宮頸脫落細(xì)胞HPVL1蛋白監(jiān)測在高危型HPV陽性婦女分流中的應(yīng)用

黃平，張雪，陳光元，金瑛

(深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院婦科1、檢驗科2，廣東 深圳 518105)

宮頸脫落細(xì)胞HPVL1蛋白監(jiān)測在高危型HPV陽性婦女分流中的應(yīng)用

黃平1，張雪2，陳光元1，金瑛2

(深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院婦科1、檢驗科2，廣東 深圳 518105)

目的 探討高危型人乳頭瘤病毒(HPV)陽性的婦女采用宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測的臨床實際意義。方法選擇2014年10月至2015年10月期間我院婦科收治的386例高危型HPV陽性患者，收集患者的宮頸脫落細(xì)胞，采用液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)、免疫組化兩種方法檢測HPV L1蛋白，同時對所有患者進(jìn)行陰道鏡檢測，可疑部分取活檢進(jìn)行病理檢查。對比HPV L1蛋白在正常婦女及不同的病理組織學(xué)病變患者中的表達(dá)情況。以此評估宮頸脫落細(xì)胞HPVL1蛋白檢測對篩查子宮病變的臨床實際價值。結(jié)果386例高危型HPV陽性患者中，發(fā)現(xiàn)正常子宮頸162例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變94例，高度鱗狀上皮內(nèi)病變128例，而子宮頸鱗癌2例，統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者的HPV L1蛋白陽性率明顯低于正常者和低度內(nèi)皮病變者。此外，宮頸脫落細(xì)胞的HPV L1蛋白檢測中的組織學(xué)診斷關(guān)于高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者兩種類型的敏感度、陰性預(yù)測值均明顯高于TCT檢查，但是在特異度一項中，組織學(xué)診斷則明顯低于TCT檢查，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而兩項檢查中對于陽性預(yù)測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；高危型HPV陽性患者中，HSIL、SCC患者的HPV L1蛋白陽性比例為19.2%，而正常以及LSIL者的蛋白陽性比例高達(dá)66.4%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；宮頸脫落細(xì)胞額HPV L1蛋白檢測中的組織學(xué)診斷關(guān)于高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者兩種類型的敏感度、陰性預(yù)測值均明顯高于TCT檢查，但是在特異度一項中，組織學(xué)診斷則明顯低于TCT檢查，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論對高危型HPV陽性的婦女患者而言，子宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測具有一定的篩查意義，能夠為臨床提供多一種且適宜的分流方案。

宮頸脫落細(xì)胞；人乳頭瘤病毒 L1；蛋白監(jiān)測；高危；婦女

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)是子宮癌發(fā)病的一項重要預(yù)測因素，和傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行對比，可以發(fā)現(xiàn)高危型HPV的檢測具有更高的敏感性，更容易檢測和篩查出宮頸病變[1]。甚至有學(xué)者建議可以采用HPV檢測來對宮頸癌進(jìn)行初級篩選以提高篩查率?？紤]到HPV檢測特異度較低，因此對初篩結(jié)果中HPV陽性婦女進(jìn)行分流就顯得尤為重要。HPV L1蛋白為HPV感染過程中的一種結(jié)構(gòu)蛋白，該蛋白的表達(dá)能夠精準(zhǔn)地反映宮頸細(xì)胞中HPV病毒處于何種狀態(tài)。本文通過分析HPV L1蛋白的監(jiān)測在高危型HPV陽性婦女分流中的價值，以探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年10月至2015年10月期間我院婦科收治的高危型HPV陽性患者386例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡30～65歲；(2)非妊娠女性；(3)患者或患者家屬自愿參與并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有嚴(yán)重的心肝腎等慢性疾?。?2)有神經(jīng)系統(tǒng)疾病或精神系統(tǒng)疾??；(3)既往宮頸癌或其他子宮病變。

1.2 方法 對所有患者進(jìn)行陰道鏡檢測，必要時對可疑的病變進(jìn)行陰道活檢。(1)高危型HPV的DNA檢測方法：收集受檢患者宮頸脫落細(xì)胞，應(yīng)用第二代的雜交捕獲方案進(jìn)行檢測，對所有的13種亞型進(jìn)行檢測。(2)細(xì)胞學(xué)檢查方法：同樣先是收集宮頸脫落細(xì)胞，然后再制作兩張液基薄層細(xì)胞片，一張進(jìn)行TCT的檢查，而另一張則是行HPV L1檢測。最后是根據(jù)Bethesda系統(tǒng)作出準(zhǔn)確的診斷。(3)病理活檢：病理活檢采用陰道鏡檢查，全面對陰道、宮頸內(nèi)進(jìn)行檢查，對于考慮為病變部位要取組織進(jìn)行病理檢查，若未發(fā)現(xiàn)可疑病變，即診斷為正常子宮。(4) HPV L1蛋白的檢測：將事先做好的液基薄層細(xì)胞片用無水乙醇進(jìn)行固定，固定時間20 min左右，隨后用專用的蛋白染色試劑盒進(jìn)行染色，再行免疫組化檢測蛋白的表達(dá)情況。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) TCT診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]：采用2001年TBS陰道/宮頸細(xì)胞學(xué)分類報告系統(tǒng)。HPV L1蛋白檢測診斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性：顯微鏡下有1個被紅染的細(xì)胞核即診斷陽性，陽性者被認(rèn)為宮頸病變發(fā)生率低。病理結(jié)果≥C1N1確診為宮頸病變，以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)評價HPV L1蛋白檢測在篩檢宮頸病變中的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果 386例高危型HPV陽性患者中，組織學(xué)診斷發(fā)現(xiàn)正常子宮頸者162例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)94例；高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)128例；鱗狀細(xì)胞癌(SCC)2例。而細(xì)胞學(xué)檢查中無病變272例，未明確診斷27例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變45例，而無法排除高度鱗狀上皮內(nèi)病變11例，明確為高度鱗狀上皮內(nèi)病變21例，無診斷為宮頸鱗癌患者，見表1。

表1 組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果(例)

2.2 不同組織學(xué)診斷HPV L1蛋白表達(dá) 高危型HPV陽性患者中，HSIL、SCC中HPV L1蛋白陽性率為19.2%(25/130)，而正常及LSIL者的蛋白陽性率達(dá)66.4%(170/256)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.392，P＜0.05)，見表2。

表2 不同組織學(xué)診斷HPV L1蛋白表達(dá)對比

2.3 宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測和細(xì)胞學(xué)檢查比較 宮頸脫落細(xì)胞額HPV L1蛋白檢測中的組織學(xué)診斷關(guān)于高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者兩種類型的敏感度、陰性預(yù)測值均明顯高于TCT檢查，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但在特異度一項中，組織學(xué)診斷則明顯低于TCT檢查，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而兩項檢查對陽性預(yù)測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表3 宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測和細(xì)胞學(xué)檢查比較(例)

2.4 不同細(xì)胞學(xué)檢查中HPV L1蛋白檢測情況 對于TCT檢查正常的患者，HPV L1蛋白預(yù)測組織學(xué)診斷在高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者兩種類型中敏感度為87.5%、陰性預(yù)測值94.12%、特異度為61.54%、陽性預(yù)測值41.18%，見表4。

表4 不同細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果中HPV L1蛋白檢測情況(例)

3 討 論

HPV L1蛋白可以準(zhǔn)確地反映出HPV復(fù)制處于何種狀態(tài)。一方面，HPV整合到宿主基因會引起L1蛋白的表達(dá)發(fā)生缺失，而當(dāng)表達(dá)缺失嚴(yán)重時，HPV感染人體正常細(xì)胞后就無法被免疫系統(tǒng)所識別，因此清除率大大降低，長期以往則會導(dǎo)致上皮細(xì)胞發(fā)生惡變。因此HPV L1蛋白和宮頸病變有密切的聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，部分HPV L1蛋白陽性的患者宮頸病變具有自愈能力[3-4]，相反部分原本為陰性表達(dá)的患者則有可能向陽性轉(zhuǎn)變。同時當(dāng)宮頸病變的程度越高，陽性率也就越低。由此可見，HPV L1蛋白的篩查可以用于對宮頸病變的預(yù)測，并且對細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果有一定的借鑒和參考價值，以幫助提高診斷率。宮頸脫落細(xì)胞的L1蛋白檢測是對高危型HPV初篩陽性婦女分流的一項重要措施。鑒于細(xì)胞學(xué)檢查的低敏感性，HPV L1蛋白檢測就承擔(dān)了提高診斷率的任務(wù)，臨床應(yīng)用價值較高[5]。值得注意的是，部分基因的檢測相對復(fù)雜，在推廣方面受到了一定的阻礙[6]。有學(xué)者報道稱，當(dāng)對病理診斷為HSIL以上級別的宮頸病變，HPV L1蛋白檢測的特異度要低于細(xì)胞學(xué)檢查[7-8]，但其敏感性和陰性預(yù)測值仍有很高的臨床實用價值。兩種方法相互協(xié)同，互補(bǔ)不足。此外，細(xì)胞學(xué)方法診斷為ASCUS的患者會發(fā)生過度治療或者治療不足的情況[9-10]，而HPV L1蛋白檢測則能很好地彌補(bǔ)這一劣勢。在細(xì)胞學(xué)正常的患者中，盡管HPV L1蛋白檢測為陽性，仍舊以隨訪為主，無需治療。

通過上述研究結(jié)果可知，宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測相比于細(xì)胞學(xué)檢查在很多方面具有明顯的優(yōu)勢，例如在高度內(nèi)皮病變者、宮頸鱗癌者的檢查中，HPV L1蛋白檢測的敏感性以及陰性預(yù)測值明顯優(yōu)于細(xì)胞學(xué)檢查，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而對于陽性預(yù)測值，則差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。這也說明了兩種檢查方法各有所長，可相互補(bǔ)長取短以提高診斷率。

綜上所述，宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測有效彌補(bǔ)了細(xì)胞學(xué)的劣勢，對分流高危HPV陽性婦女的篩查工作提供了更多的參考。為了進(jìn)一步研究該檢測方法的臨床使用價值，可以再次擴(kuò)大樣本量，以獲得更多可靠的信息。

[1]李美琴,李春宏,裴圣林,等.宮頸脫落細(xì)胞HPVL1蛋白及HPV DNA載量對宮頸病變的預(yù)測價值[J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(13): 1804-1806.

[2]班振英,雷冬梅,智艷芳,等.HPVL1殼蛋白在宮頸脫落細(xì)胞及宮頸組織中的表達(dá)及意義[J].中國婦幼保健,2014,29(14): 2245-2247.

[3]亞力坤·穆罕默德,趙麗霞,朱開春,等.維、漢族HPV陽性婦女宮頸脫落細(xì)胞中L1蛋白的表達(dá)差異研究[J].中國腫瘤,2013,22(10): 841-844.

[4]劉纓,張建芳,蔡浩昱,等.17500例子宮頸液基細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果分析[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(12):100-101.

[5]張哲雄,徐承來,曹永濤,等.高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性和臨床意義[J].中國實驗診斷學(xué),2012,16(2):252-254.

[6]王家建,田其芳,張甦,等.高危型HPV陽性婦女子宮頸脫落細(xì)胞HPV L1蛋白檢測的臨床意義[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2015,34(4): 253-257.

[7]王力.高危型HPV宮頸癌宮頸活檢及宮頸脫落細(xì)胞病理檢查結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2015,9(23):3591-3592.

[8]Powell SE,S Hariri S,Steinau M,et al.Impact of human papillomavirus(HPV)vaccination on HPV 16/18-related prevalence in precancerous cervical lesions[J].Vaccine,2012,31(1):109-113.

[9]何濤,蔡曉磊,孫宗立,等.高危型HPV陽性患者解脲支原體感染與宮頸癌發(fā)生的相關(guān)性[J].山東醫(yī)藥,2013,53(32):38-40.

[10]Alhamany Z,El Mzibri M,Kharbach A,et al.Prevalence of human papillomavirus genotype among Moroccan women during a local screening program[J].Journal of Infection in Developing Countries, 2010,4(11):732-739.

Application of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells in high-risk HPV-positive women.

HUANG Ping1,ZHANG Xue2,CHEN Guang-yuan1,JIN Ying2.Department of Gynecology1,Department of Clinical Laboratory2, Songgang People's Hospital of Bao'an District of Shenzhen,Shenzhen 518105,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo discuss the clinical significance of human papillomavirus(HPV)L1 protein of cervical cells in detection of high-risk HPV-positive women.MethodsA total of 386 high-risk HPV-positive women,who admitted to our hospital from October 2014 to October 2015,were selected,and cervical exfoliated cells of these patients were collected.HPV L1 protein was detected by using liquid based cytology test(TCT)and immunohistochemistry.At the same time,patients were given vaginal examination,and suspicious part took biopsy for pathological examination. The expressions of HPV L1 protein in normal women and patients with different histopathological lesions were compared.The clinical value of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells in screening of uterine lesions was evaluated.ResultsAmong 386 high-risk HPV-positive patients,there were 162 patients with normal cervix,94 patients with low grade squamous intraepithelial lesions,128 patients with high grade squamous intraepithelial lesions,and 2 patients with cervical squamous cell carcinoma.The positive rates of HPV L1 protein of patients with high endothelial lesion and patients with cervical squamous cell carcinoma were significantly lower than those of normal women and patients with low grade endothelial lesions.In addition,the sensitivity and the negative predictive value of patients with high endothelial lesion and patients with cervical squamous cell carcinoma in histologic diagnosis of HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells were significantly higher than those of TCT examination(P＜0.05);but in specificity,histological diagnosis was significantly lower than that of TCT examination(P＜0.05);there was no significant difference between the positive predictive results of two tests(P＞0.05).In high-risk HPV-positive patients,the proportion of positive HPV L1 protein in HSIL and SCC patients was 19.2%,while the proportion of positive HPV L1 protein in normal women and LSIL patients were up to 66.4%,with statistically significant difference(χ2=5.392,P＜0.05).The sensitivity and negative prediction value of tissue diagnosis on high endothelial lesions and squamous cell carcinoma of the uterine cervix by cervical exfoliated cell amount of HPV L1 protein were significantly higher than those of TCT (χ2=6.492 3.013,P＜0.05);but in the specificity,the histological diagnosis was significantly lower than TCT(χ2=5.286, P＜0.05).ConclusionFor high-risk HPV-positive women,HPV L1 protein monitoring of cervical exfoliated cells has a certain screening significance,which provides a suitable diversion scheme in clinic.

Cervical exfoliated cells;Human papillomavirus L1 protein;Protein monitoring;High-risk;Women

R711.74

A

1003—6350（2016）20—3322—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.20.018

2016-04-12)

黃平。E-mail：hpingdr@126.com