Coulter LH750血細胞分析儀有核紅細胞報警分析

章梅英

Coulter LH750血細胞分析儀有核紅細胞報警分析

章梅英

血細胞分析儀；有核紅細胞；血涂片鏡檢

有核紅細胞（nucleated red blood cell，NRBC）是骨髓紅系造血系統(tǒng)釋放到外周血中的幼稚紅細胞（外周血以中、晚幼紅為主）。除新生兒、胎兒外，正常人外周血中不會出現(xiàn)NRBC，常見于溶血性貧血、急、慢性白血病、紅白血病、髓外造血及嚴重缺氧等患者的病理性外周血涂片中[1]。Coulter LH750全自動血液分析儀通過體積激光三維技術(shù)（VCS）從體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)及顆粒狀況區(qū)分細胞類型并結(jié)合電阻抗法，實現(xiàn)對NRBC的自動化計數(shù)。我們通過分析Coulter LH750全自動血液分析儀NRBC報警與血涂片染色人工鏡檢計數(shù)結(jié)果進行比較，對NRBC自動化檢測的可靠性進行了評價。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集紹興上虞區(qū)人民醫(yī)院2015年7月—2015年9月，通過Coulter LH750全自動血液分析儀“CBC+DIFF”模式自動化檢測有NRBC報警的293例住院患者的血常規(guī)標本,男性176例，女性117例，年齡1.0天～92.0歲；其中成人組228例，年齡18～55歲，平均（31.97±11.54）歲;嬰兒組65例，年齡1～12個月，平均（4.28±3.67）個月.

1.2 儀器與試劑 美國 Beckman Coulter公司LH750型全自動血液分析儀及其配套試劑；日本OLYMPUS公司光學顯微鏡；EDTA-K2抗凝真空管。瑞氏染液及緩沖液按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[2]配制。

1.3 方 法

1.3.1 血細胞分析儀法 真空管采血1.8mL，于2h內(nèi)按照Coulter LH750的操作規(guī)程上機檢測，記錄NRBC報警的樣本信息、血紅蛋白（HGB）參數(shù)及提示。

1.3.2 血涂片鏡檢計數(shù)法 取儀器法NRBC報警的標本按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》制備血涂片，行瑞氏染色15min后進行顯微鏡鏡檢，計數(shù)100～200個白細胞時檢到的NRBC數(shù)，以XXNRBC/100WBC格式報告，此標本的白細胞計數(shù)結(jié)果通過校正公式予以校正后報告。

1.4 結(jié)果判斷 以儀器自動化檢測NRBC報警為儀器檢測陽性，血涂片鏡檢檢到NRBC為鏡檢陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，陽性符合率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 儀器提示NRBC陽性報警與鏡檢陽性結(jié)果符合率比較 根據(jù)NRBC自動化檢測計數(shù)值不同，將293例儀器報警結(jié)果分為低值（0＜NRBC≤2）、中值（2＜NRBC≤4）和高值（NRBC＞4）三組。高值組儀器檢測和血涂片鏡檢的陽性符合率與其余兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=18.58，P＜0.01），中、低值組間差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.091，P＞0.05），見表1。

表1 儀器提示NRBC陽性報警與鏡檢陽性結(jié)果符合率比較（例）

2.2 年齡因素對NRBC儀器檢測和血涂片鏡檢陽性符合率的影響 成人組儀器檢測NRBC陽性228例，血涂片鏡檢陽性119例，陽性符合率52.2%；嬰兒組儀器檢測NRBC陽性65例，血涂片鏡檢陽性41例，陽性符合率63.1%，兩組陽性符合率差異無統(tǒng)計學意義（χ2=2.42，P＞0.05）。

2.3 血紅蛋白（HGB）對NRBC儀器檢測與血涂片鏡檢陽性符合率的影響 根據(jù)HGB值將293例標本分為HGB≥90g/L和HGB＜90g/L兩組，HGB≥90g/L組儀器檢測NRBC陽性137例，血涂片鏡檢陽性56例，陽性符合率40.9%；HGB＜90g/L組儀器檢測NRBC陽性156例，血涂片鏡檢陽性104例，陽性符合率66.7%；二者儀器檢測和血涂片鏡檢的陽性符合率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=13.48，P＜0.01）。

3 討論

除部分新生兒外周血中可有少量有核紅細胞出現(xiàn)外，NRBC一般僅在病理狀態(tài)下在外周血中被檢出，如強烈促紅細胞生成素刺激，造血功能嚴重不全,組織缺氧狀態(tài)等[3]，故NRBC的檢測有著重要的臨床意義。目前多數(shù)全自動血液分析儀均能對外周血NRBC進行準確計數(shù)。Coulter LH750血細胞分析儀通過溶解紅細胞，同時使白細胞的固有特點如表面胞質(zhì)及細胞大小等仍保持與在人體內(nèi)相同的狀態(tài)，運用VCS（體積、電導(dǎo)和光散射）技術(shù)從細胞體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、核漿比及顆粒狀況區(qū)分細胞類型，結(jié)合智能微數(shù)技術(shù)對NRBC進行自動識別及計數(shù)，并能夠根據(jù)結(jié)果自動糾正所測得的白細胞數(shù)。白細胞校正公式為：校正后的的白細胞/L=校正前白細胞數(shù)乘以100除以100+Y（Y為白細胞計數(shù)時100個白細胞中有核紅細胞的數(shù)量）[4]。

本文實驗結(jié)果表明，當儀器NRBC計數(shù)為高值或HGB＜90g/L時，儀器檢測結(jié)果與血涂片鏡檢陽性的符合率較高。故對于上述標本，進行有核紅細胞的手工復(fù)檢以確認NRBC的存在顯得尤為重要。我們在實驗過程中遇到1例儀器檢測時因干擾而出現(xiàn)NRBC假陽性的病例，此時NRBC的假陽性嚴重影響其白細胞計數(shù)的準確性，如不對其進行鏡檢確認并校正白細胞數(shù)，將直接影響到臨床的診斷與治療。本文實驗結(jié)果還顯示，成人樣本與嬰兒樣本的儀器檢測與血涂片鏡檢的陽性符合率相近，提示Coulter LH750對不同年齡段患者血常規(guī)樣本NRBC的檢測無明顯差異。而在儀器NRBC計數(shù)處于中、低值和HGB＞90g/L時，儀器結(jié)果與鏡檢的陽性符合率明顯下降，考慮主要原因是由于手工法鏡檢細胞數(shù)目（100～200個白細胞）偏少而儀器法細胞計數(shù)量更多，而血涂片上有核細胞分布不均勻、血涂片染色情況的好壞以及操作者對NRBC的辨認的主客觀因素同樣會造成鏡檢出現(xiàn)陰性結(jié)果[5]。

綜上所述，Coulter LH750對NRBC的報警提示有較好的可靠性。可以在一定程度上代替標本的顯微鏡檢查以減輕勞動強度提高工作效率。但是值得關(guān)注的是，目前的檢驗工作中存在依賴儀器檢測結(jié)果而忽視顯微鏡鏡檢的情況，從本研究結(jié)果中可以看出，對于部分NRBC計數(shù)值偏高（NRBC＞4）或紅細胞參數(shù)異常（HGB＜90g/L）的血標本仍必須對其進行血涂片鏡檢確認。在日常檢測中，必須嚴格執(zhí)行血細胞計數(shù)的復(fù)檢規(guī)則[6]，同時須對每份血標本的三維散點圖及儀器的提示信息予以足夠的重視及研究，才能保證每個結(jié)果的真實可信。

［1］李智夏，鐵安.孕婦外周血胎兒有核紅細胞的分離與檢測［J］.中華醫(yī)學遺傳學雜志，1998，18（2）：111-114.

［2］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第3 版.南京：東南大學出版社，2006：128.

［3］鄧家棟.臨床血液學［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，2001：1171.

［4］Byeon Y，Ki CS，Han KH.Isolation ofnucleated red blood cells in maternal blood for Non-invasive prenatal diagnosis［J］.Biomed Microdevices，2015，17（6）：118.

［5］Cremer M，Roll S，Graf C，et al.Nucleated red blood cells as marker for an increased risk of unfavorable outcome and mortality in very low birth weight infants［J］.Early Hum Dev，2015，91（10）：559-563.

［6］中華檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會.全國血液學復(fù)檢專家小組工作會議紀要暨血細胞自動計數(shù)復(fù)檢規(guī)則釋義［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30（4）：380-382.

（收稿：2016-01-05 修回：2016-02-20）

淅江省紹興市上虞區(qū)人民醫(yī)院檢驗科（上虞 312300）