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    中藥抗瘢痕增生作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

    2016-03-05 18:50王暢高永翔
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)研究研究進(jìn)展中藥

    王暢 高永翔

    【摘 要】 動(dòng)物及離體實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)多種單味中藥、中藥有效提取成分及中藥復(fù)方制劑具有不同程度的抗瘢痕增生作用,有部分實(shí)驗(yàn)還從信號(hào)傳導(dǎo)通路等層面對(duì)其抗瘢痕增生的機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步說明,本文對(duì)近年來中藥抗瘢痕增生作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行綜述。

    【關(guān)鍵詞】 抗瘢痕增生;中藥;實(shí)驗(yàn)研究;研究進(jìn)展

    【中圖分類號(hào)】R28,R275 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517(2016)01-0031-02

    病理性瘢痕(Pathological scar,PS)主要包括增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)和瘢痕疙瘩(keloid,K),是創(chuàng)傷后最常見的并發(fā)癥[1]。中醫(yī)藥在防治瘢痕方面歷史久遠(yuǎn),多認(rèn)為與氣血壅滯、經(jīng)絡(luò)瘀阻、痰濕互結(jié)或三者相輔有關(guān),治療上以活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)、祛痰除濕為主。近年來,除有大量中藥抗瘢痕增生的臨床研究文獻(xiàn)[2-3]以外,亦有較多學(xué)者開始注重對(duì)中藥抗瘢痕增生的實(shí)驗(yàn)研究。本文對(duì)近年來中藥抗瘢痕增生作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行綜述如下。

    1 單味中藥

    紅花具有活血通經(jīng)、散瘀止痛的功效。劉燕等[4-5]對(duì)兔耳瘢痕內(nèi)注射不同濃度的紅花注射液6周后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅花能使瘢痕軟化、變薄,并能使Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)下調(diào),且與濃度呈正相關(guān),從而達(dá)到治療增生性瘢痕的目的。黃芪具有補(bǔ)氣固表、利水退腫、托毒排膿、生肌等功效。張艷等[6-7]對(duì)兔耳增生性瘢痕內(nèi)局部注射不同濃度的黃芪注射液,發(fā)現(xiàn)瘢痕厚度、硬度與黃芪濃度呈負(fù)相關(guān)性,且能呈劑量效應(yīng)地減少TGF-βmRNA的合成及其蛋白的表達(dá) ,從而推斷黃芪注射液可能通過減少TGF-βmRNA的合成來抑制增生性瘢痕。丹參具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)等作用,其在創(chuàng)傷修復(fù)過程中有一定作用。劉流等[8]對(duì)兔耳增生性瘢痕基底部注射不同濃度的丹參注射液28d后,組織形態(tài)學(xué)顯示成纖維細(xì)胞數(shù)量較少,膠原染色較淡且較為疏松,可見明顯的凋亡小體。劉德明等[9]的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦有相似證明。劉流等[10]進(jìn)一步用將含不同濃度的丹參注射液DMEM培養(yǎng)液加入人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(Human hypertrophic scar fibroblasts,HSFB)中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參可明顯抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖,且與濃度呈正相關(guān)效應(yīng)。冀黎平等[11]用丹參涂膜劑(丹參提取液制成涂膜劑)在裸鼠背部瘢痕用藥1周、4周和8周后,微循環(huán)觀察及計(jì)數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參涂膜劑可能對(duì)瘢痕微循環(huán)具有雙向調(diào)節(jié)作用。雷曉紅等[12]亦通過離體實(shí)驗(yàn)證明丹參可抑制HSFB增殖,并呈劑量依賴性,2.5g/L以上劑量組還可顯著降低細(xì)胞的活性,同時(shí)細(xì)胞凋亡數(shù)量及培養(yǎng)液上清LDH活性也顯著增加,從而得出丹參具有抑制HSFB的增殖及活性的能力。王益民[13]的實(shí)驗(yàn)研究則證明丹參具有抑制瘢痕的增殖及TGF-β1的分泌,減少膠原的合成。上述實(shí)驗(yàn)從不同角度證明丹參通過抑制HSFB增殖、促進(jìn)凋亡、抑制TGF-β1的分泌及膠原合成從而發(fā)揮抗瘢痕的作用。當(dāng)歸具有活血、補(bǔ)血、化瘀等功效。劉德武等[14]用當(dāng)歸注射液局部注射到兔耳增生性瘢痕組織內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸治療后瘢痕組織內(nèi)成纖維細(xì)胞數(shù)量及膠原含量均明顯降低,瘢痕纖維化明顯減輕。另有學(xué)者對(duì)雷公藤、姜黃、莪術(shù)、五倍子、蜈蚣等單味中藥展開了實(shí)驗(yàn)研究。

    2 中藥提取物

    川芎嗪系中藥川芎提取出來的無色針狀結(jié)晶生物堿。早期有學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)證明[15-16]川芎嗪具有抑制HSFB生長(zhǎng)及活性、減少膠原合成的作用。近年,蘇毅鵬等[17]通過建立兔耳瘢痕模型,用川芎嗪隔天局部注射瘢痕,用藥40d后從瘢痕指數(shù)及組織病理均說明川芎嗪可減輕兔耳瘢痕組織。張艷青[18]則用川芎嗪局部注射于瘢痕疙瘩患者局部,取材后發(fā)現(xiàn)川芎嗪可顯著抑制瘢痕疙瘩中I型膠原基因及TGF-βl的表達(dá),并通過提高Ⅻ型膠原基因表達(dá),從而對(duì)膠原纖維骨架的形成產(chǎn)生作用。

    漢防己甲素(Tetrandrine,TET)系千金藤屬防己科植物粉防己的主要生物活性成分。鄭鎣鎣等[19]在兔眼濾過性手術(shù)中植入TET緩釋系統(tǒng)(DDS),術(shù)后7d、14d行活體濾過泡組織的共焦顯微鏡及組織病理學(xué)檢查提示,0.3 mg TET組兔眼濾過泡組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯輕于0.2 mg TET組和空白DDS組,從而推論TET能有效抑制術(shù)后炎癥反應(yīng),防止濾過泡瘢痕化的作用。曹治東等[20]體外實(shí)驗(yàn)顯示TET在2~8mg/L之間可明顯抑制HSFB的增殖,且具有明顯的劑量及時(shí)間依賴性(P<0.01);TET可使成纖維細(xì)胞G2-M期細(xì)胞比例明顯增多(P<0.01),S期與G2-M期時(shí)相時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01);并呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性地降低成纖維細(xì)胞外膠原蛋白量(P<0.01),從而推論抑制成纖維細(xì)胞增殖分裂正是TET抗增生性瘢痕作用機(jī)理,但對(duì)膠原蛋白的抑制率明顯高于細(xì)胞增殖活力抑制率的機(jī)理不清楚。

    氧化苦參堿(Oxymatrine)、苦參堿(matrine,Mat)是中藥苦參的提取物,兩則均有抗炎、抗腫瘤、抗纖維化、免疫調(diào)節(jié)的藥理作用。姜孟臣等[21]及費(fèi)燕等[22]通過體外實(shí)驗(yàn)證明了Mat能有效地抑制人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖。姜孟臣等[21]實(shí)驗(yàn)還說明了Mat能誘導(dǎo)HSFB凋亡及TGF-β1的細(xì)胞內(nèi)合成。費(fèi)燕等[22]的體外實(shí)驗(yàn)中則證明了Mat可以致HSFB的細(xì)胞核內(nèi)增殖性抗(proliferatingcell nuclearant igen,PCNA)表達(dá)逐漸減弱,但DNA相對(duì)含量無明顯變化,從而推論Mat在體外能明顯抑制增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的增殖而不引起細(xì)胞壞死性改變,但對(duì)DNA含量無明顯影響。呂建華等[23]則外用Mat的改良劑型——Mat微乳作用于兔耳瘢痕組織,不僅證明使用Mat后,瘢痕組織的炎性細(xì)胞減少,從而說明Mat對(duì)瘢痕的生長(zhǎng)有一定的抑制作用,同時(shí)還說明Mat劑型的改變,可以提高M(jìn)at的透皮吸收率。氧化苦參堿在某些條件下氮氧鍵裂可轉(zhuǎn)化為Mat,兩者可互相轉(zhuǎn)化。范東良[24]的離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可以抑制KFb中I型膠原和III型膠原的合成,并從信號(hào)傳導(dǎo)角度發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可以抑制TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Smad3的表達(dá)及其磷酸化和向核轉(zhuǎn)移,而對(duì)TGF-β1,TβRI,TβRII,Smad4,Smad7的表達(dá)無明顯影響。

    積雪草甙,又稱積雪草苷,是從傘形科植物積雪草全草中提取的白色針狀結(jié)晶。早期的離體實(shí)驗(yàn)說明積雪草苷可抑制HSFB增殖、膠原合成及減少TGF-β的表達(dá)[25-27],潘姝等[28-30]的實(shí)驗(yàn)則進(jìn)一步說明了積雪草苷抑制HS的機(jī)理可能與TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān),即通過減少成纖維細(xì)胞中磷酸化Smad2的含量和增加smad7蛋白的表達(dá)有關(guān)。陳明春等[31]通過體外培養(yǎng)KFBs的實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在一定濃度下,積雪草甙和Mat均能抑制KFBs的生長(zhǎng)及膠原合成,且積雪草甙的抗瘢痕作用強(qiáng)于Mat。另有學(xué)者對(duì)甲基蓮心堿、三七總甙、血竭素、水蛭素、常山酮、白黎蘆醇等中藥提取物展開研究。

    3 中藥復(fù)方制劑

    黃芪桂枝五物湯(黃芪、桂枝、白芍,生姜,大棗)源自《金匱要略·血痹虛勞病脈證并治》。劉凱英等[32]在上方基礎(chǔ)上加入桃仁、紅花、當(dāng)歸、秦艽、桑寄生、獨(dú)活等藥物,對(duì)SD大鼠行腰1椎板切除術(shù),術(shù)后均連續(xù)4周灌服中藥,術(shù)后12周電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示加味黃芪桂枝五物湯組可能通過減少瘢痕中成纖維細(xì)胞以及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的數(shù)量,降低細(xì)胞外膠原的沉積從而減輕SD大鼠術(shù)后硬膜外瘢痕的形成。

    黑布藥膏 (老黑醋、五倍子、蜈蚣、蜂蜜、冰片)是中醫(yī)皮膚外科泰斗趙炳南的外用中藥經(jīng)驗(yàn)方。中醫(yī)認(rèn)為老黑醋軟堅(jiān)解毒,五倍子收斂解毒,蜈蚣破瘀以毒攻毒,冰片鎮(zhèn)癢止痛解毒,蜂蜜調(diào)和諸藥,諸藥合用共奏破瘀軟堅(jiān)之功,在臨床亦取得診治瘢痕的良好效果。曹為等[33]通過瘢痕增生指數(shù)、成纖維細(xì)胞數(shù)密度及膠原纖維面積密度等指標(biāo)說明黑布藥膏可明顯減輕兔耳的瘢痕。趙麗等[34-36]的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)則說明了黑布藥膏可使兔耳瘢痕處的I膠原mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng),Ⅲ膠原mRNA及基質(zhì)金屬蛋白酶-1mRNA表達(dá)顯著減弱(P<0.01)、PCNA蛋白表達(dá)明顯減弱(P<0.05)及細(xì)胞凋亡增加(P<0.05),從而推論黑布藥膏抗瘢痕增生的作用機(jī)制可能與抑制兔耳瘢痕處HSFB的增殖、膠原合成及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

    其他中藥復(fù)方亦多以外用藥為主。如陳遠(yuǎn)征等[37]用自擬復(fù)方中藥(丹參酮、積雪苷、黃芩苷、甘草酸、苦參堿等)在兔耳模型上用藥28d后,對(duì)兔耳瘢痕組織微循環(huán)血流量及微血管色計(jì)數(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè),結(jié)果表明該復(fù)方中藥對(duì)兔耳微循環(huán)灌注及增生性瘢痕血管形成有明顯的抑制作用。異常瘢痕增生除了影響外貌和功能障礙外,也可導(dǎo)致瘙癢等主觀癥狀。李威等[38]通過右旋糖酐法對(duì)小白鼠和組胺所致豚鼠局部皮膚瘙癢兩個(gè)實(shí)驗(yàn),證明自擬的丹芎瘢痕涂膜劑(苦參、川芎、甘草)外用抗瘢痕增生具有顯著的止癢作用。

    4 小結(jié)

    中藥防治瘢痕具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),但目前中藥抗瘢痕增生機(jī)制并不完全清楚,其實(shí)驗(yàn)研究主要還存在一些問題。如目前中藥抗瘢痕增生的實(shí)驗(yàn)主要集中在對(duì)單味中藥或中藥提取物的研究,而對(duì)中藥復(fù)方制劑,特別是內(nèi)服復(fù)方中藥的實(shí)驗(yàn)研究較少。盡管中藥有效成分及機(jī)理較為復(fù)雜,因考慮復(fù)方中藥對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的綜合作用,故復(fù)方中藥新劑型的藥物研究仍舊是未來挖掘抗PS的發(fā)展新方向。筆者認(rèn)為應(yīng)運(yùn)用中醫(yī)整體及辨證論治等理論,挖掘臨床確有療效的中藥復(fù)合制劑,特別是中藥內(nèi)服復(fù)方藥物的研究。如可以結(jié)合血清藥理學(xué)等新方法,從整體出發(fā),探討復(fù)方中藥內(nèi)服制劑在離體實(shí)驗(yàn)的抗瘢痕增生作用機(jī)理,為臨床運(yùn)用提供有利的科研數(shù)據(jù);或?qū)σ炎C明有抗瘢痕作用的單味中藥或中藥提取物進(jìn)行藥物配伍,研制出具有不同藥理作用、多靶點(diǎn)、既能抗PS又能止癢的復(fù)方新劑型。

    目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)主要以裸鼠、兔耳瘢痕模型為主,但其與人體皮膚在創(chuàng)面愈合與轉(zhuǎn)歸方面因種屬差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果很難真正反映藥物在人體的真實(shí)情況。大部分離體實(shí)驗(yàn)主要圍繞對(duì)HSFB或KFBs的細(xì)胞增殖、凋亡及膠原合成等方面的研究,對(duì)細(xì)胞因子及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等的影響報(bào)道相對(duì)較少。筆者認(rèn)為離體實(shí)驗(yàn)還需要更多地采用基因芯片技術(shù)、反義技術(shù)等藥理新技術(shù)來對(duì)中藥抗瘢痕增生的靶點(diǎn)等問題做更深層次的實(shí)驗(yàn)研究。

    目前,上市的抗瘢痕藥物主要以外用藥為主,故不少學(xué)者已從藥物劑型的研究開發(fā)著手,最大限度地提高外用藥物的透皮吸收生物利用度。因此,以新型的高分子材料為輔料的中藥外用制劑將也是以后臨床及藥學(xué)工作者的一項(xiàng)艱巨任務(wù)。

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    [36] 趙麗,王瑩,關(guān)洪全.黑布藥膏對(duì)兔耳增生性瘢痕Bax和Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué),2011,20(5):764-766.

    [37]陳遠(yuǎn)征,劉達(dá)恩,王潤(rùn)秀,等.防治瘢痕外用復(fù)方中藥對(duì)兔耳增生性瘢痕微血管及血流的影響[J].中國臨床康復(fù),2006,10(7):43-45.

    [38]李威,丁寶財(cái),袁昌魯,等.丹芎瘢痕涂膜止癢藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,(8)3:123-124.

    (收稿日期:2015.11.04)

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