中藥灌腸療法對潰瘍性結(jié)腸炎β-arrestin 2信號(hào)通路影響的研究概況

楊一天，葉蔚，劉彬彬

1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053；2.杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007

中藥灌腸療法對潰瘍性結(jié)腸炎β-arrestin 2信號(hào)通路影響的研究概況

楊一天1，葉蔚2，劉彬彬2

1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053；2.杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007

本文通過文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，對潰瘍性結(jié)腸炎（UC）中醫(yī)病因病機(jī)、治法，UC與β-arrestin 2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)性，中藥灌腸療法在UC治療中的臨床應(yīng)用，中藥灌腸療法對β-arrestin 2通路下游因子NF-κB p65表達(dá)的影響等進(jìn)行綜述了分析。認(rèn)為中藥灌腸能夠直達(dá)病所，充分發(fā)揮藥物療效，使病灶局部炎癥分泌物減少，血絡(luò)凝滯改善，加速潰瘍愈合；而其機(jī)制可能通過加強(qiáng)β-arrestin 2信號(hào)通路的活性，從而減輕結(jié)腸組織炎癥損傷，有效改善潰結(jié)臨床癥狀。

潰瘍性結(jié)腸炎；中藥灌腸；β-arrestin 2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是以反復(fù)發(fā)作性腹瀉、黏液膿血便及腹部疼痛為主要癥狀，病因至今不清的一類炎癥性腸病(IBD)，其病變部位局限于結(jié)直腸黏膜與黏膜下層，主要以連續(xù)性彌漫性分布的慢性非特異性炎癥及潰瘍形成為特點(diǎn)，易反復(fù)發(fā)作并能引起癌變[1]。目前國內(nèi)外已提出多種發(fā)病機(jī)制的假設(shè)，其中β2AR/β-arrestin2/NF-κBp65信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路近年來越來越受到關(guān)注。中醫(yī)在治療UC上有特色的治療療法—中藥灌腸療法，雖然中藥灌腸能夠直達(dá)病所，充分發(fā)揮藥物療效，減少病灶局部炎癥分泌物，改善血絡(luò)凝滯，加速潰瘍愈合，但其作用機(jī)制未知，目前已有多項(xiàng)研究證實(shí)中藥灌腸可能通過加強(qiáng)β-arrestin 2信號(hào)通路的活性，減輕結(jié)腸組織炎癥損傷，有效改善潰結(jié)臨床癥狀?，F(xiàn)將中醫(yī)灌腸療法對UC β-arrestin2信號(hào)通路影響的研究進(jìn)展概況陳述如下。

1 中醫(yī)對UC的認(rèn)識(shí)

中醫(yī)學(xué)并無潰瘍性結(jié)腸炎之具體病名，但可根據(jù)其反復(fù)腹瀉、黏液膿血便等臨床癥狀，歸屬為中醫(yī)學(xué)腸澼、痢疾、便血等病，目前臨床多將其歸屬于腸澼范疇[2]。根據(jù)2003年中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化專業(yè)委員會(huì)分型標(biāo)準(zhǔn)可將UC分為大腸濕熱、脾胃氣虛、脾腎陽虛、肝郁脾虛、氣滯血瘀和陰血虧虛6個(gè)證型，其中臨床上以大腸濕熱型居多。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，該病為本虛標(biāo)實(shí)之證，由于感受外邪、飲食不節(jié)、情志失調(diào)、勞倦內(nèi)傷等多種原因?qū)е缕⑽柑撊酰薪惯\(yùn)化、通降功能失調(diào)，濕熱濁毒不能排出體外，壅塞腸中，阻滯氣機(jī)，瘀血內(nèi)生，與腸中糟粕搏結(jié)并滯積于腸道，肉腐血敗，腸絡(luò)被傷，腐肉與絡(luò)血共下，故而見下痢赤白，其本在脾腎，標(biāo)在大腸[3]。中醫(yī)臨床上除了運(yùn)用湯藥辨證治療外，還有保留灌腸治療UC的特色療法，多個(gè)臨床研究顯示部分中藥制劑灌腸對腸黏膜能起到直接的修復(fù)與保護(hù)作用，促進(jìn)炎癥物質(zhì)吸收和潰瘍愈合；另藥物物理的溫?zé)岽碳み€能引起腸黏膜的血管擴(kuò)張，促進(jìn)局部血液和淋巴循環(huán)，增強(qiáng)新陳代謝，改善局部組織的營養(yǎng)和全身機(jī)能[4]。

2 UC與β-arrestin 2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

2.1 β-arrestin 2通路簡介 β-arrestin 2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中主要信號(hào)表達(dá)包擴(kuò)β2AR(β2腎上腺素能受體)、β-arrestin2與NF-κBp。其中位于通路下游的NF-κB是一種高度保守的轉(zhuǎn)錄因子，它廣泛存在于人體各類組織中，可與多種細(xì)胞基因啟動(dòng)子、增強(qiáng)子的kB轉(zhuǎn)錄序列位發(fā)生特異性結(jié)合，在免疫和炎癥反應(yīng)、細(xì)胞生長、病毒感染等方面發(fā)揮重要作用[5]。NF-κB是由p50、p52、p65(-RelA)、RelB及c-Rel組成的同源或異源二聚體復(fù)合物[6]，靜息狀態(tài)時(shí)能與抑制蛋白結(jié)合形成三聚體，以無活性方式存在，當(dāng)細(xì)胞受到通路上游信號(hào)因子直接及間接刺激時(shí)，NF-κB即可被激活，并移位至細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，引起內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，從而引發(fā)炎癥，其功能主要受IκB蛋白家族調(diào)控。

目前為止 Arrestin家族共發(fā)現(xiàn)六大類成員，其中β-arrestin 1、β-arrestin 2廣泛存在于各種細(xì)胞中，可調(diào)節(jié)大多數(shù) G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的活性[7]。研究證實(shí)，β-arrestin2可以通過以下2種途徑抑制NF-κB活化，進(jìn)而參與免疫調(diào)節(jié)與炎癥抑制[8]。一是與NF-κB的抑制蛋白IκBα結(jié)合形成復(fù)合物，掩蓋核定位信號(hào)，進(jìn)而阻止NF-κB從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄；二是抑制腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白6(TRAF6)的自動(dòng)泛素化負(fù)性調(diào)節(jié)NF-κB的活化[9]。

β-arrestin2是Benovie等[10]在對牛腦中的β-腎上腺素受體激酶(βARK)提純的過程中發(fā)現(xiàn)的。研究證實(shí)用β2AR的激動(dòng)劑異丙腎上腺素(isoprot-erenol，Iso)處理細(xì)胞后能夠顯著增強(qiáng)β-arrestin 2與抑制蛋白IκBα的結(jié)合作用，加強(qiáng)抑制NF-κB下游基因轉(zhuǎn)錄的作用[11]。這也間接揭示了β2AR和NF-κB間存在著以β-arrestin 2為介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，并提示交感神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控免疫系統(tǒng)是一種可能的作用方式。

2.2 UC中β-arrestin 2信號(hào)通路的表達(dá) β-arrestin2可通過與抑制蛋白IκBα和TRAF6相互作用限制NF-κB的活化，并通過β2AR/β-arrestin2信號(hào)通路與另一條信號(hào)通路——TLR/NF-κB的交叉對話等機(jī)制調(diào)節(jié)TLR活化的NF-κB活性[12]。因此β-arrestin可以通過調(diào)節(jié)NF-κB的活化進(jìn)而影響多種炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，參與到IBD的炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的過程中。

有研究表明，UC模型組結(jié)腸黏膜表面上皮細(xì)胞NF-κB p65表達(dá)較正常組顯著增強(qiáng)，呈彌漫狀分布，固有層也有NF-κB p65的高表達(dá)，可總結(jié)為UC患者腸黏膜炎性反應(yīng)越重，NF-κB p65表達(dá)越強(qiáng)[13]，說明UC患者可見NF-κB的異常活化。另外Gao等[14]研究發(fā)現(xiàn)，β-arrestin 2的氨基末端結(jié)構(gòu)域可以與IκBα的羧基末端結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合，顯著抑制IκB激酶對IκBα的磷酸化過程，通過加強(qiáng)穩(wěn)定IκBα來阻止NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，從而減弱 NF-κB的活化，證實(shí)了β-arrestin 2對NF-κB存在抑制作用。而β2AR受體信號(hào)可降低β-arrestin2磷酸化和誘導(dǎo)β-arrestin2的特異性構(gòu)象改變，加強(qiáng) β-arrestin2與 IκBα的結(jié)合，穩(wěn)定 IκBα，抑制NF-κB活化。因此β2AR/β-arrestin2/NF-κBp信號(hào)通路中，增強(qiáng)β2AR可加強(qiáng)β-arrestin2對NF-κB的抑制作用，為UC的診治提供新的臨床思路。

3 中藥灌腸療法

中藥灌腸療法作為一種中醫(yī)針對UC局部治療的特色方法，通過直接使用特定中藥制劑灌腸，直達(dá)病灶，使局部藥物濃度達(dá)到最大化，充分延長藥物與病灶接觸時(shí)間，發(fā)揮中藥療效。研究表明中藥灌腸療法可減少病灶局部炎癥分泌，改善血絡(luò)凝滯，加速潰瘍愈合，藥液保留時(shí)間越長，吸收可越充分，病情癥狀改善越快，預(yù)后愈佳[15]。

3.1 中醫(yī)灌腸療法治療UC的臨床應(yīng)用 中醫(yī)灌腸療法能直接使藥物與患者病灶接觸，緩解炎癥，促進(jìn)潰瘍愈合，有明確的臨床療效，有臨床推廣的意義。如宋麗琴等[16]通過灌腸療法和柳氮磺吡啶的對比研究，顯示治療組患者應(yīng)用中藥保留灌腸治療后療效較對照組顯著提高，進(jìn)一步證實(shí)了中藥治療的良好效果。灌腸方由芍藥、當(dāng)歸、馬齒莧、白頭翁、白花蛇舌草、黃連、黃芩、黃柏、木香、檳榔、白芨、五倍子、苦參等組成，諸藥合用，共奏清熱化濕、涼血解毒和止瀉之功效。竇紅宇等[17]自擬消潰方，與使用硫酸依替米星聯(lián)合奧硝唑的對照組對照，結(jié)果顯示中藥保留灌腸組患者近期療效顯著高于對照組(P＜0.05)，說明中藥保留灌腸有利于促進(jìn)潰瘍愈合，減輕腸黏膜病變，提示自擬消潰方保留灌腸治療UC在改善消化道癥狀方面較西醫(yī)藥物優(yōu)勢明顯。席作武[18]擬清潰灌腸方(黃連、白術(shù)、白及、地榆、三七粉、赤芍、烏梅等)保留灌腸，并根據(jù)不同中醫(yī)證型配以不同的中成藥內(nèi)服治療本病，結(jié)果顯示治療后中藥組Baron評分和Sutherland疾病活動(dòng)指數(shù)評分低于西藥組，腹瀉、膿血便和腹痛評分低于西藥組，總有效率為91.2%高于西藥組的75.0%，提示了中藥干預(yù)措施能促進(jìn)潰瘍的愈合、減輕臨床癥狀、降低疾病活動(dòng)指數(shù)。

3.2 中藥灌腸療法對β-arrestin 2通路下游因子NF-κB p65表達(dá)的影響 到目前為止，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)研究通過測量通路中NF-κB p65表達(dá)來證實(shí)中藥灌腸的臨床療效，對 β2AR、β-arrestin2指標(biāo)含量相對關(guān)注較少。如杜群等[19]通過給予四神丸浸膏劑灌胃腸，與對照組進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)空白組大鼠結(jié)腸黏膜NF-κB p65mRNA表達(dá)處于較低水平，與空白組比較，模型組NF-κB p65 mRNA表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01)，與模型組比較，四神丸組NF-κB p65 mRNA表達(dá)水平明顯降低，說明四神丸浸膏劑灌胃腸能顯著降低NF-κB p65含量，從而發(fā)揮抗炎作用。徐進(jìn)等[20]通過灌腸復(fù)方甘草酸苷劑及SAPA，并與正常對照組及模型組進(jìn)行對比，結(jié)果證實(shí)復(fù)方甘草酸苷保留灌腸對UC有一定治療作用并能影響NF-κB p65蛋白表達(dá)。陸文洪等[21]采用復(fù)方芩柏顆粒劑通過保留灌腸干預(yù)治療，并與正常組、模型組、西藥組進(jìn)行對比，結(jié)果提示復(fù)方芩柏顆粒劑保留灌腸對UC實(shí)驗(yàn)大鼠有良好治療作用，能有效抑制NF-κB的活性，減輕結(jié)腸組織的炎癥損傷，從而改善結(jié)腸組織病理學(xué)分級水平。

4 展望

4.1 臨床治法的選擇 目前UC的治療藥物主要是5-ASA類和激素類，如有激素抵抗和激素依賴的患者則需用免疫抑制劑[22]。但臨床上可見5-ASA類價(jià)格昂貴；氫化可的松灌腸液效果確切，但不能維持臨床緩解，且長期使用可能引發(fā)激素不良反應(yīng)[23]。對病變在遠(yuǎn)段結(jié)腸的患者，筆者推薦局部用藥灌腸為主，優(yōu)于口服給藥，中藥保留灌腸可通過清熱解毒、活血祛瘀、利濕消腫等手段達(dá)到控制癥狀，改善患者的生活質(zhì)量的作用。筆者查找文獻(xiàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)研究著重于中藥灌胃對UC發(fā)病的影響，卻忽略了最直接的中藥灌腸療法，這也是目前灌腸療法在臨床上難以推廣開的原因。

4.2 組方用藥的選擇 縱觀大部分中藥灌腸治療，其所用藥物或?yàn)榍鍩峤舛荆驗(yàn)闆鲅寡?，或?yàn)榻∑⒃餄裰罚蠖鄶?shù)方中包含黃連、生白術(shù)、白及、地榆、三七粉、延胡索、赤芍、烏梅等，這提示清熱涼血、健脾利濕法在UC診治中的重要作用，這與上文所提臨床多見之大腸濕熱型相符合，可見血熱、濁毒、濕邪是UC發(fā)展過程中重要的病機(jī)及病理產(chǎn)物，也為進(jìn)一步研究中藥治療UC提供了客觀依據(jù)。

4.3 檢測指標(biāo)的選擇 雖然許多研究及臨床應(yīng)用也證實(shí)中藥灌腸法有很好的改善UC癥狀，減輕患者痛苦的作用，但對中藥在體內(nèi)如何發(fā)揮其藥理作用卻研究甚少。筆者所引用的上述很多實(shí)驗(yàn)研究僅僅從通路下游因子NF-κBp65含量來探討UC的可能發(fā)病機(jī)制，已證明大部分中藥灌腸能抑制NF-κB活化及表達(dá)，減少促炎因子的釋放，調(diào)節(jié)UC患者結(jié)腸中異常的免疫反應(yīng)，從而減輕結(jié)腸炎癥，證實(shí)NF-κB的活化是目前所認(rèn)知的UC發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)之一。但筆者同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，目前鮮有實(shí)驗(yàn)測量β2AR、β-arrestin2的表達(dá)濃度并探究其與UC發(fā)病的內(nèi)在關(guān)系，所查閱中僅有烏梅丸灌胃、氧化苦參堿肌肉注射等實(shí)驗(yàn)中同時(shí)檢測了上述指標(biāo)，而對于中藥灌腸之指標(biāo)檢測少之又少。若能在實(shí)驗(yàn)中留意β2AR、β-arrestin2的表達(dá)，則可發(fā)現(xiàn)中藥灌腸在治療潰瘍性結(jié)腸炎的可能機(jī)制，并能證實(shí)中藥灌腸療法是通過加強(qiáng)β-arrestin2信號(hào)通路的活性，從而抑制NF-κB的表達(dá)，減輕結(jié)腸組織炎癥損傷，促進(jìn)黏膜愈合，有效改善潰結(jié)臨床癥狀。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病協(xié)作組.對我國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見[J].胃腸病學(xué)，2007，12(8)：488-494.

[2]王飛，石健，王建民，等.中藥灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎臨床研究進(jìn)展[J].中醫(yī)外治雜志，2011，20(6)：39-41.

[3]陳英俊，黎氏畫，陳明德，等.中藥治療潰瘍性結(jié)腸炎研究簡況[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2014，28(8)：181-183.

[4]羅世英，周樂，呂小華，等.白花蛇舌草總黃酮對實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎的作用及免疫學(xué)機(jī)制研究[J].中國中藥雜志，2014，39(5)：896-900.

[5]藺曉源，劉杰民.TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路與潰瘍性結(jié)腸炎[J].胃腸病學(xué)，2013，18(4)：244-246.

[6]加秀鳳，沈霖，范恒，等.NF-κBP65在潰瘍性結(jié)腸炎與結(jié)直腸癌患者腸黏膜中的表達(dá)差異與意義[J].世界華人消化雜志，2014，22(2)：279-285.

[7]Xiao KH，Sudha KS，Kelly N，et al.Activation-dependent conformationalchanges inβ-Arrestin 2[J].The Journal of Biological Chemistry，2004，279(53)：55744-55753.

[8]Ma L， Pei G.β-arrestin signaling and regulation of transcription[J].J Cell Sci， 2007，120(Pt 2)：213-218.

[9]彭愛妮，閆福嶺.β-arrestin2在免疫調(diào)節(jié)中的作用[J].免疫學(xué)雜志，2014，30(2)：170-174.

[10]Benovic JL，Kuhn H，Weyand I，et al.Functional desensitization of the isolated beta-adrenergic receptor by the beta-adrenergic receptor kinase：potential role of an analog of the retinal protein arrestin(48-kDa protein)[J].Proc Natl Acad Sci USA，1987，84：8879-8882.

[11]Du T，Li H，Li M，et al.Siganaling pathways of isoproterenol-induced ERK1/2 phosphorylation in primary cultures of astrocytes are concentration-dependent[J]. J Neurochem，2010，115：1007-1023.

[12]梁麗，范恒，段雪云，等.潰瘍性結(jié)腸炎大鼠β2AR、β-arrestin2、NF-κB p65的表達(dá)及烏梅丸的干預(yù)作用[J].世界華人消化雜志，2010，18(16)：1650-1655.

[13]徐曉云，李冬斌，李彬，等.TLR4、NF-κB p65、IL-8在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)[J].疑難病雜志，2012，11 (3)：181-183.

[14]Gao H，Sun Y，Wu Y，et al.Identification of beta-arrestin2 as a G protein-coupled receptor-stimulated regulator of NF-kappaB pathways[J].Mol Cell，2004，14(3)：303-317.

[15]祖智博，王垂華.中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎概況[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2015，29(3)：180-181.

[16]宋麗琴，王國夫.中藥灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎對炎性相關(guān)因子的影響[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24(2)：414-415.

[17]竇紅宇，孫濱濱，丁柯，等.中藥保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效探討[J].中國醫(yī)藥指南，2015(2)：30-31.

[18]席作武.中藥內(nèi)服聯(lián)合清潰方保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(19)：198-201.

[19]杜群，李紅，王建華，等.四神丸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中核轉(zhuǎn)錄因子KBp65基因和蛋白表達(dá)的影響.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24(5)：396-399.

[20]徐進(jìn)，杜勇，盧光新，等.復(fù)方甘草酸苷對TNBS結(jié)腸炎大鼠腸道炎癥的影響[J].胃腸病學(xué)，2013，18(4)：221-224.

[21]陸文洪，賀荔枝，王真權(quán)，等.復(fù)方芩柏顆粒劑保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖南中醫(yī)雜志，2015，31(2)：128-130.

[22]Gracie DJ， Ford AC.Evidence-based management of uIcerative colitis[J].Minerva Gastroen teroI DietoI，2012，58(2)：87-99.

[23]GirIich C，SchoImerich J.Topical delivery of steroids in infIammatory boweI disease[J].Curr Drug DeIiv，2012，9(4)：345-349.

（責(zé)任編輯：馮天保）

R574.1

A

0256-7415（2016）12-0198-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.12.085

2016-05-12

杭州市衛(wèi)生局資助課題（2013B16）

楊一天（1991-），女，碩士研究生，研究方向：消化內(nèi)科。