西安市2 841例女性人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析

楊瑞利，翟華麗，沈建軍王飛霞

(長安醫(yī)院檢驗科，陜西 西安 710016)

西安市2 841例女性人乳頭瘤病毒感染狀況及基因型分析

楊瑞利，翟華麗，沈建軍王飛霞

(長安醫(yī)院檢驗科，陜西 西安 710016)

目的 分析西安市女性宮頸上皮細(xì)胞人乳頭瘤病毒(HPV)感染狀況和基因亞型分布特點(diǎn)，以了解本地區(qū)HPV感染現(xiàn)狀，為宮頸癌的防治提供參考依據(jù)。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)-反向點(diǎn)雜交技術(shù)，對2013年1月至2014年12月來我院婦科就診的2 841例女性患者的宮頸黏液進(jìn)行HPV分型檢測，分析HPV在女性人群中的感染率、基因型分布和年齡分布特點(diǎn)。結(jié)果2 841例樣本中HPV陽性樣本639例，總感染率為22.49%。檢出的高危亞型中前3種型別依次為HPV52型、58型、16型；低危型感染以HPV6型最高，其次是HPV11型。感染者以≤20歲年齡組最高，不同年齡段的HPV感染率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=61.87，P＜0.01)。結(jié)論該地區(qū)女性HPV感染常見亞型為HPV52型、58型、16型，年輕女性感染率最高，HPV基因的準(zhǔn)確分型對宮頸癌的早期預(yù)防和診斷有重要意義。

西安；人乳頭瘤病毒；基因型；分布

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種具有高度特異性的嗜上皮性病毒，屬雙鏈閉環(huán)的球形小DNA病毒，廣泛存在于自然界，多數(shù)情況下HPV感染為一過性，然而高危型HPV的持續(xù)感染是引起宮頸癌發(fā)病的重要因素，低危型HPV持續(xù)感染主要與尖銳濕疣有關(guān)。目前宮頸癌是僅次于乳腺癌，嚴(yán)重危害女性健康的第二大惡性腫瘤，中國每年新發(fā)宮頸癌13萬余人，占世界新發(fā)病例的28.8%，發(fā)病人群趨于年輕化[1]。研究表明，HPV基因型的分布具有明顯的年齡和地區(qū)分布特征，因此，本研究對西安市女性宮頸上皮細(xì)胞HPV感染和基因分布情況進(jìn)行分析，同時與其他地區(qū)文獻(xiàn)報道的HPV感染狀況進(jìn)行比較，對今后本地區(qū)制定宮頸癌篩查方案以及研發(fā)應(yīng)用HPV疫苗提供有價值的參考資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2014年12月到本院婦科就診并進(jìn)行HPV分型篩查的2 841例患者，年齡16～80歲，平均48歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 均由專科醫(yī)生使用陰道窺器暴露宮頸，用無菌生理鹽水棉球洗去宮頸外分泌物后，將宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉(zhuǎn)5周，將所有標(biāo)本置于有細(xì)胞保存液的取樣管中，密閉送檢。

1.2.2 試劑及儀器 HPV分型檢測試劑盒購自達(dá)安基因股份有限公司，可檢測21個HPV亞型，包括高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、CP8304，低危型：6、11、42、43、44；儀器為達(dá)安DA7600 PCR擴(kuò)增儀。

1.2.3 DNA提取 取含0.5 ml含宮頸細(xì)胞的保存液，按試劑說明書步驟操作，提取DNA模板。

1.2.4 PCR擴(kuò)增 按照說明書加人DNA模板后瞬時離心，PCR反應(yīng)條件為:93℃，3 min預(yù)變性，然后按93℃40 s、55℃40 s、72℃40 s擴(kuò)增，40個循環(huán)，最后72℃延伸7 min。

1.2.5 雜交洗膜顯色 嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行膜條雜交、洗滌、顯色，最后觀察結(jié)果。

1.2.6 HPV基因分型雜交結(jié)果判定 檢測結(jié)果陽性點(diǎn)為清晰可見的藍(lán)色圓點(diǎn)，每個雜交膜上的生物素結(jié)合點(diǎn)及PC點(diǎn)必須顯色，否則實驗無效。除PC點(diǎn)外：(1)陰性質(zhì)控品不應(yīng)該出現(xiàn)藍(lán)圓點(diǎn)；(2)陽性質(zhì)控品應(yīng)該出現(xiàn)藍(lán)圓點(diǎn)；(3)依據(jù)膜條HPV分型分布圖判斷陽性點(diǎn)為何種HPV亞型；如觀察到1個藍(lán)色圓點(diǎn)為單重感染，出現(xiàn)2個及以上藍(lán)圓點(diǎn)為多重感染。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定性資料用率(百分比%)表示。不同年齡段人群HPV感染率比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV檢測結(jié)果分析 在2 841例篩查樣本中，HPV檢出感染病例639例，總感染率為22.49% (639/2 841)，其中單重感染者586例，占篩查人數(shù)的20.63%(586/2 841)，多重感染者53例，占篩查人數(shù)的1.87%(53/2 841)。

2.2 HPV感染的年齡分布 將2 841例患者按不同年齡分為≤20歲、21～25歲、26～30歲、31～35歲、36～40歲、41～45歲、46～50歲、＞50歲8個組，統(tǒng)計分析各組HPV感染情況，結(jié)果見表1。以≤20歲組HPV感染率最高，達(dá)46.91%(38/81)，21～25歲組次之，感染率為28.07%(172/659)，隨著年齡的增加，感染率逐漸下降，而到46～50歲組又上升到24.11%(27/112)，50歲以后又開始下降，各年齡段感染率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=61.87，P＜0.01)，見表1。

表1 2 841例篩查者中各年齡組女性HPV感染情況[例(%)]

2.3 HPV各基因亞型結(jié)果分析 HBV感染基因亞型分布情況見表2。由于檢測標(biāo)本存在單重和多重感染病例，故639例感染標(biāo)本實際檢出亞型頻數(shù)為693，人群感染以高危型為主，共檢出高危亞型頻數(shù)為553，檢出率為79.80%(553/693)；檢出低危型頻數(shù)為140，檢出率為20.20%(140/693)。檢出的高危亞型前三位依次為52型、58型、16型，感染率分別為15.44%、10.10%、8.80%，低危亞型分別為6型、11型、43型，感染率分別為10.53%、6.20%、3.90%。高危型別中單重感染頻數(shù)最多的前三個型別為52型、58型和16型，二重以上感染頻數(shù)較多的亞型分別為52型，16型和Cp3804型；低危型別中單重感染頻數(shù)和二重及以上感染頻數(shù)一致，分別為6型、11型、43型。

表2 639例HPV感染基因亞型分布情況[頻次(%)]

3 討 論

近年來，宮頸病變已經(jīng)成為影響女性身心健康的主要疾病，也是女性常見的惡性疾病之一。高危型人乳頭瘤病毒陽性是誘發(fā)宮頸病變尤其是宮頸上皮內(nèi)瘤變的主要因素[2]，早期積極地預(yù)防與治療高危型人乳頭瘤病毒對減少宮頸病變、降低宮頸癌的發(fā)生率具有重要意義。研究證實，在世界范圍內(nèi)罹患宮頸癌的患者中，有93%以上能檢測到HPV感染。

目前實驗室已分離出110余種HPV DNA，其中30多種與宮頸感染和病變有關(guān)[3-5]。本研究結(jié)果顯示：常見HPV感染及基因型分布存在地理差異:2841例篩查樣本中，有639例感染者中檢出19種HPV基因亞型，單重感染586例，占篩查人數(shù)的20.63%(586/2 841)，多重感染53例，占篩查人數(shù)的1.87%(53/28 41)。高危亞型頻次為553(79.80%)，低危亞型頻次為140(20.20%)，總體感染率為22.49%(639/2 841)，明顯高于文獻(xiàn)報道金華地區(qū)為13.6%，北京地區(qū)為17.0%[6-7]，但低于紹興地區(qū)(54.75%)和武漢地區(qū)(64.5%)[8-9]，這可能與人群及地區(qū)差異有關(guān)。人群感染以高危型為主，其中前三位的高危亞型依次為HPV 52型、58型、16型，而全球范圍內(nèi)，前三位分別是HPV16型、18型、58型。廖京平[10]對北京大學(xué)第一醫(yī)院報道門診人群中HPV16型、58型和52型是這一人群中常見的型別。彭永排等[11]對廣州市1 285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調(diào)查顯示前三位的HPV亞型是52型、31型、16型。蔣衛(wèi)平等[12]對浙江麗水地區(qū)288例HPV感染檢出居前三位的依次是16型、58型、52型。本研究中52型感染率最高與彭永排等[11]報道的一致，其余均有差異，這可能與人群地域性和標(biāo)本取材或研究對象都有一定關(guān)系。

本研究還表明，HPV感染年齡分布存在差異，HPV感染的高峰年齡為≤20歲，感染率達(dá)46.91%。其感染率隨著年齡的增長而降低，而46～50歲感染率又上升到24.11%，50歲以上又開始下降，各年齡段感染率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，≤20歲的女性HPV高危型感染率較21～50歲偏高，與席金甌[13]報道的婦女生殖道HPV感染的高峰年齡是18～28歲基本一致，這可能是因為人在青少年期其免疫系統(tǒng)還未被致敏，導(dǎo)致初次性生活時極易感染HPV[14]。

綜上所述，西安地區(qū)女性HPV感染檢出率居前三位的亞型依次為HPV52型、58型、16型，以單重感染為主，≤20歲年齡組感染率最高，說明對年輕人普及健康知識教育很有必要；對篩查出高危型HPV感染的人群進(jìn)行追蹤檢測和干預(yù)，能夠有效減少宮頸病變，降低宮頸癌的發(fā)病率，因此，掌握本地區(qū)女性HPV感染狀況和基因型分布特征不僅是流行病學(xué)調(diào)查的需要，而且對宮頸癌的早期診斷、治療和特異性疫苗的研制具有重要的指導(dǎo)意義。

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Infection status and genotype distributions of human papillomavirus infection in 2 841 women of Xi'an,Shaanxi, CHINA.

YANG Rui-li,ZHAI Hua-li,SHEN Jian-jun,WANG Fei-xia.Department of Clinical Laboratory,the Hospital of Chang'an,Xi'an 710016,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo analyze the infection status and gene distribution of human papillomavirus(HPV)infection in Xi’an,so as to provide data support for the prevention and control of cervical cancer and the clinical application of cervical cancer vaccine.MethodsHPV genotype of cervical mucus of 2 841 screening women in our hospital from January 2013 to November 2014 was detected by polymerase chain reaction(PCR)and reverse dot blot hybridization.The infection rate,genotype and age distribution in the females were analyzed.ResultsAmong the 2 841 women, 639 women were infected by HPV,and the total infection rate of HPV was 22.49%.The first three high-risk HPV subtypes were HPV52,58,16.The infection rate of HPV6 was highest in the low-risk genotypes,followed by HPV11.The infection rate of≤20-year-old group was significantly higher than that of the other groups.There was a significant difference in the infection rate among the various age groups(χ2=61.87,P＜0.01).ConclusionHPV52,HPV58 and HPV16 were the major subtypes in the women of Xi′an.The infection rate of young women was higher than that of the other age groups.The detection of HPV genotypes is very meaningful in early prevention and diagnosis of cervical cancer.

Xi′an;Human papillomavim;Genotype;Distribution

R711.7

A

1003—6350（2016）06—0885—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.009

2015-09-23)

沈建軍。E-mail:172454089@qq.com