芩紅奶牛乳房灌注液提取工藝研究

孫宏冉，楊海明，陳志強(qiáng)，尚靜雪

(內(nèi)蒙古華天制藥有限公司，內(nèi)蒙古赤峰市，024070)

芩紅奶牛乳房灌注液提取工藝研究

孫宏冉，楊海明，陳志強(qiáng)*，尚靜雪

(內(nèi)蒙古華天制藥有限公司，內(nèi)蒙古赤峰市，024070)

為了確定芩紅奶牛乳房灌注液的最佳提取工藝，通過設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，篩選較適宜的溶媒、加水量、提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)等。確定了芩紅奶牛乳房灌注液的最佳提取工藝，為芩紅奶牛乳房灌注液的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

芩紅奶牛乳房灌注液；提取工藝；正交試驗(yàn)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的發(fā)展，人民對(duì)生活質(zhì)量的追求越來越高，對(duì)食品安全也更加關(guān)注。因此，乳業(yè)生產(chǎn)中對(duì)乳品質(zhì)量控制更加嚴(yán)格，特別是抗生素殘留是乳品檢驗(yàn)的內(nèi)容之一[1]。奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最大的疾病之一，對(duì)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)造成巨大損失。治療奶牛乳房炎經(jīng)常使用的是抗生素類藥物，雖見效較快，但大量及頻繁使用抗生素造成藥物殘留，影響乳品的質(zhì)量，并誘導(dǎo)耐藥菌的產(chǎn)生[2]。因此，亟待尋求健康、綠色和無藥物殘留的奶牛乳房炎治療方法。中藥含有多種具有抗炎免疫等生物活性的藥物，且毒副作用較小、殘留少、并具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用，被廣泛應(yīng)用于奶牛乳房炎防治[3]。

根據(jù)中獸醫(yī)理論，奶牛乳房炎主要有乳房紅、腫、熱、痛等證候，可采用清熱解毒、通經(jīng)活血、活絡(luò)通乳等治療原則[4]，可采用清熱解毒藥和活血通經(jīng)類藥物，用輔助藥物以補(bǔ)益、理氣，以扶正祛邪、補(bǔ)氣升陽，以達(dá)到治療奶牛乳房炎的目的[5]。本研究依據(jù)中獸醫(yī)辨證論治理論，參照中獸醫(yī)經(jīng)典方劑，擬定以黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)和紅花(CarthamustinctoriusL.)為君藥，金銀花(LonicerajaponicaThunb.)和蒲公英(TaraxacummongolicumHand.-Mazz.)為臣藥的中藥復(fù)方。

灌注劑是乳房?jī)?nèi)藥物注射方劑，直接給藥起效更快，而且減少全身毒副作用，所以，灌注劑是比較理想的治療奶牛乳房炎的劑型[6]。中藥提取是中藥制劑的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，影響著最終藥物制劑的質(zhì)量和成本，以及中藥制藥業(yè)的現(xiàn)代化水平[7]。本研究擬采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素試驗(yàn)結(jié)合的方法，結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)，選擇較適宜的溶媒、加水量、提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)等，確定芩紅奶牛乳房灌注液的最佳提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 中藥材 黃芩(批號(hào)為WT20150268，規(guī)格為50kg/袋)；紅花(批號(hào)為WT20150264，規(guī)格為50kg/袋)；金銀花(批號(hào)為WT20150263，規(guī)格為50kg/袋)；蒲公英(批號(hào)為WT20150281，規(guī)格為50kg/袋)。以上藥材均由甘肅蒙吉藥業(yè)科技有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 試劑 甲醇、乙腈，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；冰醋酸、NaOH、無水乙醇，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司生產(chǎn)；磷酸，沈陽市華東試劑廠生產(chǎn)。

1.1.3 對(duì)照品 黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)為27HQ-2MM4，規(guī)格為20 mg，93.3%)、羥基紅花黃色素A對(duì)照品(批號(hào)為B8VC-RY8L，規(guī)格為20 mg，96.5%)、咖啡酸對(duì)照品(批號(hào)為X5CL-9XL1，規(guī)格為40 mg，97.3%)，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；綠原酸對(duì)照品(批號(hào)為Z0261407，規(guī)格為20 mg，97.3%)，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(型號(hào)為L(zhǎng)C-2010CHT)，日本島津公司生產(chǎn)；色譜柱(型號(hào)為4.6 mm×150 mm，5 μ)，日本島津公司生產(chǎn)；集熱式磁力加熱攪拌器(型號(hào)為DF-101S)，金壇市瑞華儀器有限公司生產(chǎn)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(型號(hào)為RE52-99)，循環(huán)水式真空泵(型號(hào)為SHZ-Ⅲ)，上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)。

2 方法

2.1 提取工藝

2.1.1 黃芩 根據(jù)黃芩苷的性質(zhì)，選擇水作為提取溶媒，設(shè)計(jì)L8(27)正交試驗(yàn)，優(yōu)選黃芩藥材的提取工藝。考察因素有提取加水量(A)、提取次數(shù)(B)、提取時(shí)間(C)、溶解沉淀加水量(D)、調(diào)堿pH(E)和保溫時(shí)間(F)，以黃芩苷得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，因素水平如表1。

表1 黃芩提取工藝因素水平表

2.1.2 紅花 溶媒的選擇取紅花3組各15 g，分別加入225 mL水、225 mL 30%乙醇和225 mL 50%乙醇，分別98℃提取2次，每次1.5 h，藥液分別減壓濃縮至50 mL，高效液相色譜法測(cè)定紅花黃色素含量確定合適溶媒。

提取工藝的選擇根據(jù)試驗(yàn)前單因素試驗(yàn)考察的結(jié)果，設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，優(yōu)選紅花藥材的提取工藝?？疾煲蛩赜刑崛〖铀?A)、提取溫度(B)、提取次數(shù)(C)、每次提取時(shí)間(D)，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，提取液均濃縮至50 mL，以提取液中羥基紅花黃色素A的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，因素水平如表2。

表2 紅花提取工藝因素水平表

2.1.3 金銀花 溶媒的選擇和提取工藝方法同2.1.2，提取液均濃縮至100 mL，以提取液中綠原酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.1.4 蒲公英 溶媒的選擇和提取工藝方法同2.1.2，提取液均濃縮至50 mL，以提取液中咖啡酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.2 有效成分含量檢測(cè)方法

2.2.1 黃芩苷含量測(cè)定 色譜條件流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸(50:50:1)；流速為1 mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣量為10 μL；運(yùn)行時(shí)間為30 min。

標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取黃芩苷對(duì)照品100.55 mg，溶于50%甲醇中并定容至100 mL制成對(duì)照品溶液母液，分別吸取母液3、4、5、6和7 mL，加50%甲醇定容至25 mL，制成濃度分別為98.10、130.80、163.49、196.19和228.89 μg /mL的供試品溶液，按上述色譜條件分別測(cè)定5種濃度供試品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

供試品溶液的制備取按正交試驗(yàn)方法提取的黃芩苷粉末，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加50%甲醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾即得。

含量測(cè)定按上述色譜條件分別測(cè)定9個(gè)黃芩苷樣品中黃芩苷的含量。

2.2.1 羥基紅花黃色素A含量測(cè)定 色譜條件流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸(26:2:72)；流速為1 mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為403 nm；進(jìn)樣量為10 μL；運(yùn)行時(shí)間為30分鐘。

標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取羥基紅花黃色素對(duì)照品5.03 mg，溶于25%甲醇并定容至25 mL制成對(duì)照品溶液母液，分別吸取母液1、3、5、7和8 mL，加25%甲醇定容至25 mL，制成濃度分別為7.77、23.30、38.83、54.36和62.13 μg/mL的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件分別測(cè)定5種濃度對(duì)照品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

供試品溶液的制備取按正交試驗(yàn)方法提取的紅花提取液，分別吸取1 mL，置于50 mL容量瓶中，加25%甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾即得。

含量測(cè)定按上述色譜條件分別測(cè)定9個(gè)紅花樣品中羥基紅花黃色素的含量。

2.2.3 綠原酸含量測(cè)定 色譜條件流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸(20∶80∶1)；流速為1 mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為324 nm；進(jìn)樣量為10 μL；運(yùn)行時(shí)間為30 min。

標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取綠原酸對(duì)照品10.68 mg，溶于水中并定容至25 mL制成對(duì)照品溶液母液，分別吸取母液1、3、5、7和8 mL，加水定容至50 mL，制成濃度分別為16.63、49.88、83.13、116.39和133.01 μg/mL的供試品溶液，按上述色譜條件分別測(cè)定5種濃度對(duì)照品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

供試品溶液的制備取按正交試驗(yàn)方法提取的金銀花提取液，分別吸取1 mL，置于50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾即得。

含量測(cè)定按上述色譜條件分別測(cè)定9個(gè)金銀花樣品中綠原酸的含量。

2.2.4 咖啡酸含量測(cè)定 色譜條件流動(dòng)相為甲醇-磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56 g，加水使溶解成1000 mL，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.8～4.0，即得)(23:77)；流速為1 mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為323 nm；進(jìn)樣量為10 μL；運(yùn)行時(shí)間為30分鐘。

標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取咖啡酸對(duì)照品6.28 mg，溶于甲醇中并定容至50 mL制成對(duì)照品溶液母液，分別吸取母液3、4、5、6和7 mL，加甲醇定容至25 mL，制成濃度分別為15.06、20.08、25.10、30.12和35.14 μg/mL的供試品溶液，按上述色譜條件分別測(cè)定5種濃度對(duì)照品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

供試品溶液的制備取按正交試驗(yàn)方法提取的蒲公英提取液，分別吸取5 mL，置于50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾即得。

含量測(cè)定按上述色譜條件分別測(cè)定9個(gè)蒲公英樣品中咖啡酸的含量。2.3 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用“正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)助手ⅡV3.1”設(shè)計(jì)正交表，并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

3 結(jié)果

3.1 芩紅奶牛乳房灌注液的回歸方程和線性關(guān)系

芩紅奶牛乳房灌注液的4種成分的回歸方程和線性關(guān)系見表3。

表3 芩紅奶牛乳房灌注液4種成分的回歸方程和線性關(guān)系

3.2 芩紅乳房灌注液溶媒選擇結(jié)果 溶媒選擇結(jié)果表明，芩紅灌注液中3種中藥用3種溶媒提取有效成分含量差異不大，雖然30%或50%乙醇提取的效果稍好，但提取液較渾濁，而且濃縮時(shí)產(chǎn)生大量氣泡，影響濃縮效率，另外，考慮生產(chǎn)中的經(jīng)濟(jì)因素和安全因素，3種中藥均選擇用水做溶媒。

3.3 黃芩提取正交試驗(yàn)結(jié)果 黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果見圖1。

A.黃芩苷對(duì)照品溶液；B.黃芩苷溶液圖1 黃芩苷HPLC圖

因素A加水量/倍B提取次數(shù)/次C提取時(shí)間/hD溶解沉淀加水量/倍E調(diào)堿pHF保溫時(shí)間/hG空列黃芩苷純品質(zhì)量/g1821．566．5～7．00．510．6132821．587．0～7．5120．662383266．5～7．0121．824483287．0～7．50．511．5395102267．0～7．50．521．1136102286．5～7．0111．37171031．567．0～7．5111．40181031．586．5～7．00．521．501均值11．1590．9401．0441．2381．3271．1921．231均值21．3461．5661．4621．2681．1791．3151．275極差0．1870．6260．4180．0300．1480．1230．044主次順序B>C>A>E>F>D優(yōu)水平A2B2C2D2E1F2優(yōu)組合A2B2C2D2E1F2

表5 黃芩提取工藝的方差分析結(jié)果

F比大于F臨界值即為該因素影響顯著。

由表4直觀分析可知，各因素對(duì)黃芩提取效率影響主次順序?yàn)锽>C>A>E>F>D，即提取次數(shù)影響最大，其次是提取時(shí)間和加水量，調(diào)堿pH、保溫時(shí)間和溶解沉淀加水量對(duì)提取效果影響較??；黃芩最佳提取工藝為A2B2C2D2E1F2，即加10倍水，提取3次，每次2 h，溶解沉淀加8倍量水，加20%NaOH調(diào)pH至6.5～7.0，酸沉?xí)r保溫時(shí)間為1 h；由表5方差分析結(jié)果可知，提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)黃芩提取效果具有顯著的影響。

3.4 紅花含量測(cè)定結(jié)果 羥基紅花黃色素A含量測(cè)定結(jié)果見圖2。

A.羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液；B.紅花提取液。圖2 紅花提取液HPLC圖

因素A加水量/倍B提取溫度/℃C提取次數(shù)/次D提取時(shí)間/h羥基紅花黃色素A含量/(mg·mL-1)11060112．0582108021．53．50931098323．59441560224．24651580314．3776159811．52．4747186031．55．16781880123．11691898214．049均值13．0543．8242．5493．495均值23．6993．6673．9353．717均值34．1113．3724．3793．652極差1．0570．4521．830．222主次順序C>A>B>D優(yōu)水平A3B1C3D2優(yōu)組合A3B1C3D2

表7 紅花提取工藝的方差分析結(jié)果

F比大于F 0.01臨界值即為該因素影響極顯著，F(xiàn)比大于F0.05臨界值即為該因素影響顯著。

根據(jù)表6直觀分析可知，各因素對(duì)紅花提取效率影響主次順序?yàn)镃>A>B>D，即提取次數(shù)影響最大，其次是加水量，提取溫度和每次提取時(shí)間對(duì)提取效果影響較小；紅花最佳提取工藝為A3B1C3D2，即18倍水，60℃提取，提取3次，每次1.5 h；由表7方差分析結(jié)果可知，加水量和提取次數(shù)對(duì)紅花提取效果的影響顯著。

3.5 金銀花含量測(cè)定結(jié)果 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果見圖3。

A.綠原酸對(duì)照品溶液；B.金銀花提取液圖3 金銀花提取液HPLC圖

因素A加水量/倍B提取溫度/℃C提取次數(shù)/次D提取時(shí)間/h綠原酸含量/(mg·mL-1)111112．461212224．003313334．371421234．479522314．984623123．093731324．876832133．322933214．585均值13．6123．9392．9594．01均值24．1854．1034．3563．991均值34．2614．0164．7444．057極差0．6490．1641．7850．066主次順序C>A>B>D優(yōu)水平A3B2C3D3優(yōu)組合A3B2C3D3

表9 金銀花提取工藝的方差分析結(jié)果

F比大于F0.01臨界值即為該因素影響極顯著，F(xiàn)比大于F0.05臨界值即為該因素影響顯著。

根據(jù)表8直觀分析可知，各因素對(duì)金銀花提取效率影響主次順序?yàn)镃>A>B>D，即提取次數(shù)影響最大，其次是加水量，提取溫度和每次提取時(shí)間對(duì)提取效果影響較??；金銀花最佳提取工藝為A3B2C3D3，即18倍水，80℃提取，提取3次，每次2 h；由表9方差分析結(jié)果可知，加水量和提取次數(shù)對(duì)紅花提取效果的影響極顯著。3.6 蒲公英測(cè)定結(jié)果 咖啡酸含量測(cè)定結(jié)果見圖4。

圖4 蒲公英提取液HPLC圖A.咖啡酸對(duì)照品溶液；B.金銀花提取液

因素加水量/倍提取溫度/℃提取次數(shù)/次提取時(shí)間/h咖啡酸含量/(mg·mL-1)111110．001212220．092313330．315421230．233522310．118623120．161731320．285832130．08933210．203均值10．1360．1730．0810．107

續(xù)表

表11 蒲公英提取工藝的方差分析結(jié)果

根據(jù)表10直觀分析可知，各因素對(duì)蒲公英提取效率影響主次順序?yàn)镃>B>D>A，即提取次數(shù)影響最大，其次是提取溫度，提取時(shí)間和加水量對(duì)提取效果影響較?。唤疸y花最佳提取工藝為A3B3C3D3，即18倍水，98℃提取，提取3次，每次2 h。由表11方差分析結(jié)果可知，各因素對(duì)蒲公英提取效果的影響均不顯著。

3.7 工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果篩選的工藝條件，對(duì)芩紅乳房灌注液的4種藥材分別進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)。以最佳工藝進(jìn)行提取，黃芩苷的含量約4.826 mg/mL，咖啡酸的含量約為為1.499 g/30 g，羥基紅花黃色素A的含量約為4.569 mg/mL，綠原酸含量約為0.320 mg/mL。正交試驗(yàn)所得結(jié)論符合實(shí)際提取結(jié)果，且結(jié)果穩(wěn)定可靠。

4 討論與小結(jié)

4.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇 浸出物是中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，浸出物中有效成分含量的變化最終影響藥物的臨床療效。芩紅乳房灌注液主要用于治療奶牛乳房炎，具有化瘀止痛、消腫通乳的功效，黃芩苷為方中君藥黃芩的主要成分，具有抑菌、抗炎等功效[8]；紅花黃色素A為方中君藥紅花藥理功效的最有效水溶性部位，可抑制血小板激活因子誘發(fā)的血小板聚集與釋放，可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制血小板激活因子與血小板受體的結(jié)合，是紅花黃色素的活血化瘀有效成分[9]；綠原酸是金銀花的主要抗菌、抗病毒有效藥理成分之一；蒲公英中的咖啡酸具有抗氧化、抗炎的功效。因此，本研究中考察的4種指標(biāo)，均為芩紅乳房灌注液中治療奶牛乳房炎的有效成分，且含量均較高。

4.2 正交因素與水平的選擇 中藥的浸提時(shí)間主要取決于：①浸提熱力學(xué)因素，每次浸提能達(dá)到或接近浸提熱力學(xué)的平衡點(diǎn)，而達(dá)到平衡點(diǎn)需要一定的時(shí)間[10]；②浸出成分的化學(xué)穩(wěn)定性，如果浸出成分的化學(xué)穩(wěn)定性差，有可能在浸出過程中尚未達(dá)到平衡點(diǎn)就已經(jīng)發(fā)生化學(xué)變化，化學(xué)穩(wěn)定性差的成分在浸提時(shí)不允許提取時(shí)間太長(zhǎng)；③浸出產(chǎn)品生產(chǎn)的時(shí)空因素，在化學(xué)成分穩(wěn)定性良好的情況下，浸提時(shí)間也不能無限制的增加，要有效的利用裝置的空間和時(shí)間得到最大的產(chǎn)出，所以在提取時(shí)間水平的選擇上，選擇1、1.5和2 h。

中藥浸提過程中，要通過提高浸提溫度，提高分子的運(yùn)動(dòng)速度，較快的達(dá)到熱力學(xué)平衡點(diǎn)，但浸提溫度對(duì)藥材中熱敏性物質(zhì)可能會(huì)有影響，如果溫度過高可能會(huì)影響其穩(wěn)定性。因此，在浸提工藝中要選擇合適的浸提溫度[11]。本研究中分別設(shè)置60℃、80℃和98℃(沸騰)3個(gè)水平，研究結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A[12]和綠原酸[13]對(duì)熱較敏感，最佳提取溫度分別為60℃和80℃。

理論上，浸提次數(shù)越多，有效成分的浸出率越高，研究表明，次數(shù)愈靠后的浸提，該次浸提的收率愈低，所以考慮到成本，本研究設(shè)置1、2和3次3個(gè)水平。研究結(jié)果表明，浸提次數(shù)對(duì)提取效果的影響較大，故芩紅乳房灌注液中4種中藥的提取均采用3次提取。

溶劑倍量越大，達(dá)到浸出平衡時(shí)的藥材浸出得率越高，考慮到成本等因素，本研究設(shè)置10倍、15倍和18倍加水量3個(gè)水平。

4.3 小結(jié) 本研究通過正交試驗(yàn)確定4味中藥的提取工藝，黃芩最佳提取工藝為A2B2C2D2E1F2，即加10倍水，提取3次，每次2 h，溶解沉淀加8倍量水，加20%NaOH調(diào)PH至6.5～7.0，酸沉?xí)r保溫時(shí)間為1 h；紅花最佳提取工藝為18倍水，60℃提取3次，每次15 h；金銀花最佳提取工藝為18倍水，80℃提取3次，每次2 h；蒲公英最佳提取工藝為18倍水，98℃提取3次，每次2 h。芩紅奶牛乳房灌注液提取工藝的研究為其規(guī)模生產(chǎn)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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(編輯：陳希)

Study on Extraction Technology of Qinhong Breast Perfusion in Cow

SUN Hong-ran, YANG Hai-ming, CHEN Zhi-qiang*, SHANG Jing-xue

(InnerMongoliaAlexHuaTianPharmaceuticalCo.,Ltd.InnerMongolia,Chifeng024070,China)

This paper preparated to confirm the best extraction process of Qinhong breast perfusion in cow. This research through the orthogonal experiment, the optimum choice appropriate solvent, the amount of water, extraction temperature, extraction time, extraction times, determined the best extraction process of Qinhong breast perfusion in cow.These tests laied the foundation for production and clinical application of Qinhong breast perfusion in cow.

Qinhong breast perfusion in cow;extraction technology; orthogonal test

孫宏冉，碩士研究生，從事中藥制劑方面研究。

陳志強(qiáng)。E-mail：zhq_chen@163.com

2016-06-28

A

1002-1280 (2016) 09-0026-08

S853.7