FQ-PCR與RT-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性比較

宋予娟

FQ-PCR與RT-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性比較

宋予娟

目的比較熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)與逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)丙型肝炎(丙肝)患者丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的敏感性及特異性。方法67例丙肝患者和同期50例肝正常人, 均行FQ-PCR和RT-PCR檢測(cè)HCV RNA。觀(guān)察兩種檢測(cè)的敏感性和特異性。結(jié)果丙肝患者FQ-PCR檢測(cè)HCV RNA陽(yáng)性率為64.18%, 較RT-PCR的46.27%明顯較高, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；肝正常人HCV RNA檢測(cè)中RT-PCR檢測(cè)有3例陽(yáng)性, FQ-PCR存在一定的漏診可能。結(jié)論FQ-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA敏感性和特異性均較高, 但極少數(shù)FQ-PCR檢測(cè)為陰性不排除HCV RNA為陽(yáng)性的可能, 臨床診斷中可參考兩種檢測(cè)結(jié)果, 盡量避免漏診和誤診。

丙型肝炎；熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)；丙型肝炎病毒核糖核酸

丙型病毒性肝炎(HC)主要由HCV引起, 患者臨床多表現(xiàn)發(fā)熱、消化道癥狀及肝功能異常, 嚴(yán)重時(shí)易發(fā)展為肝硬化、肝癌［1］。醫(yī)學(xué)上診斷HCV感染主要是檢測(cè)血清HCV RNA且檢測(cè)方法較多［2］。本次研究選取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人分別行FQ-PCR和RT-PCR檢測(cè), 旨在比較FQ-PCR與RT-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人。丙肝患者中男45例,女22例, 年齡24～76歲, 平均年齡(45.2±10.7)歲；肝正常人中男38例, 女12例, 年齡22～71歲, 平均年齡(41.5±10.6)歲。

1.2方法 67例丙肝患者和50例肝正常人均行FQ-PCR和RT-PCR檢測(cè)HCV RNA。①FQ-PCR檢測(cè)：取空腹靜脈血4 ml, 分離血清后低溫保存, 采用HCV RNA提取液提取HCV RNA后逆轉(zhuǎn)錄、不對(duì)稱(chēng)擴(kuò)增、信號(hào)擴(kuò)增, 采用熒光免疫分量分析儀(江蘇南京基蛋生物科技股份有限公司, 型號(hào)Getein1100)檢測(cè)擴(kuò)增后產(chǎn)物, 設(shè)置陰性、陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照,以＜1.2×102copies/ml為陰性界線(xiàn)。②RT-PCR檢測(cè)：提取HCV RNA后核酸擴(kuò)增、逆轉(zhuǎn)錄, 經(jīng)2次PCR反應(yīng), 取10 μl PCR反應(yīng)物在酶標(biāo)儀紫外線(xiàn)燈下檢測(cè), 根據(jù)OD值判定陽(yáng)性、陰性, OD≤0.3判定為陰性, ＞0.3判定為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

丙肝患者FQ-PCR檢測(cè)HCV RNA陽(yáng)性率較RT-PCR檢測(cè)顯著較高, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；RT-PCR檢測(cè)肝正常人HCV RNA出現(xiàn)3例陽(yáng)性, 而FQ-PCR檢測(cè)0例陽(yáng)性, FQ-PCR存在一定的漏診可能。見(jiàn)表1。

表1 FQ-PCR和RT-PCR檢測(cè)HCV RNA結(jié)果比較(n, %)

3 討論

HCV感染是各種慢性肝病、肝硬化以及肝癌的常見(jiàn)病因,其中丙型病毒性肝炎較為典型［3］。據(jù)統(tǒng)計(jì)近年來(lái)因HCV感染造成的發(fā)病和死亡人數(shù)均呈上升趨勢(shì), 我國(guó)丙型病毒性肝炎感染率高達(dá)3.2%, 因此加強(qiáng)病毒HCV RNA早期篩查檢測(cè)對(duì)盡早確定病情、指導(dǎo)治療尤為重要［4］。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和研究的不斷深入, HCV RNA檢測(cè)技術(shù)得到重大進(jìn)展, 在傳統(tǒng)定性RT-PCR基礎(chǔ)上出現(xiàn)了多種定量檢測(cè)方法并廣泛用于臨床中, 其中以熒光定量FQ-PCR較為常見(jiàn)［5］。本院本次研究通過(guò)選取丙肝患者和肝正常人分別行兩種檢測(cè), 進(jìn)一步研究FQ-PCR與RT-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性。

醫(yī)學(xué)臨床證實(shí), 傳統(tǒng)RT-PCR檢測(cè)較為繁瑣, 易出現(xiàn)檢驗(yàn)樣本交叉污染、靈敏度較低等弊端, 且PCR產(chǎn)物必須經(jīng)電泳或雜交檢測(cè), 僅能做定性分析；熒光定量FQ-PCR是在逆轉(zhuǎn)錄后的非對(duì)稱(chēng)PCR產(chǎn)物中添加熒光基團(tuán), 利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程, 能準(zhǔn)確定量待檢模板的拷貝數(shù), 最大程度降低PCR產(chǎn)物交叉感染而引起的假陽(yáng)性, 在早期監(jiān)測(cè)中應(yīng)用較為普遍［6］。本次研究結(jié)果顯示, 67例丙肝患者行HCV RNA檢測(cè), FQ-PCR陽(yáng)性檢出率為64.18%, 而RTPCR檢測(cè)陽(yáng)性率僅為46.27%, 可知FQ-PCR檢測(cè)HCV RNA的敏感性相較RT-PCR檢測(cè)明顯較高, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 說(shuō)明FQ-PCR檢測(cè)具有減少PCR產(chǎn)物污染、準(zhǔn)確定量進(jìn)而提高檢出水平的優(yōu)點(diǎn), 這和丁雪蓮［7］的研究結(jié)果基本吻合；50例肝正常人HCV RNA檢測(cè)中兩種檢測(cè)的特異性均較高, FQ-PCR檢測(cè)均為陰性, 但RT-PCR檢測(cè)結(jié)果中出現(xiàn)了3例顯示為陽(yáng)性, 本研究分析認(rèn)為這可能和定性PCR循環(huán)檢測(cè)的范圍存在不足有關(guān)導(dǎo)致假陽(yáng)性出現(xiàn), 也有研究［8］認(rèn)為FQ-PCR檢測(cè)為陰性時(shí)不能排除該患者病毒血癥水平低于檢測(cè)極限的可能性, 檢測(cè)結(jié)果與病毒感染的潛伏和活躍期有關(guān), 因此臨床檢測(cè)中可多次檢測(cè), 盡量避免漏診、誤診。

綜上所述, FQ-PCR檢測(cè)丙肝患者HCV RNA具有較高的敏感性和特異性, 臨床檢測(cè)中結(jié)合RT-PCR檢測(cè)結(jié)果對(duì)避免漏診誤診具有較大臨床價(jià)值。

［1］邱秀霞, 陸偉, 左苗, 等.慢性丙型肝炎合并肝脂肪變相關(guān)因素探討.中國(guó)醫(yī)藥, 2012, 7(4):431-433.

［2］陳繼梅, 許葉虹, 丁雪芳, 等.慢性丙型肝炎感染者多項(xiàng)指標(biāo)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析.中華疾病控制雜志, 2013, 17(6):548-550.

［3］李妙羨, 王香玲, 吳曉康, 等.HCV抗原檢測(cè)與HCV-RNA和HCV抗體檢測(cè)的比較研究.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 27(4): 55-57.

［4］洪俊, 饒永彩.丙型肝炎病毒核心抗原在丙型肝炎早期診斷中價(jià)值.職業(yè)與健康, 2013, 29(9):1080-1083.

［5］黃秀瓊, 吳英.110例丙肝患者HCV-RNA載量及抗-HCV與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(15): 1809-1810.

［6］王劍, 金茜, 饒慧瑛, 等.國(guó)產(chǎn)試劑與Roche COBAS TaqMan試劑對(duì)慢性丙型肝炎快速和早期病毒學(xué)應(yīng)答的比較研究.傳染病信息, 2012, 25(3):177-179.

［7］丁雪蓮.198例丙肝患者HCV-RNA定量檢測(cè)結(jié)果分析.國(guó)際病毒學(xué)雜志, 2015, 22(z1):201-203.

［8］劉廣印, 昝麗娜, 孫峰, 等.RT-PCR檢測(cè)HCV-RNA在丙肝流行病學(xué)研究中的應(yīng)用.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 33(15):1859-1860.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.03.014

2015-09-28］

453000 新鄉(xiāng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科