桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響

鄧秀婷　羅　姮　李彥彬　楊高群　徐遠(yuǎn)超　林秀澄　李朝敢

(右江民族醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院，廣西　百色　533000)

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桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響

鄧秀婷羅姮李彥彬楊高群徐遠(yuǎn)超林秀澄李朝敢1

(右江民族醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院，廣西百色533000)

摘要〔〕目的觀察桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的影響。方法用D-半乳糖建立小鼠衰老模型，同時實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予不同劑量(2.0、4.0、6.0 g·kg-1·d-1)的桑葚提取液，給藥40 d后處死小鼠，取血清及肝臟測定SOD、GSH-Px活性和MDA含量。結(jié)果桑葚提取液可以提高小鼠肝臟中的SOD、GSH-Px活性和降低MDA含量。低劑量桑葚提取液提高小鼠血清中的SOD、GSH-Px活性和降低MDA含量的作用較明顯。結(jié)論桑葚提取液具有抗氧化延緩衰老的作用。

關(guān)鍵詞〔〕桑葚提取液；D-半乳糖；抗氧化；抗衰老

1右江民族醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室

第一作者：鄧秀婷(1990-)，女，在讀碩士，主要從事內(nèi)分泌與代謝病研究。

《本草綱目》中記載，桑葚單食，止消渴，利五臟關(guān)節(jié)，通血?dú)?，久服不饑，安魂?zhèn)神，令人聰明，變白不老?，F(xiàn)代藥理研究也表明，桑葚含有豐富的維生素C、胡蘿卜素、黃酮、硒等物質(zhì)〔1〕，具有抗衰老、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、降脂、降血糖的作用〔2〕?？顾ダ吓c自由基的清除有密切關(guān)系。隨著年齡的增長，體內(nèi)過量的自由基可通過氧化作用攻擊細(xì)胞膜上的生物大分子引起細(xì)胞膜上一系列過氧化反應(yīng)、DNA突變和生物酶活力下降，最終導(dǎo)致細(xì)胞功能受損以至衰老、死亡〔3〕。目前，國內(nèi)對桑葚的研究多見于心血管系統(tǒng)方面，而對其抗氧化、抗衰老作用方面比較少見。本實(shí)驗(yàn)探討桑葚的抗氧化和抗衰老作用。

1材料與方法

1.1藥品、試劑與實(shí)驗(yàn)動物桑葚干購自國營正規(guī)中藥店；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；D-半乳糖由上海金穗生物科技有限公司提供；實(shí)驗(yàn)動物為昆明種小白鼠，體重(20±2)g，雌雄兼用，由右江民族醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號為SCXR(桂)2003-0010號。

1.2動物分組、衰老模型的建立及給藥動物適應(yīng)環(huán)境3～4 d后，隨機(jī)分成正常對照組、衰老模型組、桑葚提取液低、中、高劑量組，每組10只。除正常對照組外，其余各組動物每只按體重劑量150 mg/kg皮下注射D-半乳糖溶液，每日一次，正常對照組注射等量生理鹽水。同時桑葚提取液低、中、高劑量組動物每只分別按體重桑葚生藥2.0、4.0、6.0 g/kg 給予灌胃，每日1次，衰老模型組與正常對照組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)40 d。實(shí)驗(yàn)過程中每組意外死亡2只。

1.3血清中SOD、MDA、GSH-Px含量的測定從動物眼眶取血，37℃水浴靜置30min， 3 000 r/min離心10 min，分離得血清，參照南京建成生物工程公司試劑盒說明書的方法步驟分別測定血清中SOD、MDA、GSH-Px的含量。

1.4肝臟SOD、MDA、GSH-Px的測定斷椎處死動物，取肝臟，在4℃低溫下操作，用生理鹽水洗除多余血液，濾紙吸收多余水分，天平稱重，用玻璃勻漿器勻漿，用生理鹽水稀釋成10%肝勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液部分，按試劑盒說明書的方法步驟分別測定肝臟中SOD、MDA、GSH-Px的含量。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS11.5軟件行方差分析。

2結(jié)果

2.1桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠血清中SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響與正常對照組比較，衰老模型組、桑葚中劑量組血清SOD活性明顯降低(P<0.01，P<0.05)；而桑葚低、中、高劑量組MDA含量明顯降低(P<0.01)。與衰老模型組比較，桑葚低劑量組血清SOD活性明顯升高(P<0.05)，而桑葚低、中、高劑量組MDA含量明顯降低(P<0.01)。桑葚低、中、高劑量組GSH-Px活性與正常對照組、衰老模型組，無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1　桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠血清SOD、

與正常對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與衰老模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01，下表同

2.2桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠肝臟中SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響與正常對照組比較，衰老模型組肝臟SOD、GSH-Px活性明顯降低(P<0.05、P<0.01)；桑葚低、中、高劑量組肝臟SOD活性也明顯降低(P<0.05、P<0.01)；桑葚高劑量組肝臟MDA含量、GSH-Px明顯降低(均P<0.05)。與衰老模型組比較，桑葚低、中劑量組肝臟SOD的活性明顯升高(P<0.01、P<0.05)，而桑葚高劑量組MDA含量明顯降低(P<0.05)，桑葚低、中、高劑量組肝臟GSH-Px的活性明顯升高(P<0.01、P<0.05)。見表2。

表2　桑葚提取液對D-半乳糖致衰老小鼠肝臟SOD、

3討論

當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)研究抗衰老機(jī)制中，自由基學(xué)說與線粒體DNA損傷學(xué)說占主要地位。自由基學(xué)說認(rèn)為，在人體中不斷產(chǎn)生自由基并存在有效的自由基清除系統(tǒng)，使自由基維持在正常水平。一旦這種平衡打破，過剩的自由基經(jīng)常發(fā)生一系列的氧化反應(yīng)，最終使細(xì)胞膜的功能受損，細(xì)胞活力下降，造成組織器官功能衰退，從而使機(jī)體進(jìn)入衰老狀態(tài)〔4〕。由此可見，清除自由基，抗氧化對于延緩衰老有明顯作用。

桑葚中含有大量的維生素C、硒、胡蘿卜素、黃酮等天然抗氧化成分，并具有提高免疫力，抗氧化，降血糖、降血脂的作用。這些作用可能與桑葚中富含的黃酮、維生素C有關(guān)。有文獻(xiàn)報道〔5〕，維生素C具有減輕氧化損傷，保護(hù)mtDNA和氧化呼吸酶活力的作用，并借助此發(fā)揮抗氧化延緩衰老的功效。而黃酮類化合物則通過抑制脂質(zhì)過氧化，提高抗氧化酶系統(tǒng)活性而間接產(chǎn)生抗自由基的作用〔6〕。

研究表明，D-半乳糖致衰老動物模型能夠模擬動物老化過程，能使SOD、GSH-Px活性下降、MDA含量增加〔7〕。SOD因其能分解氧自由基，被稱為人體的“清道夫”。GSH-Px主要依靠其還原作用，從而起到保護(hù)生物酶免受過氧化物損害的作用。MDA是脂質(zhì)氧化分解的產(chǎn)物，其生成的多少可以間接地反映組織損傷程度〔4〕。所以測定SOD、GSH-Px、MDA有助于了解機(jī)體內(nèi)衰老的情況。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桑葚提取液具有提高血清和肝臟中SOD、GSH-Px活性、降低MDA含量的作用。桑葚低劑量治療組在提高SOD、GSH-Px活性方面比桑葚中、高劑量治療組可能要好一些，而在降低MDA含量方面，桑葚高劑量治療組可能要好一些。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果還可以看出，SOD、GSH-Px活性的增高和MDA含量的降低與桑葚提取液的劑量大小還沒有表現(xiàn)出明顯的量-效關(guān)系，桑葚提取液的劑量與抗氧化、抗衰老的效果之間的關(guān)系仍有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

綜上，桑葚提取液具有一定抗氧化、延緩衰老的作用。目前國內(nèi)對桑葚多數(shù)局限在藥理作用的研究上，并未投入實(shí)際的生產(chǎn)應(yīng)用中，如果能將其藥用價值與保健價值相結(jié)合，桑葚的價值就能在更開闊的領(lǐng)域中得到發(fā)揮。

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7雷鳴，朱祖建.D-半乳糖致衰老的研究進(jìn)展〔J〕.解剖科學(xué)進(jìn)展，2011；17(1)：83-5.

〔2014-04-17修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

通訊作者：李朝敢(1963-)，男，教授，主要從事中草藥抗衰老作用研究。

基金項(xiàng)目：2013年度廣西壯族自治區(qū)級大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃立項(xiàng)項(xiàng)目(QJCX201305)

中圖分類號〔〕R285.5〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0036-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.016