酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核診斷的臨床價(jià)值

陳大川，王在義

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸二科，新疆 烏魯木齊 830054)

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核診斷的臨床價(jià)值

陳大川，王在義

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸二科，新疆 烏魯木齊 830054)

目的 探討酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT)在肺結(jié)核臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法回顧性分析2013年12月至2014年12月入住新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院符合本研究條件的患者172例，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)將其分為肺結(jié)核組96例(其中確診組18例，臨床診斷組78例)，肺炎組76例，兩組患者均進(jìn)行ELISPOT、胸部CT檢查，部分患者行TB-DNA、TB-Ab、痰涂片檢查，分析和比較ELISPOT的診斷價(jià)值。結(jié)果96例肺結(jié)核患者中92例ELISPOT陽(yáng)性，76例肺炎患者中67例ELISPOT陰性，其靈敏度95.83%，特異度88.16%，陽(yáng)性似然比7.44，陰性似然比0.05，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值91.09%，陰性預(yù)測(cè)值94.37%，約登指數(shù)0.84，Kappa值0.85。肺結(jié)核組與肺炎組患者的ELISPOT比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。ELISPOT檢查結(jié)果顯示，確診組陽(yáng)性率為94.44%，臨床診斷組陽(yáng)性率為96.15%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。ELISPOT靈敏度均高于TB-DNA、TB-Ab、痰涂片、胸部CT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。ELISPOT特異度與TB-DNA、TB-Ab比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但高于胸部CT，低于痰涂片，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論ELISPOT較高的靈敏度及特異度可以成為臨床診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的有效工具，較高的陰性預(yù)測(cè)值對(duì)排除活動(dòng)性肺結(jié)核有重要參考價(jià)值。

肺結(jié)核；臨床診斷；酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)

肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis，PTB)是一種慢性呼吸系統(tǒng)傳染病，病原菌為結(jié)核分枝桿菌，主要通過(guò)空氣-飛沫傳播，結(jié)核桿菌常侵犯肺臟而導(dǎo)致肺結(jié)核，另外也可引起其他器官的結(jié)核病(如腸、腎、骨、腦等)，因其傳染性強(qiáng)，可侵犯損害多器官，嚴(yán)重威脅著人類生命，曾被稱為“白色瘟疫”，隨著抗結(jié)核藥的問(wèn)世，結(jié)核病的治愈率達(dá)95%以上[1]。近年來(lái)因耐藥菌增加、人口密集等原因，肺結(jié)核的患病率呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，因而如何快速、有效地診斷該疾病成為臨床研究的重點(diǎn)。我院近年來(lái)開(kāi)展了酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(enzyme-linked immunospot test，ELISPOT)研究，旨在探討其在肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年12月至2014年12月入住新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科且符合本研究條件的患者172例，其中肺結(jié)核96例，男性50例，女性46例；年齡17～79歲，中位年齡49.50歲；涂陽(yáng)13例，病檢陽(yáng)性6例（其中涂陽(yáng)+病檢陽(yáng)性1例）。肺炎76例，男性46例，女性30例；年齡16～79歲，中位年齡44.50歲；痰細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性10例。按照診斷標(biāo)準(zhǔn)將肺結(jié)核患者分為確診組18例(經(jīng)痰涂片鏡檢或組織病理學(xué)檢查確診)，臨床診斷組78例(全部病例經(jīng)抗結(jié)核治療有效)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 肺結(jié)核組 符合下列項(xiàng)目任何一條者納入肺結(jié)核組[2]：(1)胸部影像學(xué)檢查見(jiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核表現(xiàn)+典型的肺結(jié)核臨床表現(xiàn)(咳嗽、咳痰、胸痛、咯血及潮熱、盜汗、乏力、納差等結(jié)核中毒癥狀)；(2)胸部影像學(xué)檢查見(jiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核表現(xiàn)+結(jié)核菌素試驗(yàn)為強(qiáng)陽(yáng)性；(3)胸部影像學(xué)檢查見(jiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核表現(xiàn)+結(jié)核抗體等其他輔助檢查陽(yáng)性；(4)胸部影像學(xué)檢查見(jiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核表現(xiàn)+肺外其他組織病檢證實(shí)為結(jié)核者；(5)疑似肺結(jié)核者經(jīng)診斷性抗癆治療或隨訪觀察能排除其他肺部病變者。

1.2.2 肺炎組 符合第(5)條和(1)～(4)條中任何一條者納入肺炎組[3]：(1)發(fā)熱，體溫≥38°C；(2)新近出現(xiàn)咳嗽、咳痰癥狀，或原有癥狀加重，同時(shí)出現(xiàn)膿痰，可伴有胸痛；(3)肺部有實(shí)變體征及濕啰音；(4)白細(xì)胞(WBC)＞10×109/L，中性粒細(xì)胞絕對(duì)值和百分比增高，可有核左移；(5)胸部影像學(xué)檢查顯示新出現(xiàn)或呈進(jìn)展性的肺部浸潤(rùn)性陰影或間質(zhì)性改變，可伴胸腔積液。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)年齡＜16歲的未成年人、妊娠婦女；(2)復(fù)發(fā)性肺結(jié)核、肺外結(jié)核、嚴(yán)重肝腎功能障礙者、獲得性人類免疫缺陷病毒感染者、腫瘤患者、糖尿病人；(3)已經(jīng)在使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑/增強(qiáng)劑、行放化療或抗結(jié)核治療的患者；(4)與開(kāi)放性肺結(jié)核患者密切接觸者；(5)未簽署抗結(jié)核治療知情同意書的患者。

1.4 方法

1.4.1 ELISPOT 采集樣本后分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，配制每100μL含有25萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)溶液；在微孔板條上按空白對(duì)照孔、測(cè)試孔A、測(cè)試孔B、陽(yáng)性對(duì)照孔的方式排列，然后分別加入50 μL細(xì)胞培養(yǎng)液至空白對(duì)照孔內(nèi)，50μL抗原A(ESAT-6)溶液至測(cè)試孔A內(nèi)，50μL抗原B (CFP-10)溶液至測(cè)試孔B內(nèi)，50 μL植物血凝素至陽(yáng)性對(duì)照孔內(nèi)；在37℃保持濕潤(rùn)的含有5%的CO2培養(yǎng)箱中孵育16～20 h，然后從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，每個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)加入200μL磷酸鹽緩沖液(PBS)，隨后棄去PBS，再用新鮮的PBS重復(fù)洗滌至少3遍；用PBS 200倍稀釋濃縮標(biāo)記抗體試劑，每個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)加入50μL標(biāo)記抗體工作液，2℃～8℃孵育1 h，棄去標(biāo)記抗體工作液，再按上述步驟洗滌；每個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)加入50 μL底物顯色溶液室溫孵育7 min，用蒸餾水徹底洗滌培養(yǎng)板終止反應(yīng)，計(jì)數(shù)每個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)深藍(lán)色清晰的斑點(diǎn)。

1.4.2 TB-DNA 患者晨起后用清水漱口，收集其咳出的深部痰液(痰量1～5 mL)于無(wú)菌痰盒中，送至檢驗(yàn)科后經(jīng)痰標(biāo)本、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品、擴(kuò)增試劑制備及PCR擴(kuò)增等程序處理，并設(shè)定檢測(cè)通道(FAM和HEX或VIC通道)，選擇熒光采集點(diǎn)為60℃30 s，再根據(jù)分析后圖像調(diào)整基線和閾值線，最后得出結(jié)果。

1.4.3 TB-Ab 使用采血管采集患者靜脈血，送至檢驗(yàn)科分離血清標(biāo)本并立即檢測(cè)或在4℃保存48 h內(nèi)完成檢測(cè)；檢驗(yàn)人員撕開(kāi)鋁箔袋，取出檢測(cè)卡平放，登記標(biāo)本號(hào)，向加樣孔中加入30μL血清標(biāo)本，再滴加50～100μL(2～3滴)緩沖液，計(jì)時(shí)15 min觀察結(jié)果。

1.4.4 痰涂片鏡檢 患者入院后收集其即時(shí)痰、夜間痰、次日晨痰(痰液量3～5 mL)進(jìn)行萋-尼(Ziehl-Neelson)染色法檢查，操作流程嚴(yán)格按照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》執(zhí)行；痰標(biāo)本被送至檢驗(yàn)科后醫(yī)務(wù)人員小心打開(kāi)痰盒，使用棉簽挑取痰液中干酪樣、膿樣或可疑部分約0.05 mL，在玻片正面均勻涂抹形成卵圓形痰膜，待涂片自然干燥后放置在染色架上，加熱固定后行萋-尼染色，最后將干燥的染色玻片置于顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)抗酸桿菌。

1.4.5 胸部CT 患者在吸氣狀態(tài)下CT常規(guī)從肺尖掃描至橫膈水平，層厚5 mm，層距5 mm，部分患者根據(jù)病情需要行1 mm薄層掃描或使用高壓注射器團(tuán)注造影劑(碘海醇注射液或碘比醇注射液，注射流率為3 mL/s，注射劑量為100 mL)行增強(qiáng)掃描，將所采集的圖像傳輸?shù)絇ACS系統(tǒng)，然后進(jìn)行圖像后處理。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料呈偏態(tài)分布以中位數(shù)和四分位數(shù)間距(median，IQR)表示，兩組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或fisher概率確切法，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肺結(jié)核組與肺炎組間ELISPOT診斷效能比較 96例肺結(jié)核患者的ELISPOT結(jié)果顯示，92例陽(yáng)性，4例陰性，靈敏度為95.83%，漏診率(假陰性率)為4.17%。76例肺炎患者的ELISPOT結(jié)果顯示，9例陽(yáng)性，67例陰性，特異度為88.16%，誤診率(假陽(yáng)性率)為11.84%。陽(yáng)性似然比7.44，陰性似然比0.05。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值91.09%，陰性預(yù)測(cè)值94.37%。約登指數(shù)(Youden) 0.84。Kappa值為0.85。此外，ELISPOT在肺結(jié)核組與肺炎組間診斷效能比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 123.45，P＜0.05)。

2.2 確診組與臨床診斷組ELISPOT試驗(yàn)陽(yáng)性率的比較 肺結(jié)核組患者行痰液或支氣管吸出物涂片抗酸染色檢查結(jié)果陽(yáng)性13例，經(jīng)皮肺穿刺活檢或經(jīng)支氣管鏡下肺組織活檢結(jié)果陽(yáng)性6例，包括1例菌陽(yáng)+病檢陽(yáng)性，故確診組共18例，其中ELISPOT試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性17例，陰性1例，陽(yáng)性率為94.44%，臨床診斷組78例，其中ELISPOT試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性75例，陰性3例，陽(yáng)性率為96.15%。對(duì)兩組患者ELISPOT陽(yáng)性率進(jìn)行比較，經(jīng)Fisher概率確切法計(jì)算，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 肺結(jié)核組所使用的五種檢測(cè)方法靈敏度比較 ELISPOT靈敏度為95.83%，均高于TB-DNA、TB-Ab、痰涂片、胸部CT靈敏度，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 肺結(jié)核組五種檢測(cè)方法靈敏度比較（例）

2.4 肺炎組五種檢測(cè)方法特異度比較 ELISPOT特異度為 88.16%，與 TB-DNA、TB-Ab特異度(95.24%、92.59%)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胸部CT特異度為71.05%，顯著低于ELISPOT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。痰涂片特異度為100.0%，高于ELISPOT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 肺炎組五種檢測(cè)方法特異度的對(duì)比（例）

2.5 ELISPOT試驗(yàn)的ROC曲線分析 繪制ELISPOT試驗(yàn)的ROC曲線，曲線下面積為0.93，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.02，95%置信區(qū)間(confidence interval，CI)0.88～0.97，表示該試驗(yàn)診斷效能好，見(jiàn)圖1。

圖1 ELISPOT試驗(yàn)的ROC曲線

3 討 論

人體在初次感染結(jié)核桿菌后會(huì)產(chǎn)生致敏T淋巴細(xì)胞，并可以轉(zhuǎn)化為記憶T淋巴細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體再次感染結(jié)核桿菌時(shí)，記憶T淋巴細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)樾?yīng)T淋巴細(xì)胞并釋放出多種細(xì)胞因子，其中包含有臨床診斷意義的γ-干擾素[4-5]，根據(jù)這種原理利用結(jié)核桿菌特異抗原(早期分泌抗原靶6和培養(yǎng)濾液蛋白10)刺激機(jī)體效應(yīng)T淋巴細(xì)胞釋放γ-干擾素并采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(ELISPOT)來(lái)檢測(cè)分泌γ-干擾素的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的數(shù)量[6-7]，以此來(lái)判斷機(jī)體是否感染結(jié)核桿菌，因?yàn)闄z測(cè)的是細(xì)胞數(shù)量，不受細(xì)胞因子代謝的影響，故而可以比較真實(shí)地反映體內(nèi)的感染情況。該技術(shù)已在2004年被英國(guó) Oxford Immunotec公司制作成ELISPOT試劑盒并應(yīng)用于臨床，該試劑盒于2008年被美國(guó)食品及藥物管理局(FDA)認(rèn)證并寫入歐美發(fā)達(dá)國(guó)家結(jié)核診療指南中。

本研究結(jié)果顯示ELISPOT的靈敏度為95.83%、特異度為88.16%，漏診率為4.17%、誤診率為11.84%，陽(yáng)性似然比為7.44，陰性似然比為0.05，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為91.09%，陰性預(yù)測(cè)值為94.37%，約登指數(shù)(Youden)為0.84。痰涂片陽(yáng)性13例，除1例陰性外，其余患者的ELISPOT均為陽(yáng)性，出現(xiàn)陰性結(jié)果者考慮與其自身體質(zhì)較弱影響細(xì)胞免疫功能有關(guān)。以上結(jié)果說(shuō)明ELISPOT對(duì)肺結(jié)核的輔助診斷效能好，與國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相似[8-12]，但是該試驗(yàn)不能區(qū)別潛伏性結(jié)核和活動(dòng)性結(jié)核[13]；Kappa值為0.85，說(shuō)明ELISPOT與金標(biāo)準(zhǔn)具有極好的一致性。此外，肺結(jié)核組3例患者臨床表現(xiàn)為咳嗽、咳痰、胸悶、氣短等不典型癥狀，胸部CT示肺部陰影、實(shí)變、肺炎征象，但ELISPOT結(jié)果均為陽(yáng)性，經(jīng)支氣管鏡檢查后確診1例支氣管內(nèi)膜結(jié)核，2例肺結(jié)核合并支氣管結(jié)核，該結(jié)果提示ELISPOT試驗(yàn)結(jié)合支氣管鏡檢查可以提高對(duì)支氣管結(jié)核的診斷率。確診組與臨床診斷組ELISPOT試驗(yàn)陽(yáng)性率分別為94.44%、96.15%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；確診組包含部分涂陽(yáng)肺結(jié)核，臨床診斷組均為涂陰肺結(jié)核，試驗(yàn)結(jié)果提示ELISPOT檢測(cè)效能與患者是否排菌或排菌量大小無(wú)關(guān)，因此可以降低肺結(jié)核漏診率，對(duì)菌陰肺結(jié)核的診斷也有重要價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示ELISPOT的靈敏度(95.83%)顯著優(yōu)于TB-DNA(28.00%)、TB-Ab(16.22%)、痰涂片(18.31%)、胸部CT(53.13%)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ELISPOT的特異度(88.16%)優(yōu)于胸部CT(71.05%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與痰涂片(100.00%)比較有較小差異(0.01＜P＜0.05)，與TB-DNA(95.24%)、TB-Ab (92.59%)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，本研究結(jié)果表明，ELISPOT試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷效能明顯優(yōu)于其他結(jié)核診斷方法。受試者工作特征曲線(ROC曲線)是評(píng)價(jià)試驗(yàn)診斷效能的重要指標(biāo)，曲線折角(截?cái)嘀?越靠近左上角，曲線下的面積越大，表明試驗(yàn)的靈敏度和特異度均好，漏診率和誤診率也??；本研究計(jì)算出ELISPOT試驗(yàn)的ROC曲線下面積為0.93，與劉琳等[14]研究報(bào)道的結(jié)果基本一致(ROC曲線下面積為0.936)。

綜上所述，ELISPOT較高的靈敏度及特異度可以成為臨床上活動(dòng)性肺結(jié)核輔助診斷的有效工具，較高的陰性預(yù)測(cè)值對(duì)排除活動(dòng)性肺結(jié)核有重要參考價(jià)值。

[1]鐘南山,劉又寧.呼吸病學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2012:492.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS288-2008)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì).臨床診療指南·呼吸病學(xué)分冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:35.

[4]歐江,曾維瓊.γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核桿菌感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2015,22(17):2608-2610.

[5]朱春玲,侯遠(yuǎn)沛,彭素真,等.γ-干擾素體外釋放試驗(yàn)在結(jié)核診斷中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].臨床肺科雜志,2014,15(10):1833-1835.

[6]孟珊珊,張樂(lè)樂(lè),張海鄰,等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)對(duì)兒童結(jié)核病診斷的應(yīng)用價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2013,42(10):151-154.

[7]杜方雄,何敏,廉國(guó)利,等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)肺外結(jié)核病的輔助診斷價(jià)值?[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2015,17(8):1009-1010.

[8]劉紅,黃永杰,王靜,等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在疑似結(jié)核病患者診斷中的價(jià)值研究[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2014,37(3):192-196.

[9]葉秋月,許文兵,劉曉清,等.T-SPOT.TB在肺結(jié)節(jié)病與肺結(jié)核鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,34(4):527-530.

[10]李婷,時(shí)代強(qiáng).T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在痰菌涂陰肺結(jié)核中的診斷價(jià)值[J].中華臨床感染病雜志,2014,7(3):255-257.

[11]Feng Y,Diao N,Shao YL,et al.Interferon-gamma release assay performance in pulmonary and extrapulmonary tuberculosis[J].PLoS ONE,2012,7(3):e32652.

[12]Lee JY,Choi HJ,Park IN,et al.Comparison of two commercial interferon-gamma assays for diagnosing Mycobacterium tuberculosis infection[J].Eur Respir J,2006,28(1):24-30.

[13]Ling DI,Pai N,Davids V,et al.Are interferon-C release assays useful for diagnosing active tuberculosis in a high-burden setting?[J]. Eur Respir J,2011,38:649-656.

[14]劉琳,吳雪瓊,王蘭,等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)在涂陰肺結(jié)核患者的診斷價(jià)值[J].北京醫(yī)學(xué),2015,37(3):220-223.

Clinical value of enzyme-linked immunospot test in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.

CHEN Da-chuan, WANG Zai-yi.Department of Respiratory Medicine,the First Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,Xinjiang,CHINA

ObjectiveTo investigate the value of the enzyme-linked immunospot test(ELISPOT)in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.MethodsA total of 172 cases of patients with respiratory disease,who admitted to the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from December 2013 to December 2014,were retrospectively analyzed,and were divided into the tuberculosis group(96 cases,including18 cases of confirmed group and 78 cases of clinical diagnosis group)and the pneumonia group(n=76)according to the diagnostic standard.ELISPOT and chest CT were carried out in the two groups.TB-DNA,TB-Ab and sputum smear microscopy were carried out in some patients of the two groups.The diagnostic value of ELISPOT was compared and retrospectively analyzed.ResultsNinety-two cases of the 96 pulmonary tuberculosis patients were positive in ELISPOT,and 67 cases of the 76 pneumonia patients were negative in ELISPOT,with sensitivity of 95.83%,specificity of 88.16%,positive likelihood ratio of 7.44,negative likelihood ratio of 0.05,positive predictive value of 91.09%,negative predictive value of 94.37%,Youden index of 0.84,and Kappa value of 0.85.The difference of ELISPOT between the tuberculosis and the pneumonia group was significant(P＜0.05).There was no significant difference between the confirmed group(94.44%)and the clinical diagnosis group (96.15%)in the positive rate(P＞0.05).The sensitivity of ELISPOT was significantly higher than that of TB-DNA, TB-Ab,sputum smear microscopy,chest CT(P＜0.05).The specificity of ELISPOT was significantly higher than that of chest CT,and significantly lower than that of sputum smear microscopy(P＜0.05),but there was no significant different with TB-DNA and TB-Ab(P＞0.05).ConclusionELISPOT can be an effective tool for the diagnosis of pulmonary tuberculosis with good sensitivity and specificity.High negative predictive value has important reference value for excluding active pulmonary tuberculosis.

Pulmonary tuberculosis;Clinical diagnosis;Enzyme-linked immunospot assay

R521

A

1003—6350（2016）20—3316—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.20.016

2016-03-18)

王在義。E-mail：wangzaiyi@medmail.com.cn