應(yīng)強度最高為2+；與B細胞反應(yīng)均為不凝集，正反定型不符。

本實驗在不同溫度下檢測，按照試管法操作程序鑒定和判斷標準結(jié)果：鏡下觀察正定與抗-A反應(yīng)出現(xiàn)微弱凝集最高1+，抗-B側(cè)出現(xiàn)4+，與抗-A+B血清反應(yīng)均是4+，與抗-H血清反應(yīng)4+，反定型標本血清與A1細胞反應(yīng)強度最高為2+；與B細胞反應(yīng)不凝集，同時用人原A1紅細胞和B紅細胞試劑做反定型檢測，正反定型比較出現(xiàn)異常，反定型與正定型血型不符。

經(jīng)微柱凝膠單克隆抗體卡式法、經(jīng)典試管法、唾液HAB血型物質(zhì)測定是分泌型，含有B物質(zhì)，H物質(zhì)，無A物質(zhì)，吸收放散試驗2+，強于正常人，唾液HAB血型物質(zhì)測定、吸收放散試驗具有AxB血清學特點所以鑒定為極其稀有的AxB血型，經(jīng)上級血型實驗室用分子生物基因?qū)W實驗也得到證實，提示為AxB亞型。

AxB亞型中有抗-A1抗體產(chǎn)生的可能，在接受血液輸注應(yīng)選O洗滌紅細胞和AB型血漿[10]。AxB亞型一般不能作為獻血員，易造成輸血反應(yīng)，對于女性獻血有必要開展血清意外抗體篩查，以避免臨床輸血配血時次側(cè)配血不合[11]。輸血科在血型鑒定時應(yīng)常規(guī)使用正反定型鑒定，正反定型不符，結(jié)合臨床疾病和檢驗結(jié)果綜合分析，采用多種方法進行鑒定，綜合分析確定血型，避免亞型漏檢，提高安全輸血意識。

1莊文化，莊彩梅.CisAB與AxB血型個案檢測分析.臨床輸血與檢驗雜志，2014,10:432.

2衛(wèi)生部臨床檢驗中心.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第3版.南京:東南大學出版社,2006.

3王北元，揚帆，焦立新.AxB型引起血型正反不符1例.中國實驗診斷學雜志,2010,12:15.

4劉郁.邢臺地區(qū)無償獻血者ABO血型分布及正反定型不符調(diào)查分析.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2014,29:12-14.

5張惠蓮，楊婷，于洋.ABO血型正反定型不一致原因分析.國際檢驗醫(yī)學雜志,2011,32:9.

6張欽輝主編.臨床輸血學.第1版.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2000.82.

7李延偉，田慶華.因低丙種球蛋白血癥造成ABO血型正反定型不符1例.檢驗醫(yī)學與臨床,2014，11：98-99.

8馬硯敏，趙鳳蓮.33例ABO正反定型不符的原因分析及解決方法.中國醫(yī)藥指南,2013,11:582-583.

9李育，謝一鳴.受血者ABO血型正反定型不符循證分析.浙江醫(yī)學,2012,34:1191-1193.

10王振芳.AxB血型的檢測及臨床意義.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2013,23：1040-1042.

11劉福昌,許泰玲,姜珍一,等.獻血者ABO血型正反定型不符18例分析.中國輸血雜志,2014,27:393-395.

2015-10-21)

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.15.050

050051河北省石家莊市婦幼保健院

R 457.11

A

1002-7386(2016)15-2399-02