注射用單磷酸阿糖腺苷細菌內(nèi)毒素檢查法的可行性研究

李鳳華，李鳳義

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注射用單磷酸阿糖腺苷細菌內(nèi)毒素檢查法的可行性研究

李鳳華，李鳳義

[摘要]目的：建立注射用單磷酸阿糖腺苷的細菌內(nèi)毒素檢測方法。方法：按《中國藥典》2010年版二部附錄細菌內(nèi)毒素檢查方法，考察注射用單磷酸阿糖腺苷對細菌內(nèi)毒素檢查法的干擾作用。結(jié)果：當注射用單磷酸阿糖腺苷稀釋至25.0 mg/ml及以下時，對細菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。結(jié)論：細菌內(nèi)毒素檢查法可用于注射用單磷酸阿糖腺苷的質(zhì)量監(jiān)控。

[關(guān)鍵詞]注射用單磷酸阿糖腺苷； 細菌內(nèi)毒素檢查法； 干擾試驗

注射用單磷酸阿糖腺苷為抗脫氧核糖核酸(DNA)病毒藥，其藥理作用是與病毒的脫氧核糖核酸聚合酶結(jié)合，使其活性降低而抑制DNA合成；主要用于治療皰疹病毒所致的口炎、皮炎、腦炎及巨細胞病毒感染。為了簡便、快捷的檢查制劑的質(zhì)量，本文參照《中國藥典》2010年版附錄XIE的細菌內(nèi)毒素檢查法[1]，通過干擾試驗，探討注射用單磷酸阿糖腺苷細菌內(nèi)毒素檢查法的可行性，現(xiàn)報告如下。

1實驗材料

注射用單磷酸阿糖腺苷(河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，規(guī)格：0.1 g/支，批號：1301054，1302034，1304295，1306155)；鱟試劑(TAL，湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：0.1 ml/支,批號：1207141，標示靈敏度λb為0.25 EU/ml；福州新北生化工業(yè)有限公司，規(guī)格：0.1 ml/支，批號：12030212，標示靈敏度λb為0.25 EU/ml)；細菌內(nèi)毒素工作標準品(CSE，中國藥品生物制品檢定所，批號：150601-200963，效價120 EU/支)；細菌內(nèi)毒素檢查用水(BET，湛江安度斯生物有限公司，批號：1207150，規(guī)格：5 ml/支)。實驗用玻璃試管、刻度吸管等均經(jīng)250℃干烤1 h以上去除熱原。

2方法與結(jié)果

2.1鱟試劑靈敏度的復(fù)核按《中國藥典》2010年版二部附錄的鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗方法[1]進行復(fù)核實驗，實驗結(jié)果見表1。由表1結(jié)果可知，批號1207141鱟試劑靈敏度測定值(λC)為0.25EU/ml，批號12030212鱟試劑靈敏度測定值(λC)為0.21 EU/ml，兩者λC均在0.5~2.0λb之間,符合規(guī)定，可用于實驗，并以標示靈敏度為該批TAL靈敏度。見表1。

表1　鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果 (EU/ml)

注：λC=antilg(∑X/4),X-反應(yīng)終點內(nèi)毒素濃度的對數(shù)值。

2.2供試品細菌內(nèi)毒素理論限值(L)的確定L=K/M,式中K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每千克體重每小時可接受的最大內(nèi)毒素劑量，注射劑的K=5EU·kg-1·h-1,M為人用每千克體重每小時可接受的最大供試品劑量，參照注射用單磷酸阿糖腺苷說明書，成人按體重一次5~10 mg/kg,每日1次，用藥時間不足1 h的按1 h算，那么注射用單磷酸阿糖腺苷的M應(yīng)為10 mg·kg-1·h-1,本品的細菌內(nèi)毒素的理論限值L=K/M=5/10=0.5(EU/mg)。

2.3供試品最小有效稀釋濃度(C)的確定按照《中國藥典》2010年版細菌內(nèi)毒素檢查法的規(guī)定，MVD=CL/λ,目前用于藥品檢驗的凝膠法的鱟試劑靈敏度一般在0.03~0.5 EU/ml，本試驗選用0.25 EU/ml的鱟試劑，本品為注射用粉末，MVD=1，則C=λ/L,L為0.5 EU/mg，則最小有效稀釋濃度C=0.25/0.5=0.5 mg/ml)；本品說明書的用法[2]是臨用前每瓶加2 ml滅菌生理鹽水溶解后肌肉注射，可以將此濃度溶液視為原液，濃度為50 mg/ml，則本品的最大有效稀釋倍數(shù)為100倍。

2.4供試品干擾預(yù)實驗[2-3]為確定供試品對細菌內(nèi)毒素檢查法不干擾的濃度，首先進行干擾預(yù)實驗。取本品，用細菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，得濃度為50 mg/ml的溶液，作為原液，用BET水將供試品原液按2，10，50，100倍進行稀釋，制得25.0，5.0，1.0，0.5 mg/ml 4個濃度梯度的溶液,將上述原液和各稀釋度溶液記為NPC；用上述原液和各稀釋度溶液作溶劑，分別溶解并稀釋CSE，制得5個濃度中細菌內(nèi)毒素含量均為2.0 λ(0.5 EU/ml)的注射用單磷酸阿糖腺苷溶液，記為PPC。

取靈敏度0.25 EU/ml兩個不同廠家的鱟試劑，加入0.1 mlBET水溶解后，分別與上述的NPC和PPC溶液各0.1 ml進行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)2管，同時平行做陽性對照管PC和陰性對照管NC各2管，結(jié)果兩個廠家的鱟試劑測定結(jié)果一致，當樣品稀釋至25.0 mg/ml及以下濃度時，對鱟試劑無干擾作用。

2.5供試品干擾試驗取供試品，用BET水溶解并稀釋成25.0、5.0 mg/ml的稀釋液，分別用此稀釋液和BET水將同一支細菌內(nèi)毒素工作標準品稀釋成0.5，0.25，0.125，0.0625 ml/ml的溶液，分別與兩個廠家的鱟試劑(λ均為0.25 EU/ml)進行反應(yīng)。每個濃度平行做4管，同時以BET水和供試品25.0，5.0 mg/ml的稀釋液作陰性對照，試驗結(jié)果見表2。由表2結(jié)果可得出，當供試品稀釋至濃度為25.0 mg/ml及以下的溶液時，Et值均在0.5Es～2.0 Es之間，表明兩批供試品稀釋至25.0 mg/ml及以下的濃度時，均不干擾試驗。

表2　樣品干擾試驗結(jié)果 (λ=0.25 EU/ml)

注：ES=antilg(∑XS/4)，Et=antilg(∑Xt/4), XS-細菌內(nèi)毒素檢查用水反應(yīng)終點內(nèi)毒素濃度的對數(shù)值，Xt-供試品溶液或其稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液反應(yīng)終點內(nèi)毒素濃度的對數(shù)值。

2.6供試品細菌內(nèi)毒素檢查試驗根據(jù)2.5項下的結(jié)果，選用λ為0.25 EU/ml的鱟試劑進行試驗。取4批供試品，用BET水溶解并稀釋至25.0 mg/ml，分別用兩個廠家的鱟試劑依法檢查，并增設(shè)(2λ)供試品陽性對照管。結(jié)果供試品和陰性對照管均成陰性反應(yīng)，供試品陽性管和和陽性對照管均成陽性反應(yīng)，實驗結(jié)果成立，4個批號的注射用單磷酸阿糖腺苷細菌內(nèi)毒素檢查符合規(guī)定。

3體會

本實驗結(jié)果表明，當供試品稀釋至25.0 mg/ml及以下的濃度時，對鱟試劑的凝集反應(yīng)無干擾作用，因此細菌內(nèi)毒素檢查法可用于注射用單磷酸阿糖腺苷的質(zhì)量控制。本法具有快速、簡便和靈敏的優(yōu)點，適合于基層醫(yī)院藥檢室對藥品質(zhì)量的監(jiān)控。若試劑、藥品產(chǎn)地更換時，建議重做干擾試驗。

[參考文獻]

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[作者單位] 安徽省和縣人民醫(yī)院 藥劑科，238200

收稿日期：(2015-06-07)

[中圖分類號]R 969.4

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-7044(2016)01-0106-03

DOI：10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.01.050

[作者簡介]李鳳華(1965-)，男，副主任藥師，大學。