蘇云金桿菌低成本固體發(fā)酵培養(yǎng)基的研制

劉云飛，寧文爍,2，陸秀君*，李瑞軍，郭 巍(.河北農業(yè)大學 植物保護學院/河北省農業(yè)病蟲害生物防治工程技術研究中心，河北 保定 0700；2.河北省寧晉縣農業(yè)局，河北 寧晉 055550)

蘇云金桿菌低成本固體發(fā)酵培養(yǎng)基的研制

劉云飛1，寧文爍1,2，陸秀君1*，李瑞軍1，郭 巍1
(1.河北農業(yè)大學 植物保護學院/河北省農業(yè)病蟲害生物防治工程技術研究中心，河北 保定 071001；2.河北省寧晉縣農業(yè)局，河北 寧晉 055550)

蘇云金桿菌(Bacillusthuringiensis，簡稱Bt)是一類對多種害蟲有效的病原微生物。為降低該菌產品制劑的生產成本，以北方常見的玉米芯粉、棉粕、豆粕等農產品下腳料為培養(yǎng)基質，研究了對多種鱗翅目、雙翅目害蟲具有特異殺蟲活性的Bt 菌株CYZ-4的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方。經對培養(yǎng)基的初始含水量、pH值等單因素試驗發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基初始含水量為70%、pH值為8.2時，玉米芯固體發(fā)酵培養(yǎng)基的產孢量達到最大；當玉米芯粉與棉粕質量比為5∶5和6∶4，與豆粕質量比為6∶4或7∶3時，發(fā)酵效果優(yōu)于其他組合，產物孢子濃度在9.3×109個/g以上；復合固體發(fā)酵培養(yǎng)基基礎配方中，玉米芯粉、棉粕、豆粕質量分數(shù)分別為19.1%、7.2%、3.6%時發(fā)酵Bt的效果最好。培養(yǎng)基3種成分及pH值的L9(34)正交試驗結果表明，將玉米芯粉、豆粕、棉粕按質量分數(shù)分別為16.0%、6.7%、7.2%的比例混合，添加0.075%KH2PO4、0.05%MgSO4、0.035%CaCO3，調節(jié)初始含水量為70%、pH值為8.2，按4%的接種量接種，30 ℃下培養(yǎng)6 d，菌株的產孢量最大，達到1.80×1010個/g。該固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方成本低，發(fā)酵條件簡單，適于以藥肥撒施毒土方式施用防治鱗翅目和雙翅目地下害蟲。

蘇云金桿菌； 固體發(fā)酵； 培養(yǎng)基； 玉米芯； 發(fā)酵工藝

蘇云金桿菌(Bacillusthuringiensis，Bt)屬革蘭氏陽性細菌，研究發(fā)現(xiàn)其殺蟲活性蛋白對多種農林業(yè)害蟲毒性較強，因此，利用其特異菌株發(fā)酵，進而開發(fā)的生物殺蟲劑在農林、衛(wèi)生等領域被大范圍推廣應用[1]。但目前Bt商品制劑的獲得主要采取液體發(fā)酵，導致藥劑生產成本偏高，提高了害蟲防治的投入，這一因素已經成為限制Bt商品制劑擴大生產應用的關鍵環(huán)節(jié)。如何降低Bt的發(fā)酵成本，研制其低成本發(fā)酵培養(yǎng)基具有重要的實踐價值。

Bt發(fā)酵生產有深層液體發(fā)酵和固體發(fā)酵，與液體發(fā)酵相比，固體發(fā)酵具有明顯的優(yōu)勢。一方面，固體發(fā)酵培養(yǎng)基中的含水量偏少，發(fā)酵產物產生后，其廢水少，發(fā)酵殘渣很少甚至無廢渣，對環(huán)境影響小。另一方面，固體發(fā)酵還具有投入低、產出高、使用方便簡潔、低能耗等優(yōu)點[2]，生產中和液體發(fā)酵相比逐漸體現(xiàn)出它的優(yōu)越性。

Bt是一類易培養(yǎng)的細菌，其對營養(yǎng)和環(huán)境要求簡單，一些農副產品的下腳料甚至廢物仍能被Bt利用進而正常生長，這為開發(fā)Bt的低成本固體發(fā)酵培養(yǎng)基奠定了理論基礎。為了得到高毒性的Bt發(fā)酵產物，人們通過優(yōu)化其培養(yǎng)基各組分的比例和培養(yǎng)條件，調整其生長周期及殺蟲蛋白的產量來達到預期效果，其中培養(yǎng)基配方對于Bt固體發(fā)酵產品的質量尤為重要[3]。鑒于此，為了開發(fā)出具有實踐生產價值的低成本固體發(fā)酵培養(yǎng)基，人們對麥麩、棉粕、花生餅粉、豆粕、米糠等常見農副產品進行了試驗[4-5]。在此基礎上，人們開始嘗試利用農產品的下腳料進行Bt固體發(fā)酵培養(yǎng)，如杜雷等[5]利用煙梗廢料為培養(yǎng)基質生產Bt；張靈玲等[6]以食用菌生產的下腳料菌糠為主要培養(yǎng)基質，探索出成本降低50%的Bt新型固體發(fā)酵培養(yǎng)基。以上研究結果說明，利用農產品下腳料來降低Bt菌的發(fā)酵成本是可行的。

玉米是我國北方旱作區(qū)重要的糧食作物，其產量高，收益好，種植面積大。玉米芯是玉米生產中的廢棄物，年產量在6 000萬t左右，通常被丟棄或者焚燒，一方面造成巨大浪費，另一方面還可能對環(huán)境造成污染[7]，玉米芯如何能夠變廢為寶，參與能量的循環(huán)利用引起了研究人員的極大興趣。文獻表明，1999年研究人員已成功應用玉米芯作基質培育出食用菌——平菇[8]。在這一研究成果的啟發(fā)下，人們先后應用玉米芯作培養(yǎng)基質來生產杏鮑菇、金針菇、木耳等多種優(yōu)質食用菌，目前玉米芯培養(yǎng)基已經替代棉籽成為生產食用菌的優(yōu)質培養(yǎng)基[9]。此外，科研人員還利用玉米芯進行多方面有益嘗試，高禮芳等[10]優(yōu)化了玉米芯高溫條件下利用稀酸催化水解生產糠醛的工藝；封功能等[11]進行了利用黑曲霉和啤酒酵母發(fā)酵玉米芯生產生物飼料的試驗；趙龍等[12]進行了玉米芯載體固定化米根霉發(fā)酵L-乳酸工藝的研究，其發(fā)酵產物中L-乳酸積累量達到32.23 g/L，葡萄糖對L-乳酸轉化率達80.58%。這些研究結果表明，玉米芯是一類開發(fā)價值明顯的生物資源，其蘊含的巨大生物量能夠通過合理的利用技術進行轉化，利用其作為多種微生物的發(fā)酵原材料具有廣闊的前景。Bt制劑是一類重要的生物農藥，其能否應用玉米芯進行發(fā)酵生產目前尚未見報道，為了明確玉米芯在Bt固體發(fā)酵生產中的可行性，減少Bt發(fā)酵的投入，簡化發(fā)酵條件，以北方常見的農產品下腳料玉米芯、豆粕、棉粕等為材料，進行了Bt菌株的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基研究，以期得到優(yōu)化的固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方。

1 材料和方法

1.1 材料

供試菌株：Bt CYZ-4菌株，由河北農業(yè)大學生物防治研究室保存，含有基因cry1Ac、cry1Ab和cry2Ab，為對多種鱗翅目害蟲、雙翅目害蟲具有高活性的蘇云金桿菌野生菌株[13]。

試劑：牛肉膏蛋白胨、酵母粉、氯化鈉(NaCl)、瓊脂粉、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、碳酸鈣(CaCO3)及硫酸鎂(MgSO4)均為分析純，由北京益利精細化學品有限公司生產。

基質：玉米芯由河北農業(yè)大學標本園試驗地種植玉米脫粒后獲得，豆粕、棉粕從市場購得。

培養(yǎng)基：液體LB培養(yǎng)基配方為牛肉膏蛋白胨1%、酵母粉0.5%、NaCl 1%，pH值7.5。 固體LB培養(yǎng)基在液體LB培養(yǎng)基基礎上添加1.3%的瓊脂即可。以上培養(yǎng)基用于CYZ-4菌株的活化及種子菌的培養(yǎng)。

儀器：超凈工作臺，SW-CJ-1FD型，蘇州安泰空氣技術有限公司生產；電子天平，ACCULAB ALC-1100.2，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司生產；pH計，DELTA 320，梅特勒-托多利儀器(上海)有限公司生產；恒溫培養(yǎng)箱，GXZ型，寧波江南儀器廠生產；光學顯微鏡，13395H2X型，德國Leica公司生產；空氣浴振蕩器，HZQ-C，哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠生產。

1.2 方法

1.2.1 玉米芯為基質的固體發(fā)酵工藝研究

1.2.1.1 培養(yǎng)基最適含水量的篩選 培養(yǎng)基于250 mL三角瓶中配制，每瓶均加入10 g玉米芯粉，無機鹽含量為KH2PO40.075%、MgSO40.05%和CaCO30.035%，初始pH值7.8。而后分別添加不同量的蒸餾水，設含水量為84%、80%、75%、73%、70%、67%、63%、57%、50%共9個處理，每處理重復3次。各培養(yǎng)基在121 ℃下高壓滅菌備用。在LB培養(yǎng)基平板上活化Bt CYZ-4菌株，經液體發(fā)酵培養(yǎng)好的種子菌[11]，在超級工作臺中按照4%的接種量接種，并用滅菌的玻璃棒攪拌混勻，后置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵，連續(xù)培養(yǎng)6 d得到發(fā)酵產物。將發(fā)酵產物用滅菌水稀釋10倍，置于搖床中200 r/min搖2 h，使培養(yǎng)基質與孢子分離；靜置后取澄清液，稀釋后用血球計數(shù)板計數(shù)，每重復計3次，計算孢子產量，統(tǒng)計孢子濃度，利用SPSS 19軟件進行差異顯著性分析。

1.2.1.2 培養(yǎng)基最適初始pH值的篩選 選取最適含水量培養(yǎng)基進行最適初始pH值試驗。按照pH值相差0.5的梯度，介于4.5～9.5設計11個初始pH值處理，試驗操作及分析方法同1.2.1.1，分析培養(yǎng)基的酸堿性對Bt CYZ-4菌株固體發(fā)酵產孢量的影響；在初步得到合適pH值的基礎上，按照pH值相差0.3的梯度，再設計7個pH值處理，得到含水量和初始pH值最優(yōu)的Bt玉米芯固體發(fā)酵培養(yǎng)基。

1.2.2 玉米芯、棉粕為基質的固體發(fā)酵工藝研究 在1.2.1.2結果基礎上進行添加棉粕作為氮源的固體發(fā)酵試驗。以玉米芯發(fā)酵配方為對照，分別按照玉米芯與棉粕質量比4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2和9∶1配制培養(yǎng)基[3]，其他同1.2.1.1，探討玉米芯、棉粕為基質的最佳固體發(fā)酵配方。

1.2.3 玉米芯、豆粕為基質的固體發(fā)酵工藝研究 豆粕是常用的固體發(fā)酵培養(yǎng)基質，試驗在研制的玉米芯培養(yǎng)基基礎上添加不同比例豆粕，研制由豆粕與玉米芯組成的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基。試驗設計及統(tǒng)計方法同1.2.2。

1.2.4 玉米芯復合固體發(fā)酵培養(yǎng)基研制

1.2.4.1 基礎配方篩選 在1.2.2和1.2.3試驗得到的2種成分最優(yōu)配方基礎上，將兩配方分別按照質量比4∶1(處理Ⅰ)、3∶2(處理Ⅱ)、2∶3(處理Ⅲ)和1∶4(處理Ⅳ)的比例配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基總量仍為10 g，同時以2種成分最優(yōu)配方為對照進行試驗，得到以玉米芯為主的3種成分的Bt固體發(fā)酵培養(yǎng)基基礎配方。

1.2.4.2 玉米芯復合固體發(fā)酵配方的優(yōu)化 在得到基礎配方的基礎上，進一步進行4因素3水平L9(34)正交試驗設計(表1)，優(yōu)化3種組分比例和pH值。

表1 正交試驗因素水平

2 結果與分析

2.1 玉米芯固體發(fā)酵培養(yǎng)基的研制

2.1.1 培養(yǎng)基含水量的確定 試驗結果表明，利用玉米芯可以成功發(fā)酵Bt菌，發(fā)酵產物中孢子濃度均達到1×108個/g以上(圖1)。培養(yǎng)基含水量是影響B(tài)t菌發(fā)酵質量的重要因素，不同含水量的玉米芯發(fā)酵Bt菌產物孢子濃度由高到低的順序依次為：70%、73%、75%、67%、80%、63%、50%、84%、57%。其中70%為最適含水量，與其他處理間存在顯著差異(P<0.05)。

2.1.2 最適pH值的確定 由圖2可以發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基pH值4.5～9.5的11個處理中，培養(yǎng)基的酸堿度直接影響B(tài)t菌的發(fā)酵質量。在堿性條件下，Bt菌有較好的發(fā)酵效果，其發(fā)酵產物孢子濃度均大于2.0×109個/g，其中，pH值8.0為該試驗發(fā)酵的最適pH值，其產物中孢子濃度達到4.7×109個/g。

為了得到更準確的玉米芯發(fā)酵培養(yǎng)基pH值，進一步在pH值6.7～8.5設計7個pH值梯度處理進行優(yōu)化。由圖3可見，pH值為7.9～8.5時發(fā)酵效果好于其他處理，優(yōu)化試驗得到了與初步試驗相似的結論，培養(yǎng)基初始pH值8.2處理組的發(fā)酵產物孢子濃度最高，可達4.9×109個/g。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同圖1 不同初始含水量對Bt固體發(fā)酵產孢量的影響

圖2 不同pH值對Bt固體發(fā)酵產孢量的影響

圖3 玉米芯固體發(fā)酵培養(yǎng)基pH值的確定

2.2 玉米芯、棉粕為基質的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的研制

從表2可以看出，發(fā)酵效果因添加棉粕比例不同存在較大差異。其中，當玉米芯與棉粕質量比為5∶5、6∶4時，Bt菌的發(fā)酵效果最好，產物孢子濃度達到9.3×109～9.6×109個/g，約為玉米芯培養(yǎng)基的2倍，且與其他處理差異顯著(P<0.05)。

2.3 玉米芯、豆粕為基質的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的研制

從表2可以看出，添加不同比例豆粕(玉米芯與豆粕質量比為9∶1除外)與單一玉米芯培養(yǎng)基相比，發(fā)酵產物孢子濃度具有不同程度的提高，初步說明，豆粕中含有Bt生長的重要營養(yǎng)成分。但對添加不同比例豆粕發(fā)酵結果分析發(fā)現(xiàn)，豆粕的添加比例與發(fā)酵產物孢子濃度并未呈現(xiàn)正相關，其中玉米芯與豆粕質量比為6∶4、7∶3時，培養(yǎng)基質發(fā)酵Bt的效果最好，產物孢子濃度大于1×1010個/g，兩處理與其他處理間差異顯著(P<0.05)。

表2 不同比例棉粕和豆粕培養(yǎng)基對孢子濃度的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。

2.4 玉米芯、棉粕和豆粕固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方的研制

2.4.1 基礎配方組成 以玉米芯為主要基質，添加豆粕和棉粕進行復合配方研制試驗，結果見表3。由表3可以看出，不同配比固體培養(yǎng)基發(fā)酵結果存在差異，其中處理Ⅱ的發(fā)酵產物孢子濃度為1.12×1010個/g，其培養(yǎng)基中玉米芯、棉粕、豆粕分別為6.4、2.4、1.2 g，即質量分數(shù)分別為19.1%、7.2%、3.6%。該處理發(fā)酵效果最優(yōu)，且與除處理Ⅲ外的其他處理間差異顯著(P<0.05)，因此，選用該復合配方進行正交試驗優(yōu)化。

表3 玉米芯、豆粕和棉粕復合固體培養(yǎng)基的研制

2.4.2 玉米芯復合固體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化結果 根據正交試驗設計表進行培養(yǎng)基優(yōu)化試驗，結果見表4。根據極差判斷出各因子對產孢量影響的主次順序為B>D>C>A，即豆粕添加比例是影響發(fā)酵效果的最關鍵因素，其次為pH值，棉粕的比例影響最小。正交試驗中組合3(A1B3C3D3)的孢子濃度最高，達到1.67×1010個/g；同時推斷出的最佳組合為A3B3C3D3，即豆粕3.0 g、棉粕3.2 g、玉米芯7.2 g，pH值8.2。為了進一步驗證正交試驗結果，采用推斷的最優(yōu)組合進行試驗，結果發(fā)現(xiàn)其孢子濃度高于組合3，為1.80×1010個/g，但兩者間差異不顯著，再次說明棉粕不是影響發(fā)酵質量的關鍵因子。綜上，以玉米芯為基質的復合固體發(fā)酵培養(yǎng)基按照玉米芯16.0%(質量分數(shù)，下同)、豆粕6.7%、棉粕7.2%、KH2PO40.075%、MgSO40.05%、CaCO30.035%的比例配制，調節(jié)pH值為8.2，接種種子菌后至于30 ℃發(fā)酵培養(yǎng)6 d，能達到最好的發(fā)酵效果。

表4 復合固體發(fā)酵培養(yǎng)基的L9(34)正交優(yōu)化試驗結果

3 結論與討論

Bt作為全球應用范圍最廣、對多種害蟲高效的生物殺蟲劑，已廣泛應用于農林業(yè)生產實踐。但其生產成本高引起防治成本居高不下，進而導致使用者難以承受已經成為其擴大應用的關鍵限制因素。因此，開發(fā)利用低成本的發(fā)酵培養(yǎng)基質，簡化發(fā)酵環(huán)節(jié)，降低其生產成本將為Bt的進一步應用提供可能。杜雷等[5]以煙梗廢料、玉米粉和豆餅粉為原料，進行Bt HD-1的固體發(fā)酵，發(fā)酵后的芽孢數(shù)可穩(wěn)定在9.5×1010cfu/mL；張群林等[14]以玉米粉、黃豆餅粉和葡萄糖為原料對Bt BRC-ZQL3進行固體發(fā)酵試驗，產物孢子濃度達到2.4×108個/mL；盧娜等[15]利用玉米浸泡液制備蘇云金桿菌生物殺蟲劑，27 h的芽孢數(shù)能達到1.5×109cfu/mL。上述培養(yǎng)基中，均用到了與玉米相關的產物，證明玉米中所含的營養(yǎng)物質適合Bt的生長。但是以玉米芯作為固體培養(yǎng)基基質進行Bt發(fā)酵的研究尚未見報道。為了得到低成本、高產量的Bt固體發(fā)酵培養(yǎng)基，本試驗以玉米芯粉為發(fā)酵基質進行研究。通過對Bt CYZ-4發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化，找到了一種適合該菌株生長的培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝，將玉米芯粉、豆粕、棉粕按質量分數(shù)分別為16.0%、6.7%、7.2%的比例混合，添加0.075% KH2PO4、0.05% MgSO4、0.035% CaCO3，調節(jié)初始含水量為70%、pH值為8.2，按4%的接種量接種種子菌，30 ℃下培養(yǎng)6 d，發(fā)酵產物的產孢量最大，達到1.80×1010個/g。與普通發(fā)酵工藝相比，該工藝發(fā)酵成本降低，為其進一步用于Bt工業(yè)化發(fā)酵生產打下了基礎，后續(xù)工作將對該菌株的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。

[1] 關雄.蘇云金芽孢桿菌研究回顧與展望[J].中國農業(yè)科技導報，2006，8 (6):5-11.

[2] 余健秀，湯慕瑾，徐建敏，等.蘇云金桿菌小試生產發(fā)酵影響因子的研究[J].中國生物防治，2002,18(1):17-20.

[3] 陳聰.蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基配方的優(yōu)化[J].福州：福建農林大學，2004:83-89.

[4] Uyar F,Baysal Z.Production and optimization of process parameters for alkaline protease production by a newly isolatedBacillussp.under solid state fermentation process[J].Biochemistry,2004,39:1893-1898.

[5] 杜雷，趙高嶺，席宇，等.煙梗廢料固態(tài)發(fā)酵生產蘇云金芽孢桿菌的適宜條件篩選[J].煙草科技,2011(12):69-72.

[6] 張靈玲，吳松青，彭艷，等.一種蘇云金桿菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法:201110207054.1[P].2011-11-23.

[7] 劉保偉，卜崇興，劉慧英，等.不同發(fā)酵菌劑對玉米芯堆肥發(fā)酵過程中理化性質的影響[J].江蘇農業(yè)科學，2014，42(8)：334-336.

[8] 許修宏,袁曉麗,郭亞芬.玉米芯發(fā)酵袋栽平菇技術[J].北方園藝，1999(2)：33-34.

[9] 楊玉畫，李彩萍，聶建軍，等.晉北高寒區(qū)檸條與玉米芯栽培白靈菇技術研究[J].中國食用菌，2011，30(4)：29-31.

[10] 高禮芳，徐紅彬，張懿，等.高溫稀酸催化玉米芯水解生產糠醛工藝優(yōu)化[J].過程工程學報，2010，10(2):292-297.

[11] 封功能，許偉，劉漢文，等.玉米芯二步發(fā)酵生產生物飼料的研究[J].飼料工業(yè)，2011，32(3)：53-55.

[12] 趙龍，蔣雪薇，盛燦梅，等.玉米芯載體固定化米根霉發(fā)酵L-乳酸工藝的研究[J].食品與機械，2012，28(3)：226-229.

[13] 趙煥麗，陸秀君，劉云飛，等.1株對多種害蟲高活性的蘇云金桿菌BtCYZ-4[J].東北林業(yè)大學學報，2009,37(9):104-105.

[14] 張群林，張志國，余潔，等.響應面分析法優(yōu)化蘇云金芽孢桿菌BRC-ZQL3菌株發(fā)酵培養(yǎng)基[J].福建師范大學學報(自然科學版)，2011，27(5)：85-89.

[15] 盧娜，周順桂，常明，等.利用玉米浸泡液制備蘇云金桿菌生物殺蟲劑[J].環(huán)境科學學報，2007，27(12)：1978-1983.

Development of Low-cost Solid Fermentation Medium ofBacillusthuringiensis

LIU Yunfei1,NING Wenshuo1,2,LU Xiujun1*,LI Ruijun1,GUO Wei1
(1.College of Plant Protection,Agricultural University of Hebei/Engineering Research Center for Biological Control of Agricultural Pests in Hebei Province,Baoding 071001,China; 2.Agriculture Bureau of Ningjin County,Ningjin 055550,China)

Bacillusthuringiensis(Bt) is a biological insecticide used widely.This paper proposes to study the solid fermentation of Bt CYZ-4 strain,which has specific insecticidal activity to Lepidoptera and Diptera.In order to reduce production costs,some agricultural products such as corncob powder,cottonseed meal and soybean meal were used as culture medium.The single factor experiments showed that the amount of spores was improved most under the treatment of corncob powder with the initial water content of 70% and pH value of 8.2.When the mass ratio of corncob powder and cottonseed meal was 5∶5 or 6∶4,and that of corncob powder and soybean meal was 6∶4 or 7∶3,the fermentation effects were better than others,with the product spore concentration more than 9.3×109cells/g.In composite solid fermentation base formulation,the optimum composition was 19.1% of corncob powder,7.2% of cottonseed meal,and 3.6% of soybean meal.The optimum culture medium composition and pH value were obtained through the orthogonal design.The results showed that the optimum fermentation conditions were as follows: the medium contained 16.0% corncob powder,7.2% cottonseed meal,6.7% soybean meal,0.075% KH2PO4,0.05% MgSO4,and 0.035% CaCO3,with 70% of the initial moisture content and pH value of 8.2,the inoculums amount was 4%,and the strain was cultivated at 30 ℃ for 6 d.Under these conditions,the maximum spore yield reached 1.80×1010cells/g,which was higher than that under the initial fermentation level.The solid fermentation medium had low cost and simple fermentation conditions,also easy for use in the field.

Bacillusthuringiensis； solid fermentation； medium； corn cob； fermentation condition

2015-09-28

國家花生產業(yè)技術體系蟲害防控崗位項目(CARS-14)；河北省“十二五”重點科技支撐計劃項目(14236811D，14226502D)；河北農業(yè)大學博士基金及教研項目(2012-B33)

劉云飛(1987-)，男，湖北安陸人，碩士，主要從事植物保護研究。E-mail：282815536@qq.com

*通訊作者：陸秀君(1970-)，女，河北昌黎人，教授，博士，主要從事害蟲生物防治與綜合治理研究。 E-mail:luxiujun@hebau.edu.cn

S476.11;TQ920.4

A

1004-3268(2016)04-0102-06