常見(jiàn)微生物快速檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

崔 紅

（遼寧現(xiàn)代服務(wù)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110164）

常見(jiàn)微生物快速檢測(cè)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

崔 紅

（遼寧現(xiàn)代服務(wù)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110164）

快速檢測(cè)食品中微生物的方法在食品安全檢測(cè)中發(fā)揮著重要的作用。本文綜述目前常見(jiàn)的免疫技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、生物傳感器、代謝技術(shù)等微生物快速檢測(cè)技術(shù)，為今后的進(jìn)一步研究提供一定的參考依據(jù)。

快速檢測(cè)；免疫技術(shù)；分子生物學(xué)技術(shù)；生物傳感器；代謝技術(shù)

食品污染的種類很多，其中以微生物污染范圍最廣、危害最大。近5年，我國(guó)由微生物和生物毒素引起的食源性疾病報(bào)告起數(shù)和發(fā)病人數(shù)占全部報(bào)告數(shù)的60%以上，因此食品微生物檢測(cè)是食品安全檢測(cè)中的重要內(nèi)容。傳統(tǒng)的瓊脂平板培養(yǎng)法一般需要2～3 d才能完成檢測(cè)，且操作繁瑣，難以滿足目前微生物食品安全檢測(cè)的要求[1]。近年來(lái)，隨著微電子技術(shù)和生物技術(shù)的發(fā)展，許多新興技術(shù)被應(yīng)用到微生物檢測(cè)中，可大大地縮短檢測(cè)時(shí)間。本文系統(tǒng)闡述幾種常見(jiàn)技術(shù)在食品微生物快速檢驗(yàn)中的應(yīng)用現(xiàn)狀，旨在為微生物快速檢測(cè)方法的改進(jìn)和完善提供理論依據(jù)。

1 免疫技術(shù)

（1）酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)。早在20世紀(jì)70年代，酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)就被廣泛地應(yīng)用于檢驗(yàn)行業(yè)中。它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)。該技術(shù)利用抗體與酶復(fù)合物的結(jié)合，通過(guò)顯色達(dá)到檢測(cè)的目的。Chunglok等利用新型碳納米管作為固相吸附材料檢測(cè)沙門(mén)氏菌，使靈敏度大大提高[2]。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)對(duì)沙門(mén)氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等微生物的檢測(cè)均適用，且效果較好。

（2）免疫層析技術(shù)。免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)80年代興起的一種快速診斷技術(shù)，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。我國(guó)李春鳳 等人研制針對(duì)副溶血弧菌、大腸埃希菌O157∶H7、甲型副傷寒沙門(mén)菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌4種靶標(biāo)菌的上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫層析技術(shù)試紙，對(duì)細(xì)菌污染的食品檢出率較高[3]。免疫層析技術(shù)廣泛應(yīng)用于食品中布氏桿菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌的檢測(cè)和鑒定。

（3）免疫磁珠分離技術(shù)。免疫磁珠分離技術(shù)是將免疫學(xué)反應(yīng)高度特異性與磁珠特有磁響應(yīng)性相結(jié)合的一種方法。該技術(shù)通過(guò)連接抗體的磁珠將增菌液中的目的菌捕捉出來(lái)，在平板上觀察分析目的菌[4]。王濤 等人研究表明建立免疫磁珠分離法聯(lián)合熒光定量PCR檢測(cè)方法具有特異性強(qiáng)、敏感度高、快速易操作等特點(diǎn)，該檢測(cè)方法能提高O157∶H7大腸埃希菌的檢出率和準(zhǔn)確性[5]。張賽 等將該法與熒光免疫層析技術(shù)結(jié)合，用于單增李斯特菌的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中。本方法的建立對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)食品中單增李斯特菌具有重大意義[6]。目前，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品中大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的檢測(cè)和鑒定。

2 分子生物學(xué)技術(shù)

（1）基因芯片技術(shù)?；蛐酒夹g(shù)是20世紀(jì)90年代中期美國(guó)Affymetrix公司發(fā)明的，具有高通量和并行化的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于微生物快速檢測(cè)。王大勇等利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)水中致病微生物，大大縮短檢測(cè)時(shí)間，檢測(cè)率提高100倍，同時(shí)還可檢測(cè)出多種致病微生物[7]。羅宇鵬 等研究發(fā)現(xiàn)基因芯片技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)志賀氏菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和空腸彎曲菌等多種病原菌，操作簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)[8]。高興 等建立多重PCR反應(yīng)結(jié)合基因芯片技術(shù)的11種（株）食源性致病菌檢測(cè)方法，整個(gè)操作時(shí)間不超過(guò)3 h[9]。

（2）PCR技術(shù)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可在試管中反應(yīng)，在數(shù)小時(shí)內(nèi)將極微量的目的基因或某一特定的DNA片段擴(kuò)增一百萬(wàn)倍。張弛 等人建立一種食品中金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌和志賀氏菌同時(shí)快速檢測(cè)的多重RTi-PCR方法，為食源性致病菌的檢測(cè)提供新的方法學(xué)依據(jù)[10]。錢志偉 等初步建立能同步、快速地檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生性李斯特菌的三重PCR方法[11]。蔡軍 等探究用PCR方法檢測(cè)食品中沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌的檢測(cè)靈敏度，建立快速檢測(cè)3種食源性致病菌的多重PCR方法[12]。目前，乳酸菌、大腸菌群、雙歧桿菌、肉毒梭菌、變形弧菌和沙門(mén)氏菌都有用PCR方法檢測(cè)的報(bào)道。

3 代謝技術(shù)

（1）ATP生物發(fā)光法。ATP生物發(fā)光法是近些年發(fā)展較快的一種微生物快速檢測(cè)方法。該法過(guò)程簡(jiǎn)單快捷，無(wú)須微生物培養(yǎng)，靈敏度高，可在幾分鐘內(nèi)完成微生物ATP的檢測(cè)，是目前檢測(cè)微生物數(shù)目最快捷的方法。田雨 等人以ATP生物發(fā)光法為基礎(chǔ)，輔以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法，分析和測(cè)定枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、大腸埃希氏菌、乳酸片球菌和乳酸鏈球菌等6株常見(jiàn)菌中ATP含量的差異[13]。李利霞 等研究建立測(cè)定食品中細(xì)菌總數(shù)的ATP生物發(fā)光反應(yīng)體系，并將建立好該體系應(yīng)用于食品樣品中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)，加標(biāo)回收率范圍為82.2%～112.4%[14]。

（2）電阻抗技術(shù)。早在20世紀(jì)70年代，國(guó)外就已開(kāi)始電阻抗技術(shù)的研究。該技術(shù)敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、反應(yīng)快。杜春寒 等應(yīng)用電阻抗法檢測(cè)低酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌中的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、糞鏈球菌、生孢梭菌、沙門(mén)氏菌和蠟狀芽孢桿菌7種主要菌進(jìn)行檢測(cè)，全部檢測(cè)在3 d內(nèi)即可完成，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠[15]。張愛(ài)萍 等人運(yùn)用阻抗法快速分析牛奶中的菌落總數(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn)，電導(dǎo)和總阻抗、雙電層電容可作為阻抗檢測(cè)參數(shù)，且結(jié)果準(zhǔn)確可靠[16]。

4 生物傳感器

生物傳感器起源于20世紀(jì)60年代，是利用生物活性物質(zhì)做敏感期間，配以適當(dāng)?shù)膿Q能器所構(gòu)成的分析檢測(cè)工具。Kim等通過(guò)生物傳感器技術(shù)提高單增李斯特菌的檢測(cè)能力，并大大縮短檢測(cè)時(shí)間[17]。趙廣英等將免疫測(cè)定技術(shù)與傳感技術(shù)相結(jié)合，利用一次性免疫傳感器檢驗(yàn)阪崎腸桿菌的研究表明，該法準(zhǔn)確性高、儲(chǔ)存穩(wěn)定性好，且大大縮短試驗(yàn)時(shí)間[18]。

5 結(jié)語(yǔ)

食品中微生物的檢測(cè)一直備受人們關(guān)注，各國(guó)研究人員也在致力于尋求一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確的快速檢測(cè)方法?？傊S著微生物快速檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，將會(huì)有更多、更完善的檢測(cè)方法應(yīng)用到食品安全的檢測(cè)中，為食品質(zhì)量安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。

[1]楊春光，王宏偉，彭心婷，等.食品病原微生物快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015（1）：41-47.

[2]Chunglok W，Wuragil DK，Oaew S，et al. Immunoassay based on carbon nanotubes-enhanced ELISA for Salmonella enterica Typhimurium[J].Biosensors and Bioelectronics，2011（8）：3584-3589.

[3]李春鳳，趙 勇，王曉英.基于上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫層析技術(shù)的常見(jiàn)食源性致病菌快速檢測(cè)方法研究預(yù)評(píng)價(jià)[J].軍事醫(yī)學(xué)，2015（2）：128-132.

[4]王 輝，張 偉，王 燕，等.食品病原微生物快速檢測(cè)技術(shù)及研究進(jìn)展[J].糧食與油脂，2012（4）：1-5.

[5]王 濤，劉 凱，王 艷，等.應(yīng)用免疫磁珠分離法及熒光定量PCR技術(shù)快速檢測(cè)腸出血性大腸埃希菌O157∶H7[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2011（4）：291-293.

[6]張 賽，何小維，劉曉云，等.熒光免疫層析法結(jié)合免疫磁珠分離技術(shù)快速檢測(cè)單增李斯特菌[J].現(xiàn)代食品科技，2014（11）：229-234.

[7]王大勇，肖進(jìn)文，方振東，等.濃縮富集+基因芯片快速檢測(cè)水體中致病菌[J].后勤工程學(xué)院學(xué)報(bào)，2010（4）：65-70.

[8]羅宇鵬.不同方法檢測(cè)食源性致病菌的比較研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015（7）：918-919.

[9]高 興，辛文文，高 姍，等.11種（珠）食源性細(xì)菌基因芯片檢測(cè)方法的建立[J].生物技術(shù)通報(bào)，2013（12）：123-128.

[10]張 馳，楊 軍，劉新梅，等.食品中3種致病菌的Taqman多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2011（4）：151-156.

[11]錢志偉，孫新城.食品中3種致病菌多重PCR檢測(cè)體系的建立及初步應(yīng)用[J].食品科學(xué)，2011（16）：236-239.

[12]蔡 軍，李 慧，歐靜堃，等.3種食源性致病菌多重PCR檢測(cè)體系的建立[J].食品科技，2015（3）：324-329.

[13]田 雨，候玉柱，柯潤(rùn)輝.采用ATP生物發(fā)光法分析6株常見(jiàn)細(xì)菌ATP含量差異[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2015（1）：220-224.

[14]李利霞，任金娥，常 超，等.ATP生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)的建立及應(yīng)用可行性分析[J].食品科技，2012（1）：275-278.

[15]杜春寒，莫建光，盧安根.電阻抗法檢測(cè)低酸性罐頭食品商業(yè)無(wú)菌的方法研究[J].廣西科學(xué)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010（3）：329-332.

[16]張愛(ài)萍，孟瑞鋒，侯式娟，等.阻抗法快速分析牛奶中菌落總數(shù)[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2012（2）：158-164.

[17]Kim HS，Cho IH，Seo SM，et al. In situ immunomagnetic concentration-based biosensor systems for the rapid detection of Listeria monoctogenes[J].Materials Science and Engineering：C，2012（2）：160-166.

[18]趙廣英，張 曉，竇文超，等.一次性免疫傳感器快速檢測(cè)阪崎桿菌的研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2011（7）：959-965.

The Research on Rapid Microbial Detection Technology in Food Safety Testing

Cui Hong
(Liaoning vocational Technical College of Modern Service, Shenyang 110164, China)

The rapid detection of microorganisms in food testing methods plays an important role in food safety inspection. This paper summarizes the common rapid detection technology of microorganisms such as immunological technology, molecular biology technology, biosensor, metabolism technology to provide theoretical basis for further research in the future.

Rapid detection; Immunological technology; Molecular biology technology; Biosensor; Metabolism technology

TS207.3

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.22.010