• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低分子量聚谷氨酸的制備及其在眼科靶向藥物中的應(yīng)用研究

    2016-02-14 02:40:56譚李玉鄔莉娜畢群杰
    當(dāng)代化工 2016年12期
    關(guān)鍵詞:絲裂霉素鈦白粉眼表

    陳 卓,石 蕊,譚李玉,鄔莉娜,畢群杰,夏 銳,張 蕾

    (1. 西安醫(yī)學(xué)院 陜西 西安 710021; 2. 陜西省人民醫(yī)院眼科,陜西 西安 710068)

    低分子量聚谷氨酸的制備及其在眼科靶向藥物中的應(yīng)用研究

    陳 卓1,石 蕊2,譚李玉1,鄔莉娜1,畢群杰1,夏 銳1,張 蕾1

    (1. 西安醫(yī)學(xué)院 陜西 西安 710021; 2. 陜西省人民醫(yī)院眼科,陜西 西安 710068)

    人體角膜難以吸收分子量較大的藥物分子,為了減少高毒藥物治療眼表疾病時經(jīng)角膜吸收導(dǎo)致的眼內(nèi)副作用,設(shè)計了絲裂霉素C的L-聚谷氨酸衍生物高分子前藥。為了減少市售鏈狀大分子聚谷氨酸修飾后,絲裂霉素C被其包纏導(dǎo)致的藥效降低,將市售的L-聚谷氨酸先進(jìn)行定量水解,獲得了一系列較低分子量的L-聚谷氨酸(1~5 k),通過電泳法確證其分子量,并將其應(yīng)用制備了系列低分子量L-聚谷氨酸衍生物高分子絲裂霉素C前藥。

    低分子量聚谷氨酸;前藥;高分子修飾;絲裂霉素C

    聚谷氨酸(polyglutamic acid, PGA)是以枯草芽孢桿菌通過發(fā)酵技術(shù)制備的一種高分子化合物[1]。PGA以其低毒性和免疫原性、高降解性、不易蓄積性在藥學(xué)領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。被廣泛應(yīng)用于緩控釋以及靶向藥物的載體[2]。市售的聚谷氨酸的分子量通常在300~1 000 kDa之間, 陳國廣等報道了分子量在20~60 kDa之間低聚谷氨酸的制備工藝[3]。

    人眼如長期受到外界剌激,如日光、風(fēng)沙、霧霾等,常易在瞼裂部球結(jié)膜引起贅生性病變。首先,贅生生長浸潤角膜可導(dǎo)致角膜曲率改變而引起不同程度的散光、眼球轉(zhuǎn)動障礙、視力下降,嚴(yán)重影響了病人的生活質(zhì)量;其次,贅生組織本身也易引發(fā)反復(fù)發(fā)生的眼紅、磨不適,導(dǎo)致結(jié)膜炎反復(fù)發(fā)生及由此產(chǎn)生的長期治療費(fèi)用;第三,贅生的生長嚴(yán)重影響了病人的眼部外觀。

    在臨床治療時,多采用手術(shù)切除法,但單純術(shù)后極易復(fù)發(fā),其術(shù)后高復(fù)發(fā)率是一個十分棘手的問題,復(fù)發(fā)原因與手術(shù)創(chuàng)傷加快了成纖維細(xì)胞增生有關(guān),復(fù)發(fā)通常發(fā)生于術(shù)后短期時間內(nèi),復(fù)發(fā)組織進(jìn)展快,常較原發(fā)者擴(kuò)大。因此,在治療中必須在術(shù)中、術(shù)后聯(lián)用絲裂霉素C(Mitomycin C , MMC)等高毒性抗代謝藥物[4]。目前沒有其他替代方案。當(dāng)這些高毒藥物眼表施用后極易通過角膜吸收進(jìn)入眼球內(nèi),導(dǎo)致眼內(nèi)組織如晶狀體、玻璃體及視網(wǎng)膜等受損[4]。因此,此類藥物的靶點(diǎn)位于眼表,但其眼內(nèi)副作用則由角膜吸收所導(dǎo)致。

    角膜是保護(hù)眼內(nèi)組織的重要屏障,其屏障作用主要通過分子量限制、極性限制和P蛋白外排作用來實現(xiàn),其中,分子量限制使分子量達(dá)到500以上的化合物難以通過角膜吸收[5]。本課題組將絲裂霉素C與PGA等高分子化合物[6]通過化學(xué)合成的方法制備為高分子前藥,以減少其角膜吸收,從而使其在翼狀胬肉等結(jié)膜、眼表疾病的應(yīng)用中,降低了全眼副作用。

    PGA是多羧基聚合物,其鏈上的羧基使其具有pH響應(yīng)性,在低pH值環(huán)境下,呈直鏈狀;在眼部的生理pH值7.35~7.45下則呈卷曲狀。這時,無論市售的300~1 000 kDa的超聚谷氨酸或20~60 kDa的低聚谷氨酸的修飾的絲裂霉素C將被包纏、遮蓋、空間位阻大,難以被酯酶水解釋放活性代謝物物質(zhì)絲裂霉素C。因此,用于制備眼表靶向前藥的PGA的適宜分子量應(yīng)當(dāng)僅略大于使藥物難以進(jìn)入角膜的500 Da,從而減少對藥物本體的包纏遮蔽。目前,適宜于眼表疾病藥物研究的1至5 kDa之間的低聚谷氨酸及其前藥制備應(yīng)用研究未見文獻(xiàn)報道。

    1 儀器與試劑

    紫外分光光度計為UV-1780型(日本島津制作所);冷凍干燥機(jī)為FD-1000型(日本東京理化株式會社);磁力攪拌低溫槽為PSL-1810型(日本東京理化株式會社);電泳儀為DYCP-31DN型(北京六一)。

    絲裂霉素 C 為化學(xué)純(Sigma-Aldrich);PGA(300~1 000 kDa) 為化學(xué)純(Sigma-Aldrich);Tris試劑(Sigma-Aldrich),瓊脂糖(Sigma-Aldrich)吡啶為分析純(天津科密歐);1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亞胺鹽酸鹽(EDC)為分析純(上海源葉生物科技);N-羥基琥珀酰亞胺為分析純(上海源葉生物科技);水為雙蒸水;透析袋(MWCO 1000及MWCO 5000, 百靈威科技);柱層析所使用薄層硅膠為硅膠H(青島海洋化工);其他常見有機(jī)溶劑、試劑均為分析純,必要時干燥。

    2 低分子量聚谷氨酸的制備研究

    2.1 低分子量聚谷氨酸的制備

    取聚谷氨酸(分子量300~1 000 kDa)20 g,溶于以鹽酸調(diào)節(jié)至~H=1-7的水中,在-10~80 ℃下攪拌8 h;反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)液使用透析袋進(jìn)行分離,截取分子量1 000~5 000的聚谷氨酸,冷凍干燥得到白色固體即為低分子量聚谷氨酸。

    2.2 低聚谷氨酸的制備工藝研究

    2.2.1 產(chǎn)物的純化研究

    透析袋是一種成熟市售的基于滲透壓分子量截留原理對溶液中一定分子量的化合物進(jìn)行分離的產(chǎn)品。

    由于需要1至5 kDa的聚谷氨酸,我們采用雙層透析層的裝置進(jìn)行分離。取直徑29 mm的截留分子量1 000的透析袋作為外層,其中置入直徑11 mm的截留分子量5 000的透析袋為外層。將反應(yīng)液加入內(nèi)袋中,密封上口,將此裝置置于盛有800 mL蒸餾水的燒杯中,室溫攪拌4 d,期間每8 h更換燒杯中蒸餾水一次。透析結(jié)束后將內(nèi)袋提出棄去后,將外袋中液體冷凍干燥即得白色固體聚谷氨酸(分子量1至5 kDa)。采用電泳法測定、驗證產(chǎn)物的分子量。

    2.2.3低聚谷氨酸的制備工藝考察

    由于在產(chǎn)物純化中已將未水解至目標(biāo)分子量的產(chǎn)物及副產(chǎn)物除去,因此通過考察反應(yīng)的質(zhì)量收率即可反映制備工藝情況??疾炝朔磻?yīng)液pH值,溫度兩項指標(biāo)。

    從表1及圖1中 可以看出,最佳水解條件為pH=3,溫度為60 ℃,在這一條件下可以獲得10.1%的收率。

    表1 pH對目標(biāo)分子量低聚谷氨酸制備收率的影響(溫度均為室溫,約20 ℃)Table 1 Effect of pH to the yield of low molecular weight PGA

    圖1 pH對目標(biāo)分子量低聚谷氨酸制備收率的影響Fig.1 Effect of pH to the yield of low molecular weight PGA

    3 低分子量聚谷氨酸-絲裂霉素C的制備

    將低分子量聚谷氨酸1 g加入單口瓶中,加入二氧六環(huán)250 mL、N-羥基琥珀酰亞胺0.61 g、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亞胺鹽酸鹽(EDC)1.03 g和吡啶3 mL,在50 ℃下保溫10 h,蒸去溶劑,剩余物溶于100氯仿,用稀鹽酸10 mL洗滌后,氯仿層蒸干,所得物加至0.03 mol/L HBS緩沖液(pH為7.4)10 mL中,攪拌下加入絲裂霉素C 3.34 g,期間加入 0.5 mol/L 氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液維持pH=7.4;然后攪拌12 h反應(yīng)液后將其濃縮至干,剩余物使用硅膠柱色譜分離(洗脫液為二氯甲烷與甲醇按體積比為10∶1組成的混合物)得黃色至白色產(chǎn)物,即低分子量 L-聚谷氨酸-絲裂霉素 C(圖2)。

    圖2 低分子量聚谷氨酸-絲裂霉素C的制備Fig.2 Preparation of low molecular weight PGA-MMC

    4 討 論

    本研究發(fā)現(xiàn),在制備低分子量聚谷氨酸的水解過程中,酸性有利于水解反應(yīng)的繼續(xù)進(jìn)行。但當(dāng)pH下降至1時,收率反而下降。這可能是因為我們的目標(biāo)分子是1至5 kDa的聚谷氨酸,當(dāng)酸性提高時,水解反應(yīng)的速率過快,更多的聚谷氨酸分子被水解至1 kDa分子量以下的小分子,從而在透析中被透析至外層膜以外除去,使目標(biāo)化合物的收率下降。

    抗癌藥物的一個發(fā)展方向是聚合物治療法。聚合物-藥物偶合物是指將適當(dāng)?shù)木酆衔镙d體、生物可降解的交聯(lián)劑和具有生物學(xué)活性的抗腫瘤藥物結(jié)合起來,這一設(shè)計思路備受人們關(guān)注,并且將很有可能成為新一代抗腫瘤藥物設(shè)計的基礎(chǔ)。

    因此,本研究所獲得的低分子量聚谷氨酸可以應(yīng)用在絲裂霉素 C進(jìn)行修飾,使其可以通過 EPR effect在增生組織中積聚,然后由cathepsin B介導(dǎo)絲裂霉素C的釋放,從而達(dá)到治療作用。而在正常組織中,由于其分子量較大,難以透過角膜進(jìn)入眼內(nèi),從而大幅降低其經(jīng)角膜通路的眼內(nèi)吸收,使其在眼表贅生組織治療的應(yīng)用中,提高藥效、降低全眼副作用。

    [1] Atsuo , Masao K. Biosynthesis and hydrolysis of poly (γ-glutami c acid)from Baci llus subtilis IFO3335 [J]. Biosci Biotech Biochem ,1992, 56(7):1031-1035.

    [2] 陳國廣,陳茂偉,韋萍,等.聚谷氨酸及其衍生物在新型藥物傳輸系統(tǒng)中的應(yīng)用[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2003 , 25(2): 75-78.

    [3] 陳國廣, 張鈞壽, 陳茂偉,等.低分子聚谷氨酸的制備工藝研究[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報,2003 , 34(3): 225-227.

    [4] Rachmiel R, Leiba H, Levartovsky S. Results of treatment with topical mitomycin C 0.02% following excision of primary pterygium[J]. Br J Ophthalmol,1995, 79(3): 233-236.

    [5] 嚴(yán)忠勤, 鐘裕國, 溫玉明. 趨淋巴抗癌藥絲裂霉素-右旋糖酐偶聯(lián)物的合成及生物學(xué)性質(zhì)的研究[J]. 中國藥物化學(xué)雜志, 1999, 4(9): 240-244.

    [6] 陳卓,石蕊,譚李玉,等.聚乙二醇單甲醚偶聯(lián)的絲裂霉素C前藥的合成[J]. 應(yīng)用化工,2015,44(10):1971-1972.

    鈦精礦狂漲鈦白粉傷不起 產(chǎn)業(yè)鏈要互利

    近期鈦精礦價格上漲顯著,又遭攀枝花地區(qū)環(huán)保曝光。目前攀西地區(qū)38品位以上鈦中礦價格在800-850元/噸(不含稅)左右,46品位10鈦精礦價格在1250-1400元/噸(不含稅)間,47品位鈦精礦價格在1100-1200元/噸(不含稅)間。進(jìn)口鈦礦價格新單成交價同樣走高。進(jìn)入10月后至今,鈦精礦價格狂漲以及運(yùn)輸新規(guī)實施帶來的運(yùn)費(fèi)增加,使鈦白粉漲“停不下來”更“傷不起”。

    以攀枝花鈦礦為例,自2013年年初的1500元/噸左右跌至年底的500元/噸,同期2013年上半年金紅石型鈦白粉市場均價約為14500元/左右,2013年年底大約均價為14000元/噸,鈦礦跌價幅度與鈦白粉價格跌幅不成正比。

    2015年國內(nèi)鈦礦基本維持在400-600元/噸之間,可金紅石型鈦白粉市場價格從年初的12500元/噸飛流直下跌破9000元/噸,鈦白粉跌幅與鈦礦價格不成比例。

    2015年金紅石型鈦白粉跌破9000元/噸的情況下,涂料企業(yè)普遍“盆豐缽滿”,據(jù)有關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示,2015年我國涂料行業(yè)平均利潤實現(xiàn)8%-10%的增長。

    產(chǎn)業(yè)鏈?zhǔn)钱a(chǎn)業(yè)價值實現(xiàn)和增值的根本途徑。我們從以上數(shù)據(jù)或可以“略見一斑”,在緊密相關(guān)的產(chǎn)業(yè)鏈上,違背了市場規(guī)律,產(chǎn)業(yè)鏈將會斷裂,如今已經(jīng)不存在暴利時代,暴漲暴跌的年代已經(jīng)過去,產(chǎn)業(yè)鏈中暴漲暴跌一個環(huán)節(jié),或造成“鏈斷”傷不起。

    新常態(tài)下,企業(yè)轉(zhuǎn)型升級是必由之路。鈦白粉產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和轉(zhuǎn)型升級的大環(huán)境下把握機(jī)遇、順勢而為,提升產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)國際先進(jìn)水平,為下游企業(yè)提供“性價比”優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品是發(fā)展的前提,產(chǎn)業(yè)鏈互利是產(chǎn)業(yè)良性發(fā)展的基礎(chǔ),在互利中企業(yè)才能獲得最大效益。

    Preparation of Low Molecular Weight Polyglutamic Acid and Its Application in Targeting Ophthalmic Prodrug

    CHEN Zhuo1, SHI Rui2, TAN Li-yu1, WU Li-na1, BI Qun-jie1, XIA Rui1, ZHANG Lei1

    (1. Xi’an Medical University , Shaanxi Xi’an 710021, China;2. Shaanxi Provincial People’s Hospital, Shaanxi Xi’an 710068, China)

    Large molecular weight drugs cannot be absorbed by human corneas. In order to minimize the side effects caused by absorption into eyeball trough cornea in the application of the highly toxic Mitomycin C in ocular surface diseases, PGA derivative macromolecule prodrug PGA-MMC was designed. To reduce the package wrapping effect on MMC using the chain-like macromolecules modifying such as PGA, which can make the pesticide effect reduce, PGA was first quantitative hydrolyzed to get lower molecular weight PGA(1~5 k).And then series of low molecular weight PGA-MMC was synthesized .

    PGA with lower molecular weight; prodrug; macromolecules modifying; mitomycin C

    R9; TQ463

    A

    1671-0460(2016)12-2787-03

    陜西省教育廳專項科研計劃項目,項目號:15JK1620。

    2016-11-28

    陳卓(1985-),男,陜西西安人,講師,碩士,研究方向:從事藥物化學(xué)研究工作。E-mail:352304625@qq.com。

    猜你喜歡
    絲裂霉素鈦白粉眼表
    硫酸法鈦白粉水洗及水循環(huán)膜處理工藝
    化工管理(2021年7期)2021-05-13 00:46:24
    眼表抗新生血管治療眼紅、眼干和眼澀立竿見影
    短時間電腦屏幕閱讀對大學(xué)生視功能和眼表的影響
    科技視界(2018年33期)2018-02-21 02:30:54
    鈦白粉下游行業(yè)需求復(fù)蘇,進(jìn)口量維持增長
    改良護(hù)眼法對高原地區(qū)眼表感染的輔助治療效果觀察
    小梁切除術(shù)聯(lián)合絲裂霉素C治療青光眼臨床意義探析
    吡柔比星與絲裂霉素膀胱灌注化療防治腺性膀胱炎術(shù)后復(fù)發(fā)的效果比較
    眼表熱化學(xué)燒傷后重度瞼球粘連的療效觀察
    硅油及鈦白粉在聚丙烯膨脹阻燃中的應(yīng)用研究
    中國塑料(2015年1期)2015-10-14 00:58:33
    我國鈦白粉行業(yè)產(chǎn)能過剩的分析及對策
    一级作爱视频免费观看| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲精品av麻豆狂野| 一本大道久久a久久精品| 亚洲成人久久性| avwww免费| 露出奶头的视频| 午夜精品在线福利| 在线av久久热| 黑人操中国人逼视频| 国产成人欧美| 在线天堂中文资源库| 免费观看人在逋| 国产精品偷伦视频观看了| 午夜成年电影在线免费观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲第一青青草原| 久久午夜亚洲精品久久| 看免费av毛片| 午夜视频精品福利| 久久久国产精品麻豆| 欧美成狂野欧美在线观看| 免费av中文字幕在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 黑丝袜美女国产一区| 久久香蕉激情| 国产成人精品久久二区二区免费| 韩国精品一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 午夜两性在线视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 青草久久国产| 午夜免费鲁丝| 999久久久精品免费观看国产| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 免费av中文字幕在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 久久99一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 久久久久久久久中文| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 狂野欧美激情性xxxx| 精品高清国产在线一区| 国产精品亚洲一级av第二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产99久久九九免费精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲成人国产一区在线观看| 日韩高清综合在线| 看免费av毛片| 成人av一区二区三区在线看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品国产一区二区久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲国产精品999在线| 90打野战视频偷拍视频| 性欧美人与动物交配| 精品久久久精品久久久| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 精品一区二区三区av网在线观看| ponron亚洲| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美色视频一区免费| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久精品91无色码中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| 国产成人欧美| 久久久精品欧美日韩精品| 精品无人区乱码1区二区| 免费观看精品视频网站| 黄色 视频免费看| 国产一区二区三区综合在线观看| x7x7x7水蜜桃| 国产精品久久久久成人av| 久久人人精品亚洲av| 欧美激情高清一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美日韩视频精品一区| 午夜日韩欧美国产| 免费少妇av软件| 交换朋友夫妻互换小说| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜福利免费观看在线| 大码成人一级视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费高清视频大片| 女人精品久久久久毛片| 欧美日韩精品网址| 欧美午夜高清在线| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 日本 av在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美黑人欧美精品刺激| 操美女的视频在线观看| 精品福利观看| 国产免费av片在线观看野外av| 久久99一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 妹子高潮喷水视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美中文日本在线观看视频| 午夜激情av网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| www.www免费av| 国产在线精品亚洲第一网站| 午夜免费成人在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 91大片在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 久久久久久久午夜电影 | 天堂影院成人在线观看| 91字幕亚洲| 亚洲人成77777在线视频| e午夜精品久久久久久久| 高清欧美精品videossex| 欧美黑人精品巨大| 国产色视频综合| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美日韩乱码在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 在线观看免费视频日本深夜| 黄色视频不卡| 99久久综合精品五月天人人| 麻豆成人av在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久中文看片网| 久久中文字幕一级| 校园春色视频在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜久久久在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲,欧美精品.| 欧美成狂野欧美在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 午夜影院日韩av| 夜夜爽天天搞| 国产成人免费无遮挡视频| 无遮挡黄片免费观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| av电影中文网址| 动漫黄色视频在线观看| 青草久久国产| 国产在线观看jvid| 婷婷六月久久综合丁香| 色在线成人网| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产黄色免费在线视频| 国产成人啪精品午夜网站| 手机成人av网站| 在线观看一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| √禁漫天堂资源中文www| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲一区二区三区不卡视频| 99国产精品一区二区三区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 日本vs欧美在线观看视频| 日本wwww免费看| 成人手机av| 成年人黄色毛片网站| 在线观看午夜福利视频| 国产精品久久视频播放| 久9热在线精品视频| 久久久国产成人免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 一级毛片精品| 啦啦啦在线免费观看视频4| 色综合婷婷激情| 免费观看精品视频网站| 中文字幕高清在线视频| 午夜91福利影院| 91精品国产国语对白视频| 又黄又粗又硬又大视频| ponron亚洲| 18禁国产床啪视频网站| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久这里只有精品19| 一级毛片高清免费大全| 一级a爱视频在线免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲人成77777在线视频| 在线观看日韩欧美| 国产高清videossex| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 色婷婷av一区二区三区视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲成人免费av在线播放| 麻豆av在线久日| 精品高清国产在线一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产精品综合久久久久久久免费 | 天堂俺去俺来也www色官网| 成在线人永久免费视频| 国产高清国产精品国产三级| 村上凉子中文字幕在线| 一进一出抽搐动态| 女性被躁到高潮视频| 国产精品二区激情视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 乱人伦中国视频| www.www免费av| 亚洲国产欧美网| 在线视频色国产色| videosex国产| 亚洲精华国产精华精| 人妻久久中文字幕网| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久国产精品麻豆| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 精品国内亚洲2022精品成人| 日韩中文字幕欧美一区二区| 在线永久观看黄色视频| 欧美在线一区亚洲| 99久久综合精品五月天人人| av天堂久久9| 亚洲专区字幕在线| 亚洲精品在线美女| 亚洲国产看品久久| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久国产成人精品二区 | 午夜亚洲福利在线播放| 两人在一起打扑克的视频| 精品国产国语对白av| 日韩精品青青久久久久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久人人精品亚洲av| 亚洲av电影在线进入| 成人18禁在线播放| 国产在线观看jvid| 人人妻人人澡人人看| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 露出奶头的视频| 正在播放国产对白刺激| 一区福利在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 精品久久久精品久久久| 午夜福利免费观看在线| 啦啦啦在线免费观看视频4| 午夜福利一区二区在线看| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 免费搜索国产男女视频| a级毛片黄视频| 十八禁网站免费在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 美女国产高潮福利片在线看| 在线永久观看黄色视频| 久久午夜亚洲精品久久| 91老司机精品| 一级毛片精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 老熟妇仑乱视频hdxx| 在线观看一区二区三区激情| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 水蜜桃什么品种好| 午夜两性在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 一级片'在线观看视频| 97人妻天天添夜夜摸| 国产av一区二区精品久久| 中国美女看黄片| 看免费av毛片| av天堂在线播放| 亚洲av熟女| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 波多野结衣一区麻豆| 在线观看免费高清a一片| 波多野结衣高清无吗| 午夜亚洲福利在线播放| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲专区国产一区二区| 91精品三级在线观看| 视频区图区小说| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲av美国av| 9色porny在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产单亲对白刺激| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一边摸一边抽搐一进一小说| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 在线看a的网站| 亚洲av成人一区二区三| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美日韩福利视频一区二区| 激情视频va一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 中文字幕精品免费在线观看视频| 极品教师在线免费播放| 中文字幕高清在线视频| 久久久久久大精品| 在线国产一区二区在线| 久久香蕉国产精品| 在线播放国产精品三级| www.自偷自拍.com| 亚洲人成电影观看| 成人影院久久| svipshipincom国产片| 九色亚洲精品在线播放| 日韩三级视频一区二区三区| 成人三级做爰电影| 动漫黄色视频在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文欧美无线码| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产一区二区激情短视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜视频精品福利| 国产精品国产av在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产成人欧美| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久久久人人人人人| 日日爽夜夜爽网站| 免费不卡黄色视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产色视频综合| 久久精品91蜜桃| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产精品影院| 一级片免费观看大全| 日韩精品中文字幕看吧| 高清黄色对白视频在线免费看| 老司机亚洲免费影院| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 波多野结衣一区麻豆| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久久久久久久大奶| 9热在线视频观看99| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 欧美乱色亚洲激情| 国产亚洲精品久久久久5区| 美国免费a级毛片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 一本综合久久免费| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩精品青青久久久久久| 99久久国产精品久久久| 色在线成人网| 老司机福利观看| 日本 av在线| √禁漫天堂资源中文www| 国产蜜桃级精品一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲精品久久午夜乱码| 成年人免费黄色播放视频| 91老司机精品| 国产三级黄色录像| 久久精品国产综合久久久| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲国产欧美网| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 成人国语在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品乱码久久久久久99久播| av国产精品久久久久影院| 老汉色av国产亚洲站长工具| 美女福利国产在线| 久久人妻熟女aⅴ| 岛国在线观看网站| 视频在线观看一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99久久国产精品久久久| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产高清国产精品国产三级| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产高清videossex| 国产精品国产av在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 天堂√8在线中文| 色综合婷婷激情| 叶爱在线成人免费视频播放| 又黄又爽又免费观看的视频| 电影成人av| 在线观看www视频免费| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品野战在线观看 | 黄色视频,在线免费观看| 国产午夜精品久久久久久| 日本wwww免费看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 大型黄色视频在线免费观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 最新在线观看一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99国产综合亚洲精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 午夜福利在线观看吧| 午夜91福利影院| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 丝袜在线中文字幕| 亚洲九九香蕉| 国产激情久久老熟女| 波多野结衣av一区二区av| 国产熟女午夜一区二区三区| 一级黄色大片毛片| www.www免费av| 黄色成人免费大全| 免费人成视频x8x8入口观看| av电影中文网址| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品久久久久久久久久免费视频 | 亚洲国产看品久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产99久久九九免费精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 人妻久久中文字幕网| 成人国产一区最新在线观看| 国产成人影院久久av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99热国产这里只有精品6| 国产亚洲精品一区二区www| 一进一出好大好爽视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日韩免费高清中文字幕av| 99热只有精品国产| 欧美中文综合在线视频| 在线观看一区二区三区激情| 一区二区三区精品91| 岛国在线观看网站| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲欧美精品综合久久99| 91字幕亚洲| 在线观看免费日韩欧美大片| 久热爱精品视频在线9| 久久久久久大精品| 黄色a级毛片大全视频| 国产成人系列免费观看| 在线观看午夜福利视频| 男男h啪啪无遮挡| 少妇 在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产不卡一卡二| 波多野结衣一区麻豆| 精品国产亚洲在线| 国产亚洲精品久久久久5区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品人妻在线不人妻| 国产区一区二久久| 91字幕亚洲| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产1区2区3区精品| 亚洲久久久国产精品| 国产av一区在线观看免费| 国产av在哪里看| 操出白浆在线播放| 黄色成人免费大全| av在线天堂中文字幕 | 亚洲国产欧美网| 88av欧美| 国产人伦9x9x在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 性欧美人与动物交配| 黄色 视频免费看| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久久久久人人人人人| 久久九九热精品免费| 亚洲中文字幕日韩| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线观看舔阴道视频| 在线天堂中文资源库| 黄色a级毛片大全视频| 国产欧美日韩一区二区三| 日本三级黄在线观看| 在线观看一区二区三区| 大码成人一级视频| 波多野结衣av一区二区av| 中出人妻视频一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 性欧美人与动物交配| 免费av毛片视频| 国产精品野战在线观看 | 午夜两性在线视频| 精品无人区乱码1区二区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 可以在线观看毛片的网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产亚洲av高清不卡| 视频区图区小说| 一区二区日韩欧美中文字幕| 丁香六月欧美| 久久中文字幕一级| 少妇 在线观看| 人人妻人人澡人人看| 午夜福利欧美成人| 怎么达到女性高潮| 欧美激情高清一区二区三区| 久久精品91蜜桃| e午夜精品久久久久久久| av视频免费观看在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 少妇的丰满在线观看| 午夜福利,免费看| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久国产成人免费| 搡老岳熟女国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产成人精品在线电影| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 免费在线观看影片大全网站| 十分钟在线观看高清视频www| 99热只有精品国产| 岛国在线观看网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲视频免费观看视频| av电影中文网址| 香蕉国产在线看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产一区二区激情短视频| 国产精品国产高清国产av| 午夜免费激情av| 久久国产乱子伦精品免费另类| 黄色a级毛片大全视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲全国av大片| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产亚洲av高清不卡| 久久九九热精品免费| 91字幕亚洲| 夜夜夜夜夜久久久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩有码中文字幕| 高清在线国产一区| 最好的美女福利视频网| 青草久久国产| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男人操女人黄网站| 成人av一区二区三区在线看| 热99re8久久精品国产| 国产在线观看jvid| 美女扒开内裤让男人捅视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 一级毛片女人18水好多| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 中文字幕高清在线视频| а√天堂www在线а√下载| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久久久九九精品影院| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一级a爱片免费观看的视频|