Livin和Bcl-2蛋白生物學(xué)特性及與膀胱移行細(xì)胞癌關(guān)系的研究進(jìn)展

楊立軍　鄭文武　周安傳　蘇曉哲　吳亞東　李珅

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Livin和Bcl-2蛋白生物學(xué)特性及與膀胱移行細(xì)胞癌關(guān)系的研究進(jìn)展

楊立軍鄭文武周安傳蘇曉哲吳亞東李珅

Livin與Bcl-2均為凋亡蛋白抑制因子，二者表達(dá)水平升高會(huì)打破細(xì)胞增殖凋亡平衡，二者可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本文對(duì)Livin和Bcl-2蛋白生物學(xué)特性、細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用，二者與膀胱移形細(xì)胞癌的關(guān)系進(jìn)行探討。對(duì)臨床指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。

Livin；Bcl-2；腫瘤，膀胱

細(xì)胞增殖和凋亡因子的失衡是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要原因，其中細(xì)胞凋亡還與腫瘤患者治療和預(yù)后有密切關(guān)系，同時(shí)也是腫瘤藥物開發(fā)的研究熱點(diǎn)。Livin與Bcl-2均為凋亡蛋白抑制因子，二者表達(dá)水平升高會(huì)打破細(xì)胞增殖凋亡平衡，其在不同腫瘤中均有不同程度的高水平表達(dá)，這可能與Livin與Bcl-2參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)。膀胱移行細(xì)胞癌在男性患者中高發(fā)，且病因不明。本文對(duì)Livin與Bcl-2的生物學(xué)特性及其蛋白表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系進(jìn)行闡述。

1　Livin與膀胱移行細(xì)胞癌

1.1Livin基因及蛋白結(jié)構(gòu) Livin是由 4個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)小組采用IAP同源序列(BIR或RING)尋找的方法,分別從人類基因組cDNA文庫(kù)中克隆得到[1]。Kasof等[2]將該基因命名為L(zhǎng)ivin ;Lin等[3]由人胎腎cDNA文庫(kù)中分離到該基因 ,故將其稱為KIAP(kidneyIAP);Vucic等[4]因發(fā)現(xiàn)該基因在人黑色素瘤細(xì)胞中表達(dá)較高,所以稱之為ML-IAP(melanoma IAP);Ashhab等[5]發(fā)現(xiàn)了該基因存在2個(gè)剪接變異體,分別命名為L(zhǎng)ivin α和Livin β，我們將其統(tǒng)稱為L(zhǎng)ivin。Livin基因位于人染色體20q13.3,全長(zhǎng)4.6 kb,包含7個(gè)外顯子?；蜣D(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA長(zhǎng)1.4 kb,這與Livin全長(zhǎng)cDNA大小一致。此外還發(fā)現(xiàn)存在長(zhǎng)約2.2 kb、2.8 kb和4.0 kb的轉(zhuǎn)錄子,這可能與mRNA3′端非翻譯區(qū)多腺苷酸化或存在未剪接加工成熟的前體RNA有關(guān)。Livin蛋白N端僅包含1個(gè)BIR結(jié)構(gòu),C端含1個(gè)RING環(huán)指結(jié)構(gòu)。Livinα和Livinβ分別由298和280個(gè)氨基酸組成,二者相差的18個(gè)氨基酸由介于BIR和RING結(jié)構(gòu)之間的第6外顯子5′端54bp的基因序列編碼。Livin氨基酸殘基C124、C127、H44及C151與鋅原子結(jié)合，以穩(wěn)定整個(gè)重疊結(jié)構(gòu)。Livin α和Livin β蛋白分子量分別為39 000和37 000[2-5]。

1.2Livin的細(xì)胞和組織分布Kasof等[2]用含有Livin基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞并檢測(cè)其表達(dá)產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核與胞漿內(nèi)同時(shí)成纖維細(xì)絲樣染色，由此可知Livin同時(shí)呈絲狀表達(dá)與胞質(zhì)和胞核。Hariu等[6]用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)肺癌細(xì)胞顯示Livin蛋白在胞核和胞漿內(nèi)均有顯色。Vuvic等[7]通過研究乳腺癌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，Livin C末端RING結(jié)構(gòu)與細(xì)胞內(nèi)微絲結(jié)構(gòu)結(jié)合，主要定位在細(xì)胞質(zhì)中，而不在紡錘體上。而Ka等[8]對(duì)不同時(shí)期的胎盤、滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛膜癌細(xì)胞系以免疫組織化學(xué)法染色，陽性染色僅位于胞核。目前，Livin在細(xì)胞內(nèi)的定位尚無定論。Livin兩種亞型的組織分布不同，Livin α主要表達(dá)于腦、骨骼肌及外周血淋巴細(xì)胞，Livin β主要表達(dá)于胎兒的心、胸腺以及成人和胎兒的腎[5]，Livin在正常組織中的表達(dá)分布仍需進(jìn)一步研究。

1.3Livin抗細(xì)胞凋亡作用和機(jī)制

1.3.1Livin抗細(xì)胞凋亡作用:①抗死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用 :Vucic等[4]將Livin基因轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF7細(xì)胞,證實(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)Fas, TNFR1(tumor necrosis factor receptor 1),DR4(death receptor 4)及DR5介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有顯著的抑制作用。Kasof等[2]將Livin基因轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染細(xì)胞可有效阻斷由FADD (fas-asociated protein with death domain),Bax、RIP、RIP3及DR6誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在Jurkat人T淋巴細(xì)胞株中,Livin可明顯抑制由TNF-α及抗CD95抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其抗細(xì)胞凋亡作用強(qiáng)于Bcl-2[5]。進(jìn)一步研究表明BIR結(jié)構(gòu)的完整在Livin抗細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用[2,4]。②抗線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用:星狀孢子素(staurosporine,STS)是一種蛋白激酶C(PKC)抑制劑,可誘導(dǎo)線粒體釋放細(xì)胞色素C,后者可進(jìn)一步激活細(xì)胞凋亡的下游通路。Livin α對(duì)STS誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡表現(xiàn)出一定的抑制作用,但作用弱于Bcl-2;而Livin β則無此作用,顯示了Livin α和Livin β的抗細(xì)胞凋亡作用存在不同[5]。③抗化療藥物介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用:許多化療藥物可引起細(xì)胞DNA的損傷而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。轉(zhuǎn)染Livin基因的MCF7細(xì)胞可有效對(duì)抗阿霉素,4TBP4(4 terttiarybutyiphenol)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[4]。Livinβ可明顯抑制依托泊苷(etoposide)誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡[5]。

1.3.2Livin抗細(xì)胞凋亡凋節(jié)機(jī)制:①抑制Caspase途徑:Livin可與激活形式的Caspase 3和Caspase 7結(jié)合,并抑制其生物活性。Livin還可與未加工的或斷裂形式存在的Caspase 9結(jié)合,抑制由Apaf1(apoptosis protein activating factor 1),細(xì)胞色素C及dATP誘導(dǎo)的Caspase 9激活作用。Livin與Cspase的結(jié)合抑制作用具有高度的特異性和親和性,這有賴于其BIR結(jié)構(gòu)域的完整,BIR結(jié)構(gòu)域內(nèi)單個(gè)氨基酸的突變即可影響Livin與Caspase的結(jié)合并使Livin抗細(xì)胞凋亡作用明顯降低甚至完全喪失[2,4]。②激活TAK1/JNK1信號(hào)傳導(dǎo)途徑:Livinβ可激活MAP(mitogen activated protein)激酶JNK1和JNK2,而Livin對(duì)JNK1的激活作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于JNK2,并且是Livin對(duì)抗TNFα和ICE介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用的一條重要途徑。JNK蛋白家族可直接由MKK4/MKK7激活,但Livin對(duì)JNK1的激活并不依賴于MKK4/MKK7信號(hào)途徑,而是通過TAB1/TAK1途徑實(shí)現(xiàn)。TAK1是一上游MAP3激酶,在TGFβ1的刺激下可激活JNK1。TAB1是TAK1的共反應(yīng)子(coactivator),TAB1本身對(duì)于JNK1無激活作用,但可促進(jìn)TAK1介導(dǎo)的JNK1激活作用。Livinβ可與TAB1結(jié)合,并進(jìn)一步激活TAK1[9]。此外,SMAC(second mitochondrial activator of caspases)及活性肽片段可與Livin的BIR結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合,抑制Livin與caspase的結(jié)合及其抗細(xì)胞凋亡作用。因此存在著由SMAC介導(dǎo)的對(duì)Livin抗細(xì)胞凋亡作用的負(fù)性凋節(jié)機(jī)制[10]。

1.4Livin與人腫瘤的關(guān)系Livin對(duì)細(xì)胞凋亡有明顯的抑制作用，因此探討其余腫瘤產(chǎn)生的關(guān)系成為研究熱點(diǎn)。采用Northernblot或RT-PCR方法,證實(shí)LivinmRN在人多種類型的腫瘤細(xì)胞系中高表達(dá),包括黑色素瘤(MeWo,A375,G361,SK Mel29),淋巴瘤(Ramos,Raji)、大腸癌(HT29,HT29MTX),前列腺癌(PC3,DU145),白血病(K562,HL60,Jurkat,MOLT4)及頭頸部肉瘤(HeLa)等[2,4,5]。特別是Vucic等[4]采用RT PCR方法檢測(cè)了35株黑色素瘤細(xì)胞系,發(fā)現(xiàn)均存在LivinmRNA高表達(dá),而正常的黑色素細(xì)胞則無LivinmRNA表達(dá)。以上研究結(jié)果提示Livin的高表達(dá)可能與人某些類型腫瘤的形成存在密切關(guān)系。但LivinmRNA在人乳腺癌細(xì)胞系MCF7及MDAMB435中僅有少量表達(dá),而在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中無表達(dá)。Yagihashi等[11]研究表明，Livin在胃腸癌患者中呈現(xiàn)高水平表達(dá)，提示其與胃腸癌的產(chǎn)生有一定聯(lián)系。Schmollinger等[12]提示Livin的表達(dá)缺失可以是腫瘤逃避機(jī)體免疫功能的識(shí)別的共計(jì)，因此其可作為治療靶點(diǎn)。Ashhab等[5]用RT- PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Livin在前列腺癌細(xì)胞系(PC3,DU145)及白血病瘤株K562,HL60中Livin兩種異構(gòu)體均高表達(dá)。國(guó)內(nèi)鞠文等[13]第一次報(bào)道了Livin基因在良性前列腺增生中的表達(dá)及Livin基因與前列腺癌分級(jí)的關(guān)系。細(xì)胞凋亡抑制因子Livin在BPH及前列腺腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，提示Livin基因可能通過抑制細(xì)胞的凋亡對(duì)BPH及前列腺腺癌的發(fā)生、發(fā)展起重要作用。

目前，以Livin基因作為靶點(diǎn)的免疫治療在不斷研究中。一組臨床Ⅰ期實(shí)驗(yàn)研究顯示，對(duì)黑色素瘤腸轉(zhuǎn)移的患者給予腫瘤免疫治療，取得了一定的臨床療效。Livin基因可以通過免疫調(diào)節(jié)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的破壞[12]。有文獻(xiàn)報(bào)道以Livin基因?yàn)榘悬c(diǎn)的RNAi技術(shù)也可以有效的特異性阻斷內(nèi)源性Livin基因的表達(dá)，使得caspase-3活化，明顯增強(qiáng)各種促凋亡因素(如阿霉素、紫外線照射、TNF-α)導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡率[14]。用Livin基因的反義核酸和Smac肽反向調(diào)節(jié)Livin基因的抗凋亡活性也收到明顯的效果，包括促進(jìn)化療藥物的促凋亡作用[2,10]。

1.5Livin在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)與關(guān)系Gazzaniga等[15]結(jié)果顯示Livin α和Livin β在正常膀胱組織中均無表達(dá),Livin β在膀胱癌組織中也無表達(dá),而Livin α表達(dá)陽性率為23%。進(jìn)一步研究顯示Livin α表達(dá)陽性的患者術(shù)后腫瘤平均復(fù)發(fā)時(shí)間為3.5月,而Livin α表達(dá)陰性的患者則延長(zhǎng)至27.2月,差異顯著，提示Livin α表達(dá)與膀胱癌患者預(yù)后密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)何遠(yuǎn)橋等[16]研究發(fā)現(xiàn)，Livin在正常膀胱組織中未表達(dá)，而膀胱移行細(xì)胞癌中呈現(xiàn)高水平表達(dá)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)Livin的表達(dá)在不同病理分級(jí)、臨床分期和是否復(fù)發(fā)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Livin在BTCC中高表達(dá)，提示Livin可通過抑制細(xì)胞凋亡，對(duì)BTCC的發(fā)生發(fā)展起重要作用;Livin在膀胱癌中有望成為一種有效、敏感的腫瘤標(biāo)志物，并為BTCC的基因治療提供新的方向。有研究發(fā)現(xiàn)，Livin與腫瘤的復(fù)發(fā)關(guān)系密切，可作為膀胱癌復(fù)發(fā)的早期監(jiān)測(cè)指標(biāo)[2]。

2　BCL-2與膀胱移行細(xì)胞癌

線粒體是參與細(xì)胞凋亡的最重要的超微結(jié)構(gòu)，凋亡過程中電子傳遞鏈的變化,線粒體膜電位的異常去極化,超常的細(xì)胞氧化-還原反應(yīng)都需依賴線粒體。線粒體膜上具有凋控凋亡的Bcl-2家族蛋白,該家族蛋白的結(jié)合狀態(tài)將凋節(jié)線粒體膜電位的變化,改變細(xì)胞色素C、Smac/DIABLO蛋白以及凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)等的釋放。從而通過激活caspases通路導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,或直接作用于細(xì)胞核引起細(xì)胞凋亡。由此可見,線粒體除了具有經(jīng)典的生物學(xué)效應(yīng)外,還具有凋控細(xì)胞存亡的重要作用[17]。

2.1BCL-2基因家族與蛋白家族Bcl-2基因是一種原癌基因，研究發(fā)現(xiàn)許多基因結(jié)構(gòu)與Bcl-2相似，參與細(xì)胞凋亡的調(diào)解，因此將這些基因統(tǒng)稱為Bcl-2基因家族。Bcl-2基因是t(14∶18)染色體異位斷點(diǎn)處發(fā)現(xiàn)的一種癌基因。Bcl-2家族迄今為止發(fā)現(xiàn)的Bcl-2家族同源蛋白不少于15種,均含有一種以上Bcl-2家族共有同源序列(BH1-BH4)。按結(jié)構(gòu)功能不同分前凋亡蛋白和抗凋亡蛋白。前凋亡蛋白均含BH3結(jié)構(gòu)域,多數(shù)抗凋亡蛋白含BH1和BH2區(qū),與Bcl-2高度同源的含1～4四個(gè)區(qū)[18]。前凋亡蛋白主要有Bax,Bcl-XS,Bak, Bad,Bik, Bim,Bid,Hrk和Bok;抗凋亡蛋白主要有Bcl-2,Bcl-XL,Mcl-1,A1/Bfl-1和Bcl-W。前凋亡蛋白之間、抗凋亡蛋白之間及這兩類蛋白之間可相互作用形成同源或異二聚體,形成一個(gè)復(fù)雜的凋控網(wǎng)絡(luò),前凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的相對(duì)比值在決定細(xì)胞生存抑或死亡中可能起關(guān)鍵作用。Bcl-2蛋白是抗凋亡蛋白之一，位于線粒體內(nèi)膜、核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，分子量為26 000，它是人類濾泡狀淋巴瘤的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。目前，關(guān)于Bcl-2抑制細(xì)胞凋亡的研究很多，Bcl-2的高表達(dá)可保護(hù)各種凋亡刺激，因此Bcl-2低表達(dá)或缺失的細(xì)胞死亡率明顯增加。

2.2BCL-2蛋白家族對(duì)細(xì)胞凋亡的凋控作用

2.2.1Bcl-2家族對(duì)線粒體通路的凋控：該通路的線粒體滲透性改變形成的PT孔 (permeability transitionpore)開放和線粒體內(nèi)致凋亡的多種蛋白釋放均受Bcl-2家族凋控。Bcl-2或其它抗凋亡蛋白過表達(dá)使許多本可致PT孔開放、細(xì)胞色素C及凋亡誘導(dǎo)因子 (apoptosis inducing factor,AIF)釋放的刺激失效，從而抑制細(xì)胞凋亡;而前凋亡蛋白Bax過表達(dá)導(dǎo)致線粒體跨膜電位丟失及細(xì)胞色素C釋放[19]導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Shimizu等[20]發(fā)現(xiàn)重組前凋亡蛋白Bax和Bak能加速電壓依賴的陰離子通道(voltage dependent anion channel,VDAC)開放,而Bcl-XL則通過直接與之結(jié)合關(guān)閉VDAC,提示Bcl家族蛋白可通過VDAC凋節(jié)線粒體膜的通透性,影響膜電位及細(xì)胞色素C釋放,從而促進(jìn)或抑制凋亡。

2.2.2Bcl-2家族對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路的凋控：鈣濃度變化在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路中是很關(guān)鍵的凋亡信號(hào),越來越多的證據(jù)表明Bcl-2家族除存在于線粒體膜表面外,也存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜,能阻斷多種致使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放儲(chǔ)存鈣的凋亡刺激。Foyouzi等[21]發(fā)現(xiàn)Bcl-2的通過增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜對(duì)鈣離子通透性而減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)可釋放的游離鈣離子濃度。

2.2.3Bcl-2家族對(duì)死亡受體通路的凋控:死亡受體通路通過Fas,TNFR激活Caspase8直接激活Caspase3引起凋亡,主要存在于線粒體表面的Bcl-2應(yīng)該對(duì)此通路無影響。但在另一些情況下Bcl-2可抑制死亡受體通路誘發(fā)的凋亡。

2.3Bcl-2與膀胱移行細(xì)胞癌及癌旁組織生物學(xué)行為的關(guān)系王養(yǎng)民等[22]研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2在膀胱正常黏膜組織中無表達(dá)，而在膀腫腫瘤中有表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤分級(jí)有關(guān)，呈現(xiàn)分級(jí)越高表達(dá)水平越高，但Bcl-2蛋白的表達(dá)能否作為膀胱腫瘤標(biāo)志物及與膀胱腫瘤患者存活有否關(guān)系仍需進(jìn)一步深入的研究。Shiina等[23]用免疫組化的方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-2 在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)為24.7%,在癌旁移行上皮中為96.1%?？翟系萚24]在膀胱膀胱癌及癌旁組織p53、Bcl-2表達(dá)的初步研究的結(jié)果顯示：腫瘤上皮中表達(dá)為31.1%,而在癌旁組織中為53.3%～75.5%。說明Bcl-2在表淺性BTCC及癌旁組織的基底及基底下層高表達(dá)。癌組織與癌旁組織Bcl-2的表達(dá)差異有顯著性(P<0.01)。羅旭等[25]報(bào)道，非浸潤(rùn)性膀胱癌的Bcl-2陽性率低于浸潤(rùn)性膀胱癌，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明Bcl-2蛋白表達(dá)與膀胱癌的臨床分期無關(guān)。復(fù)發(fā)性膀胱癌Bcl-2陽性率高于初發(fā)性膀胱癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明Bcl-2蛋白表達(dá)與膀胱癌的復(fù)發(fā)有關(guān)，可作為膀胱癌術(shù)后預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一。國(guó)內(nèi)習(xí)小慶等[26]報(bào)告的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)膀胱癌的陽性率分別為18.8%、52.0%和60.0%,表明其表達(dá)與癌組織的惡性程度有相關(guān)關(guān)系。有文獻(xiàn)報(bào)道,在子宮內(nèi)膜增生、胃腸上皮發(fā)育異常、皮膚組織病中Bcl-2表達(dá)明顯增高,在前列腺、胃腸道癌旁組織中Bcl-2的表達(dá)亦明顯增高[27-30]。癌旁組織Bcl-2表達(dá)的增高,說明Bcl-2基因可能是腫瘤發(fā)生與進(jìn)展的早期。

綜上所述,正常膀胱黏膜中Bcl-2呈現(xiàn)低表達(dá)或無表達(dá)，在移行細(xì)胞癌及其他膀胱腫瘤中有表達(dá)，且表達(dá)水平隨腫瘤分級(jí)升高而升高，同時(shí)與復(fù)發(fā)也有一定關(guān)系，可作為早期預(yù)測(cè)指標(biāo)，但與臨床分期無關(guān)。Bcl-2蛋白的表達(dá)能否作為膀胱腫瘤標(biāo)志物及與膀胱腫瘤患者的存活率是否有關(guān)系仍需進(jìn)一步深入研究。

3　Livin與Bcl-2表達(dá)的關(guān)系

Livin抗細(xì)胞凋亡凋節(jié)機(jī)制之一是抑制Caspase途徑: Livin可與激活形式的Caspase 3和Caspase 7結(jié)合,并抑制其活性。Livin還可與未加工的或斷裂形式的Caspase 9結(jié)合,可抑制由Apaf1(apoptosis protein activating factor 1),細(xì)胞色素C及dATP誘導(dǎo)的Caspase 9激活作用。Livin與Caspase的結(jié)合抑制作用具有高度的特異性和親和性,這于其BIR結(jié)構(gòu)域的完整密切相關(guān),BIR結(jié)構(gòu)域內(nèi)單個(gè)氨基酸的突變即可導(dǎo)致Livin抗細(xì)胞凋亡作用的明顯降低甚至完全喪失[2,4]。越來越多的研究表明，Caspase-3與Bcl-2在凋亡過程中的密切相關(guān)。一方面,Bcl-2的高表達(dá)可防止細(xì)胞色素C從線粒體中釋放，從而抑制Caspase-3的激活；同時(shí)Bcl-2還可以直接將胞漿中與Caspase 9結(jié)合的Apaf1結(jié)合于線粒體外膜，形成四聚體復(fù)合物，使Apaf1失去對(duì)Caspase-3酶的活化能力。另一方面，激活的Caspase-3能切割Bcl-2蛋白環(huán)狀區(qū)域的Asp34處，導(dǎo)致Caspase-3級(jí)聯(lián)反應(yīng)的放大。并且，由激活的Caspase-3所凋控的酪氨酸激酶對(duì)Bcl-2轉(zhuǎn)錄有抑制作用[31]。Woo等[32]用Western blot證明了在爆發(fā)性肝炎的Caspase-3缺乏的小鼠肝細(xì)胞中有完整的Bcl-2蛋白的表達(dá)。由此可見，抑制Caspase途徑可能是Livin和Bcl-2的共同抗細(xì)胞凋亡凋節(jié)機(jī)制，二者在細(xì)胞凋亡的調(diào)控方面起協(xié)同作用。

關(guān)于Livin與Bcl-2在膀胱移行細(xì)胞癌的表達(dá)的相關(guān)性，膀胱移行細(xì)胞癌分化程度越差,Livin與Bcl-2表達(dá)水平越高，Livin與Bcl-2在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面有協(xié)同作用，可能是二者共同抑制Caspase途徑從而抑制細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。在膀胱移行細(xì)胞癌中，Livin與Bcl-2發(fā)揮重要作用，與膀胱移行細(xì)胞癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)，深入研究Livin與Bcl-2在膀胱移行細(xì)胞癌中的蛋白表達(dá)及與其生物學(xué)行為的關(guān)系，對(duì)臨床指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后提供理論依據(jù)。

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2015-12-29)

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.15.033

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