紫歸子泡騰栓抑菌作用研究

武靜蓮，姜林芬，胡林海，吳紅梅，胡芳弟，4

（1.甘肅省第三人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅 蘭州 730050；3.嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；4.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

紫歸子泡騰栓抑菌作用研究

武靜蓮1，姜林芬2，胡林海3，吳紅梅2，胡芳弟1，4

（1.甘肅省第三人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省中醫(yī)學(xué)校，甘肅 蘭州 730050；3.嘉峪關(guān)市第一人民醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；4.蘭州大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

目的 研究紫歸子泡騰栓各處方藥配伍組合的抑菌作用。方法 采用瓊脂稀釋法進行抑菌實驗，定量測定紫歸子泡騰栓各處方藥及其配伍組合物抑制白色念珠菌的最低濃度（MIC）以及三味藥的分級（或部分）抑菌濃度指數(shù)（FIC）。結(jié)果 苦豆子、當歸、紫草三味單藥不同配比均具有一定的抑菌作用；苦豆子和當歸的抑菌作用強于紫草；紫草∶當歸∶苦豆子按1∶2∶3配比抗菌作用最強，且FIC指數(shù)≤0.5，說明該配比時表現(xiàn)為抗菌協(xié)同作用。結(jié)論 該實驗研究為紫歸子泡騰栓處方確定提供了理論依據(jù)。

紫歸子泡騰栓；抑菌作用；配伍組合

由于廣譜抗菌素、免疫抑制劑及皮質(zhì)固醇激素的廣泛應(yīng)用，以及老年人群的不斷增長，念球菌所致深部感染日益增多。目前臨床應(yīng)用的抗真菌藥物主要為多烯類抗生素、氨基甲酸脂及咪唑類等。這些藥物療效肯定，但有一些毒性和副作用，高效低毒的藥物極少。近年來，越來越多的藥理實驗證實，部分中草藥具有顯著的抗霉菌作用[1～6]。紫歸子泡騰栓處方中各單藥均有治療婦科炎癥及其抗菌作用的相關(guān)研究報道[5～8]，但尚未見全方抗菌活性的研究報道。本研究以篩選最強抗霉菌活性配比為目標，系統(tǒng)研究了紫歸子泡騰栓處方中當歸、紫草、苦豆子多種配伍組合體外抗白色念珠菌作用。現(xiàn)將初步研究結(jié)果報告如下，以期為開發(fā)用于治療婦科陰道炎癥的藥物提供藥學(xué)研究資料。

1材料與方法

1.1材料

（1）當歸、紫草、苦豆子藥材均購自蘭州市黃河藥市，由蘭州大學(xué)藥學(xué)院周印鎖教授鑒定。

（2）菌種及培養(yǎng)基：白色念珠菌標準菌株，由蘭州大學(xué)微生物病理學(xué)研究所韓儉教授友情提供；沙氏瓊脂培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：HB0235-10 GB/16294-2010，青島高科園海博生物技術(shù)有限公司）；RPMII640培養(yǎng)基（賽默飛世爾生物化學(xué)制品）。

（3）儀器：ZHWY-200B型恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器制造有限公司），LDZX-75KB立式壓力蒸氣滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠），麥氏比濁管（81M294477，上海申源科技有限公司），JJ200型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠），SW-SJ-1D型單人凈化工作臺（滬凈凈化設(shè)備儀器廠）。

1.2方法

1.2.1菌種活化 將供試的菌種移接入相應(yīng)的試管斜面培養(yǎng)基上，置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，取出置于0～4℃冰箱冷藏備用。

1.2.2提取物的制備 當歸、紫草、苦豆子各自的提取物、當歸∶紫草按1∶1混合提取物、當歸：苦豆子按1∶1混合提取物，紫草∶苦豆子按1∶1混合提取物、紫草∶當歸∶苦豆子分別按1∶1∶1、1∶1∶2、1∶1∶3、1∶2∶3配比提取物均由實驗室自制。

1.2.3材料滅菌 無菌水、濾紙片和培養(yǎng)基均采用常規(guī)濕熱滅菌法，玻璃用品采用干熱滅菌法。

1.2.4菌懸液制備 把預(yù)先活化的白色念珠菌制成菌懸液，菌懸液中的白色念珠菌為處于旺盛生長期的營養(yǎng)菌絲。試驗菌種濃度應(yīng)用麥氏比濁法（McFarland Standards）確定濃度，最終配制成濃度為5×108CFU/ml的菌懸液。

1.2.5抗菌效價測定 采用雙倍稀釋法，將各藥液分別加入沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，使其成不同稀釋度（1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256；1∶512；1∶1 024），每管中加真菌液0.2 ml，最終細菌濃度為5×105CFU/ml。35℃孵育18～24 h。觀察各藥的最低抑菌濃度（MIC）。每一種藥液同法操作。同時。另外接種相同體積的真菌液于不含藥物之同樣培養(yǎng)基中作對照，37℃孵育48 h，完全抑制白色念珠菌生長的最高稀釋度為該藥物抗菌效價，每個濃度重復(fù)3份。

2結(jié)果

2.1抑菌濃度

以24 h無霉菌生長的提取液質(zhì)量濃度為最低抑菌質(zhì)量濃度，結(jié)果見表1。

表1 單組分藥物的最低抑菌濃度

由表1可知，苦豆子、當歸和紫草三藥材提取物體外均具有抑菌作用，苦豆子的抑菌作用最好，紫草的抑菌能力弱于當歸和苦豆子。當歸、紫草和苦豆子兩兩配伍后抑菌作用增強，當歸、紫草和苦豆子三味藥配伍時抑菌作用進一步增強。考察增加當歸和苦豆子的配伍量的各組合物的抑菌作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)紫草∶當歸∶苦豆子按1∶2∶3配比時抑菌作用最強。

2.2處方藥物分級（或部分）抑菌濃度指數(shù)（fractional inhibitory concentration，F(xiàn)IC）

通過各單藥最低抑菌體濃度和配伍后最低抑菌濃度，計算FIC，判斷各藥的相互作用。FIC=聯(lián)合用藥時甲藥MIC/單獨應(yīng)用甲藥時MIC+聯(lián)合應(yīng)用乙藥時MIC/單獨應(yīng)用乙藥時MIC，F(xiàn)IC指數(shù)為≤0.5、0.6～1.0、1.1～2.0、＞2時分別表示協(xié)同、相加、無關(guān)、拮抗作用。本實驗計算的各藥的FIC見表2。

表2 各組分配伍藥物的最低抑菌濃度

由表2可知，紫草∶當歸∶苦豆子分別在1∶1∶3和1∶2∶3兩種配比時，F(xiàn)IC指數(shù)均小于0.5，這說明這三味藥具有抗菌協(xié)同作用，且在紫草∶當歸∶苦豆子按1∶2∶3配比時，F(xiàn)IC值為0.08，說明其抗菌協(xié)同作用最強。

3討論

念珠菌是一種最常見的真菌，是條件致病菌。免疫功能低下的病人，如腫瘤病人、器官移植病人、艾滋病病人、身體衰弱的老年人非常容易發(fā)生白色念珠菌感染，如不及時治療可造成死亡。當歸、紫草、苦豆子提取物都有一定的抑菌作用，三味藥的抑菌效果可以通過相互配伍而增強。

長期以來，化學(xué)農(nóng)藥的濫用引發(fā)了一系列的公害問題，如環(huán)境污染、人畜中毒、殺傷天敵、破壞生態(tài)平衡，因此，從植物藥中探尋具有強抗菌性的活性物質(zhì)具有十分重要的意義。甘肅省當歸資源極其豐富，品質(zhì)優(yōu)良，因此利用甘肅豐富的當歸資源開發(fā)天然的抑制白色念珠菌的藥物，具有重要的現(xiàn)實意義。若能對三味藥物中的抗菌活性成分進行進一步的分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定，將會使植物源殺菌劑的研究得到更深一步的拓展，也有望開發(fā)出高活性天然抗菌藥物，為人類健康作出巨大貢獻。

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R285.1

B

1671-1246（2016）23-0108-02

注：本文系甘肅省衛(wèi)生廳2013年資助中醫(yī)藥科研課題（GZK-2012-15）