人G補綴FHA域血管生成因子1在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

楊澤妹，黃守國（海南省?？谑腥嗣襻t(yī)院婦產科，海南?？?70208）

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人G補綴FHA域血管生成因子1在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

楊澤妹，黃守國
（海南省?？谑腥嗣襻t(yī)院婦產科，海南?？?70208）

摘要：目的探索人G補綴FHA域血管生成因子1（AGGF1）在宮頸癌中的表達及與宮頸癌患者預后的相關性。方法對60例宮頸癌組織及癌旁組織進行AGGF1免疫組織化學法檢測，并對其表達及與患者預后的相關性進行分析。結果AGGF1在宮頸癌組織中的表達比癌旁組織高（P＜0.05），Kaplan-meier曲線分析發(fā)現(xiàn)，AGGF1表達高的患者生存較差（P=0.004）。Cox回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，AGGF1可以作為獨立指標預測宮頸癌患者術后生存。結論宮頸癌患者AGGF1高表達預示預后較差，并且其可以作為一個獨立因素來預測宮頸癌患者術后生存。

關鍵詞：AGGF1；免疫組織化學法；宮頸癌；預后

婦科三大惡性腫瘤中，宮頸癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌，在發(fā)展中國家則居首位[1]。我國宮頸癌的發(fā)病率呈逐年上升和低齡化的趨勢，已嚴重威脅到婦女的健康和生命安全。其早期以手術治療為主，中、晚期大多采用放射治療，5年生存率僅40%左右[2]。多年來通過不斷提高手術技巧、改進放療設備和技術來提高其生存率，但效果仍不理想；目前還沒有公認的分子標志物來預測宮頸癌的預后。因此，尋找新的預測指標和宮頸癌分子靶點成為全球科學家研究的熱點，其被科學家們認為是評估宮頸癌患者治療效果和生存率的關鍵途徑之一。

人G補綴FHA域血管生成因子1（angiogenic factor with G and FHA domains 1，AGGF1）基因是2004年Tian等在對1例染色體發(fā)生t（5；11）（q13.3；p15.1）平衡位點先天性靜脈畸形骨肥大綜合征患者進行精細的分子遺傳學研究時，在染色體異位染色點克隆的一個新基因[3]。該基因在血管內皮細胞高度表達，所編碼的蛋白在體外表現(xiàn)出強烈的血管生成能力，故被初步定性為一個新的血管生成因子。持續(xù)的腫瘤血管生成是宮頸癌的主要標志和特征之一，與宮頸癌的生長、侵襲、轉移及復發(fā)密切相關[4]，但是該分子是否影響宮頸癌患者術后生存尚未見相關報道。本研究的目的是探討AGGF1在宮頸癌的表達及其與宮頸癌術后患者預后的相關性。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2005年6月-2010年8月本院經(jīng)病理確診的60例宮頸癌患者為研究對象，均符合宮頸癌診斷標準[4]。入選標準：宮頸活檢或者陰道鏡下活檢病理確診為宮頸癌，臨床分期標準[國際婦產科協(xié)會（Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）]為Ⅰb2和Ⅱa期。入選患者年齡27～69歲，平均（44.28±7.63）歲，中位年齡40歲；FIGO分期Ⅰb2期39例，Ⅱa期21例；病理類型：鱗癌49例，腺癌7例，腺鱗癌4例。每例患者有癌組織及癌旁組織標本，分別裝入凍存管中，置于液氮中保存。所有患者有完整詳細的臨床資料。

1.2免疫組織化學法染色

將收集的60例宮頸癌組織及癌旁組織標本進行石蠟包埋。每例組織蠟塊4μm連續(xù)切片，低溫烤干后置入-20℃冰箱保存。采用辣根-過氧化酶連接（streptavidin-perosidase，SP）二步法對60例宮頸癌組織及癌旁組織進行免疫組織化學法檢測，免疫熒光染色采用煙酸己可堿（上海恒遠生物科技有限公司）和異硫氰酸熒光素（南京探求生物技術有限公司）混合染色，抗-AGGF1一抗購自美國Santa Cruz公司。

1.3結果判斷

采用雙盲法閱片，細胞中出現(xiàn)明顯的綠色熒光為陽性細胞，著色點位于細胞核。細胞染色強度評分：0分無染色，1分弱染色，2分中染色，3分強染色。腫瘤細胞陽性率評分：1分0～9%，2分10%～25%，3分26%～50%，4分51%～100%。將染色強度評分和陽性細胞率評分的乘積作為該切片的評分值。設定評分0～4分為陰性，＞4分為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率表示，對AGGF1在宮頸癌組織及癌旁組織的表達進行t檢驗。AGGF1在宮頸癌組織中的表達與臨床各病理指標的相關性用χ2檢驗，用Kaplanmeier生存曲線和Cox比例風險回歸模型進行生存分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1AGGF1在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達

60例宮頸癌組織中33例AGGF1表達陽性，占55.0%。對宮頸癌組織及癌旁組織的免疫組織化學法檢測結果進行t檢驗，分析發(fā)現(xiàn)AGGF1在癌組織中的表達高于癌旁組織（P=0.035）。見圖1、2。

2.2AGGF1表達與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的相關性

AGGF1表達與腫瘤大小、臨床分期及血清癌抗原125（cancer antigen 125，CA125）相關。與患者年齡、淋巴結轉移無關。見表1。

圖1　AGGF1在宮頸組織中表達的免疫熒光圖（×200）

圖2　AGGF1在正常宮頸組織和宮頸癌組織中的表達比較

表1　臨床病理參數(shù)與AGGF1表達的相關性

圖3　宮頸癌患者術后生存期與AGGF1表達的Kaplan-meier曲線

2.3AGGF1表達與患者預后的相關性

Kaplan-meier生存曲線顯示，AGGF1陽性患者術后生存期比AGGF1陰性者短（P=0.004）（見圖3）。單因素Cox比例風險回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤大小、血清CA125、臨床分期和AGGF1表達為宮頸癌患者預后相關因素。應用多因素Cox比例風險回歸分析對臨床病理參數(shù)進行校正后，AGGF1表達可作為宮頸癌患者術后生存的獨立預測指標（見表2）。

表2　影響宮頸癌患者生存指標的單因素和多因素分析

3　討論

持續(xù)性血管生成是原發(fā)性宮頸癌的主要特征之一，宮頸癌細胞的生長、侵襲及轉移依賴于宮頸癌內血管的生成。腫瘤血管生成的主要原因和過程非常復雜，其中腫瘤細胞過量表達血管生成因子并以旁分泌的形勢作用于內皮細胞是一條直接途徑[5]。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，AGGF1）基因被克隆后發(fā)現(xiàn)，VEGF可由腫瘤細胞表達和分泌，從而誘發(fā)腫瘤血管生成[6-7]。之后全球掀起腫瘤血管生成因子的研究熱潮。

2004年Tian等發(fā)現(xiàn)AGGF1基因以來，AGGF1在心血管系統(tǒng)的生理功能進一步被揭示。Chen等[8]利用模式生物斑馬魚對AGGF1在血管形成中的功能進行研究，發(fā)現(xiàn)AGGF1在斑馬魚中可調控血管的形成和靜脈的分化；Lu等[9]嘗試利用AGGF1基因對小鼠后肢缺血模型進行血管生成治療，發(fā)現(xiàn)其能較好地改善缺血部位的血流供應；Hu等[10]發(fā)現(xiàn)AGGF1可抑制血管炎癥反應，改善血管內皮功能；Lei等[11]發(fā)現(xiàn)AGGF1可監(jiān)控斑馬魚血液細胞形成。本研究表明，AGGF1能夠促進血管的生成，并改善局部缺血功能，而這恰好為腫瘤的進一步生長、侵襲和轉移提供條件，因此筆者可以大膽的猜測AGGF1在促進宮頸癌的生長、轉移和侵襲的過程中起重要作用。目前，本研究發(fā)現(xiàn)AGGF1在宮頸癌組織的表達比癌旁組織高，與預期結果相符合。與此同時，本研究還發(fā)現(xiàn)AGGF1表達高的宮頸癌患者預后較差。

綜上所述，AGGF1蛋白在宮頸癌組織中表達比癌旁組織高，并且AGGF1可以作為一個獨立指標評估和預測宮頸癌患者術后生存期。AGGF1是潛在的抑制宮頸癌血管生成的分子靶點，能夠為宮頸癌治療提供新途徑。

參考文獻：

[1] Vici P, Mariani L, Pizzuti L, et al. Emerging biological treatments for uterine cervical carcinoma [J]. J Cancer, 2014, 5(2): 86-97.

[2]應倩,夏慶民,鄭榮壽,等.中國2009年宮頸癌發(fā)病與死亡分析[J].中國腫瘤, 2013, 22(8): 612-616.

[3] Tian XL, Kadaba R, You SA, et al. Identification of an angiogenic factor that when mutated causes susceptibility to klippeltrenaunay syndrome[J]. Nature, 2004, 427(6975): 640-645.

[4]伊日貴,徐曉艷,李時榮.腫瘤侵襲轉移機制研究進展[J].中華實用診斷與治療雜志, 2014, 6(10): 937-939.

[5]李玉梅,陳永強.缺氧誘導因子-1與腫瘤細胞凋亡及血管生成關系的研究進展[J].中華腫瘤防治雜志, 2008, 15(12): 324-329.

[6] Chatterjee SI, Heukamp LC, Siobal M, et al. Tumor VEGF: VEGFR2 autocrine feed-forward loop triggers angiogenesis in lung cancer[J]. J Clin Invest, 2013, 123(4): 1732-1740.

[7] Gaengel K, Betsholtz C. Endocytosis regulates VEGF signalling during angiogenesis[J]. Nat Cell Biol, 2013, 15(3): 233-235.

[8] Chen D, Li L, Tu X, et al. Functional characterization of klippel-trenaunay syndrome gene AGGF1 identifies a novel angiogenic signaling pathway for specification of vein differentiation and angiogenesis during embryogenesis[J]. Hum Mol Genet, 2013, 22(5): 963-976.

[9] Lu QL, Yao YH, Yao YF, et al. Angiogenic factor AGGF1 promotes therapeutic angiogenesis in a mouse limb ischemia model[J]. PLoS One, 2012, 7(10): DOI: 10.1371/journal.pone.0046998.

[10] Hu F, Wu C, Li Y, et al. AGGF1 is a novel anti-inflammatory factor associated with TNF-α-induced endothelial activation[J]. Cellular Signalling, 2013, 25: 1645-1653.

[11] Lei L, Di C, Jia L, et al. Aggf1 acts at the top of the genetic regulatory hierarchy in specification of hemangioblasts in zebrafish[J]. Blood, 2013, 123(4): 501-508.

（童穎丹編輯）

AGGF1 expression in cervical carcinoma and its association with clinicopathological variables

Ze-mei Yang, Shou-guo Huang
(Department of Obstetrics and Gynecology, Haikou Peopleˊs Hospital, Haikou, Hainan 570208, China)

Abstract:Objective To determinethe expression of human angiogenic factor with G patch and FHA domains 1 (AGGF1) in cervical carcinoma, and to investigate its relationship with the prognosis of cervical carcinoma. Methods Immunohistochemistry was performed to detect AGGF1 level in the cervical cancer tissues and pericancerous tissues of 60 cases, and the relationship between the expression of AGGF1 and prognosis of the patients was analyzed. Results The expression of AGGF1 in the cervical carcinoma tissues was significantly higher than that in the pericancerous tissues (P＜0.05). The survival rate of the patients with high AGGF1-expression was significantly lower than that of the patients with low AGGF1-expression (P = 0.004). The Cox model analysis revealed that AGGF1 expression was an independent biomarker for prediction of the survival of cervical carcinoma patients. Conclusions High expression of AGGF1 predicts poor prognosis in cervical carcinoma patients. AGGF1 can be used as an independent factor to predict postoperative survival of patients with cervical cancer.

Keywords:angiogenic factor with G patch and FHA domains 1; IHC; cervical carcinoma; prognosis

收稿日期：2015-05-04

文章編號：1005-8982（2016）03-0055-04

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.03.011

中圖分類號：R737.33

文獻標識碼：A