五加芪粉長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究

卞愧，高艷艷，周德剛

(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心/洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司，河南洛陽(yáng)471003)

五加芪粉長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究

卞愧，高艷艷，周德剛

(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心/洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司，河南洛陽(yáng)471003)

為考察五加芪粉對(duì)動(dòng)物的安全性，采用大鼠進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。設(shè)五加芪粉高、中、低(8.4、2.1、0.84 g/kg/d)劑量組及空白對(duì)照組，給藥量分別相當(dāng)于雞每日臨床用量的100倍、25倍、10倍；給藥第14日、第28日及停藥第14日，各組抽取10只(雌雄各半)大鼠，取尾靜脈血進(jìn)行血液學(xué)檢測(cè)和血液生化指標(biāo)測(cè)定，對(duì)心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢等臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。結(jié)果顯示：各劑量組大鼠的體重、臟器與體重比值和血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)與空白對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢等臟器組織病理學(xué)檢查均未見(jiàn)明顯病理變化。研究表明五加芪粉臨床應(yīng)用安全。

五加芪粉；長(zhǎng)期毒性；大鼠

五加芪粉由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司聯(lián)合其他幾家公司研制，是農(nóng)業(yè)部2015年9月批準(zhǔn)的三類(lèi)新獸藥，現(xiàn)已在市場(chǎng)上銷(xiāo)售使用。五加芪粉由黃芪、刺五加組成，經(jīng)提取、純化、濃縮、噴霧干燥等工藝加工制成，具有補(bǔ)中益氣、扶正祛邪的功效，用于提高禽的機(jī)體免疫力，配合疫苗使用提高疫苗免疫效果。本研究在前期急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，參照《中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定[1]，對(duì)其長(zhǎng)期用藥的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 五加芪粉：批號(hào)20120203，規(guī)格50 g：165 g生藥，由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司提供。臨用前用純化水配成0.84、0.21、0.084 g/mL的溶液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡Wistar大鼠120只，清潔級(jí)，雌雄各半，體重180～220 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCKX(京)2012-0001。

1.1.3 主要儀器與試劑 PUS-2018G型半自動(dòng)生化分析儀，南京普朗新技術(shù)有限公司；XF9080A動(dòng)物自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司；DT-1000天孚牌電子天平，常熟市金羊砝碼儀器有限公司；JA2003電子天平：上海上平儀器有限公司。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)試盒(批號(hào)20120413)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)試盒(批號(hào)20120413)、尿素氮(BUN)測(cè)試盒(批號(hào)20120415)、血清(漿)、尿肌酐(Cr)測(cè)試盒(批號(hào)20120409)、總蛋白(TP)測(cè)試盒(批號(hào)20120412)、白蛋白(ALB)測(cè)試盒(批號(hào)20120412)、葡萄糖(GLU)測(cè)試盒(批號(hào)20120416)和甘油三酯(TG)測(cè)試盒(批號(hào)20120412)，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 選用健康大鼠120只，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組30只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，每籠5只，用雙染色法進(jìn)行編號(hào)標(biāo)記[2-4]。由實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)五加芪粉急性毒性試驗(yàn)研究結(jié)果可知,以最大給藥量(即24 g/kg體重)給藥后，小鼠未見(jiàn)任何異常與死亡，依據(jù)獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編(2006-2011年)中《獸藥30天和90天喂養(yǎng)試驗(yàn)指導(dǎo)原則》以及不同種類(lèi)動(dòng)物間用藥劑量換算公式[5](即大鼠是雞用藥量的1.4倍，且靶動(dòng)物雞臨床擬推薦劑量為每1 L水0.2 g)設(shè)計(jì)給藥劑量，即五加芪粉低劑量組0.84 g/kg/d、中劑量組2.1 g/kg/d、高劑量組8.4 g/kg/d和空白對(duì)照組，給藥各組分別以雞每日臨床10倍、25倍、100倍劑量的五加芪粉給大鼠灌胃，按10 mL/kg體重的用量，每天上午灌胃給藥1次，空白對(duì)照組灌服同體積的純化水。具體試驗(yàn)分組和給藥劑量見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)分組和給藥劑量

1.2.2 觀察指標(biāo)[6-8]

1.2.2.1 一般觀察 試驗(yàn)期間逐日觀察并記錄大鼠的精神狀態(tài)、行為表現(xiàn)、采食情況、糞便形態(tài)。

1.2.2.2 體重影響 每周逐只稱(chēng)重1次，并根據(jù)體重變化調(diào)整灌胃量，連續(xù)給藥28 d，觀察至給藥結(jié)束后14 d。

1.2.2.3 血液學(xué)檢查及血液生化指標(biāo)測(cè)定 給藥第14日、第28日及停藥第14日，各組抽取10只(雌雄各半)大鼠，取尾靜脈血進(jìn)行血液學(xué)檢測(cè)和血液生化指標(biāo)測(cè)定，血液學(xué)檢查指標(biāo)包括白細(xì)胞數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血細(xì)胞比容(HCT)、血紅蛋白含量(HGB)、血小板總數(shù)(PLT)；血液生化檢查指標(biāo)包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TG)。

1.2.2.4 剖檢情況 給藥第28日及停藥第14日，將采血后的10只大鼠處死，進(jìn)行系統(tǒng)解剖，肉眼觀察其組織器官，同時(shí)取其心、肝、腎、肺、脾等臟器進(jìn)行稱(chēng)重，計(jì)算臟/體比值。

1.2.2.5 病理學(xué)檢查 其余大鼠停藥繼續(xù)喂養(yǎng)，于第14日處死，隨機(jī)取高劑量組和空白對(duì)照組大鼠各10只，并取其心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢作組織病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般觀察 整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，四組大鼠精神狀態(tài)、行為表現(xiàn)、采食情況均正常，糞便呈棕黑色顆粒狀。恢復(fù)期亦未出現(xiàn)明顯的異常。

2.2 對(duì)體重的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠與空白對(duì)照組相比，每周體重?zé)o明顯差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 五加芪粉對(duì)大鼠體重的影響

注：“*”表示與空白對(duì)照組相比，差異顯著(0.01

2.3 對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠血液學(xué)指標(biāo)均在正常范圍，與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血液學(xué)指標(biāo)

2.4 對(duì)血液生化學(xué)指標(biāo)的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠血液生化指標(biāo)均在正常范圍，與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠血液生化指標(biāo)

2.5 對(duì)大鼠內(nèi)臟器官及臟/體比值的影響 五加芪粉連續(xù)灌胃第28日及停藥第14日解剖觀察，各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器均無(wú)肉眼可見(jiàn)的病理變化。各組大鼠心、肝、脾、肺、腎與體重比值在正常范圍，與空白對(duì)照組相比，無(wú)明顯差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 五加芪粉對(duì)大鼠臟/體比的影響

2.6 組織病理學(xué)檢查 H.E染色后鏡檢觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢與空白對(duì)照組相比，均未見(jiàn)異常的病理變化。

3 討論與小結(jié)

五加芪粉以8.4、2.1、0.84 g/kg 3個(gè)劑量，28 d連續(xù)給大鼠灌胃給藥，試驗(yàn)觀察期間，各組動(dòng)物的精神狀態(tài)、行為表現(xiàn)、采食、糞便均正常。各給藥組動(dòng)物的增重、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)與空白對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。解剖后，各組動(dòng)物的心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器均無(wú)肉眼可見(jiàn)的病理變化，心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器與體重比值與空白對(duì)照組相比，無(wú)明顯差異(P>0.05)；H.E染色后鏡檢觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢與空白對(duì)照組相比，均未見(jiàn)異常的病理變化。宋艷春等[9]對(duì)Wistar大鼠靜脈、腹腔注射刺五加注射液(總黃酮含量：5 mg/mL)16.0、40.0 mL/kg，連續(xù)28 d，研究表明大鼠在給藥期間、給藥結(jié)束時(shí)及恢復(fù)期間在飲食、飲水、活動(dòng)、毛發(fā)、呼吸、排泄等方面與空白對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異；體重增長(zhǎng)率、各主要器官臟器系數(shù)、血細(xì)胞和血液生化指標(biāo)均無(wú)顯著影響；病理組織學(xué)檢查亦未見(jiàn)毒性病理改變，此結(jié)論與本文研究結(jié)果一致。劉陽(yáng)等[10]對(duì)Wistar大鼠灌服黃芪煎劑(180、90、45 g/kg)，連續(xù)90 d，研究表明，對(duì)大鼠的一般狀況，血、尿常規(guī)，主要臟器質(zhì)量及其系數(shù)均無(wú)影響；心、肝、脾、肺、腎臟無(wú)病理變化，此研究結(jié)果亦與本文研究結(jié)果一致。張麗等[11]對(duì)Wistar大鼠灌服復(fù)方黃芪膠囊(5、3、1 g/kg)，連續(xù)12周，研究表明大鼠在給藥期間，各組動(dòng)物的活動(dòng)、毛色、攝食、糞便及體重增長(zhǎng)與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異；常規(guī)血液學(xué)、血液生化指標(biāo)、心電圖及心率均無(wú)顯著性差異；心、肝、脾、肺、腎臟、腸、腎上腺等臟器未見(jiàn)病理形態(tài)變化。

五加芪粉以8.4 g/kg(以雞臨床日用量的100倍)，連續(xù)給藥28 d并未對(duì)大鼠產(chǎn)生毒副作用，停藥14 d內(nèi)未見(jiàn)由蓄積毒性引起的后遺效應(yīng)。因此，五加芪粉臨床應(yīng)用安全。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局. 中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[Z].

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[4] 李儀奎.中藥新藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(二)[J].中藥新藥與臨床藥理,1994,5(3): 52-55.

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[11]張麗，李靈芝，龔海英.復(fù)方黃芪膠囊長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，14(2)：108-110.

(編輯：侯向輝)

Experimental Study on Long-Term Toxicity of Wujiaqi Powder

BIAN Kui，GAO Yan-Yan，ZHOU De-gang

(LuoyangHuizhongAnimalMedicineCoLtd，NationalResearchCenterforVeterinaryMedicine，Luoyang，Henan471003，China)

In order to observe the applied reliability of Wujiaqipowder, the long-term toxicity experiment was conducted in rats. Three treatment groups(8.4，2.1，0.84 g/kg/d)of Wujiaqi powder and blank control group were divided up，the dose amount was equivalent to 10，25，100 times of clinical chicken dosage．10 male and female rats in each group were randomly extracted after administration for 14 d，28 d and at 14 d after drug discontinuance．The tail venous blood was collected for determining the hematology and blood biochemical major indicators．The heart，liver，spleen，lung，kidney，gastrointestinal，testicle and ovary were performed the histopathological examination．The results showed that the major indicators of body weight，viscera and weight ratio，hematology and blood biochemical in each dose group had no statistically significant differences with the control group(P>0.05)，no obvious histopathological changes were found in the heart，liver，spleen，lung，kidney，gastrointestinal，testicle and ovary．The research inferred that Wujiaqipowder is safe in clinical application．

Wujiaqipowder; long-term toxicity;rats

卞愧，碩士，從事新獸藥研發(fā)工作。E-mail：kuibianok@163.com

2016-05-31

A

1002-1280 (2016) 07-0041-05

S853.76