HPLC-DAD測(cè)定不同時(shí)期安吉白茶中EGCG的含量

北 拉，蒲首丞，孫梅好

（浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江金華 321004）

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HPLC-DAD測(cè)定不同時(shí)期安吉白茶中EGCG的含量

北 拉，蒲首丞，孫梅好

（浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江金華 321004）

摘 要：文章采用HPLC-DAD對(duì)不同時(shí)期安吉白茶葉中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）的含量變化進(jìn)行分析。采用AgilentC18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇︰水（2%乙酸）15︰85；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：35℃。結(jié)果是EGCG線性范圍為0.304～3.040μg，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，平均回收率100.21%，RSD為1.04%。該方法精密度、準(zhǔn)確度好，穩(wěn)定性高，能簡(jiǎn)便、快速。

關(guān)鍵詞：HPLC-DAD 安吉白茶 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 含量

安吉白茶（AnjiwhiteTea），為山茶科（Theaceae）茶屬（Camellia）雙子葉木本植物。現(xiàn)代研究表明白茶中的EGCG成分具有顯著的抗氧化、抗腫瘤、抗突變和心血管疾病等作用。文章通過對(duì)明前和明后兩種不同生長(zhǎng)期的白茶EGCG含量的測(cè)定，為以白茶為原料制備EGCG單體和EGCG提取物的茶葉加工企業(yè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

（1）主要研究對(duì)象。安吉白茶（安吉采集和炒制）。

（2）主要試劑。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCE）（上海源葉公司，含量：98%），甲醇為色譜純?cè)噭?，其它試劑均為?析純。實(shí)驗(yàn)用水艾柯超純水。

（3）主要儀器。Agilent1260型高效液相色譜儀（Agilent公司），電子分析天平（賽多利斯），恒溫水浴鍋（精宏公司），真空干燥箱（天呈），RA-25AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮）。

1.2方法

（1）色譜條件色譜柱為AgilentC18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇︰水（2%乙酸）15︰85；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：35℃。

（2）對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)真空干燥24 h處理后的15.2 mg表沒食子兒茶素沒食子酸酯對(duì)照品，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液，于冰箱中低溫保存?zhèn)溆?。表沒食子兒茶素沒食子酸酯濃度為152 μg/ml。

（3）供試品溶液的制備分別準(zhǔn)確稱取樣品約1.0 g，置于500 ml平底燒瓶中，加水100 ml80℃水，置85℃水的水浴中加熱回流1 h，共水浴加熱回流兩次，經(jīng)過濾收集濾液，最后減壓濃縮濾液，定容至50 ml容量瓶中，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液待測(cè)。

2　結(jié)果與分析

2.1目標(biāo)組分的確定

按照1.2項(xiàng)色譜條件下，對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣10μl，DAD檢測(cè)器檢測(cè)分析，在波長(zhǎng)為276 nm下是EGCG的最大吸收，DAD檢測(cè)器檢測(cè)記錄儲(chǔ)存200～400 nm的所有色譜，對(duì)照品與2種白茶樣品的EGCG的保留時(shí)間都在8.5 min。

2.2流動(dòng)相的選擇

測(cè)定EGCG含量流動(dòng)相為甲醇︰水系統(tǒng)和甲醇︰水（2%乙酸）系統(tǒng)，進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)系統(tǒng)都能使EGCG分離開來（分離度R＞1.5），甲醇︰水系統(tǒng)中EGCG嚴(yán)重拖尾，而甲醇︰水（2%乙酸）系統(tǒng)中EGCG峰形比較好，故選擇甲醇︰水（2%乙酸）15︰85為該測(cè)定方法的流動(dòng)相系統(tǒng)。

2.3線性關(guān)系考察

精密吸取上述對(duì)照品溶液分析，進(jìn)樣量分別為2、4、6、8、12、16、20μl，測(cè)其峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積Y（s）為縱坐標(biāo)作圖，得到線性回歸方程為Y=854.160X-20.854，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9999，表明EGCG在0.152～3.040μg范圍內(nèi)與峰面積之間具有良好的線性關(guān)系。

2.4精密度試驗(yàn)

精密吸取配制的對(duì)照品溶液10μl進(jìn)樣，依上述色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定EGCG峰面積，RSD為1.6%，結(jié)果表明精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取配制的2種供試樣品溶液10μl，于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，各重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定目標(biāo)組分的含量，以考察供試品溶液的穩(wěn)定性，10 h內(nèi)早白茶和晚白茶樣品EGCG組分RSD分別為2.1%、2.8%。結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的白茶樣品6份，分別精密加入一定量EGCG對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果顯示該方法具有較高的準(zhǔn)確度。

2.7樣品中EGCG含量的測(cè)定

分別取1.3.2項(xiàng)配制的2種供試品溶液10μl，按1.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每樣重復(fù)進(jìn)樣3次，求峰面積均值，按外標(biāo)法計(jì)算其含量，早白茶中EGCG的含量為：81.28 mg/g，RSD為0.59%；晚白茶中EGCG的含量為：62.71 mg/g，RSD為0.97%

3　結(jié)論

采用該法對(duì)早白茶（明前主采茶期）和晚白茶（明后采茶末期）中的EGCG進(jìn)行了含量分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明早白茶EGCG的含量為：81.28 mg/g，含量較高；晚白茶EGCG含量：62.71 mg/g，比早白茶含量低，但含量比較高。該測(cè)定白茶中EGCG含量的方法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于白茶的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

［1］ 于淑池，劉暢，王乘慧，等.安吉白茶茶多酚的抗氧化活性研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（5）：1 184～1 187

［2］ 謝文鋼，邵濟(jì)波，韓楠，等.安吉白茶的研究進(jìn)展.福建茶葉，2011，33（6）：4～7