刺五加提取物在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移的同時(shí)促進(jìn)其凋亡研究

徐麗偉

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刺五加提取物在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移的同時(shí)促進(jìn)其凋亡研究

徐麗偉

【摘要】目的 研究刺五加提取物在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及促細(xì)胞凋亡的價(jià)值。方法 對乳腺癌細(xì)胞系MCF-7進(jìn)行培養(yǎng)并用刺五加提取物處理，用MTT法檢測在乳腺癌細(xì)胞生長中刺五加的抑制作用；用TUNEL法檢測在細(xì)胞凋亡中刺五加的促進(jìn)作用；用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測刺五加在細(xì)胞遷移中的作用。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖抑制作用較為明顯；TUNEL法結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移速度緩慢。結(jié)論 在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移中刺五加提取物有良好的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】刺五加提取物；乳腺癌；細(xì)胞增殖；遷移；凋亡

乳腺癌是現(xiàn)階段發(fā)生率不斷提高的一種惡性腫瘤，且呈現(xiàn)出年輕化趨勢，對患者生活質(zhì)量威脅較大，死亡率高［1-2］。本文主要分析刺五加提取物在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移以及促癌細(xì)胞凋亡中的作用，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

MCF-7細(xì)胞、刺五加根莖（由黑龍江北國技術(shù)開發(fā)有限公司提供）、刺五加提取物（自行制備）；DNEN低糖細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清、MTT檢測試劑盒、TUNEL檢測試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 在37℃環(huán)境下將MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)在DNEN低糖細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)（含有10％胎牛血清），培養(yǎng)箱中二氧化碳濃度保持為5％；實(shí)驗(yàn)組用不同濃度的刺五加提取物對細(xì)胞進(jìn)行處理，而對照組采用等體積去離子水處理細(xì)胞。

1.2.2 MTT法 將MCF-7細(xì)胞放置在有96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行培養(yǎng)，并用刺五加提取物對細(xì)胞處理24 h后將培養(yǎng)基吸凈，每孔內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)液100 μl，再將20 μl的MTT試劑加入，繼續(xù)進(jìn)行4 h培養(yǎng)。隨后將孔內(nèi)培養(yǎng)液吸凈，加入DMSO 100 μl，低速震蕩10 min，結(jié)晶物分解后用Synergy4多功能微孔板檢測儀測量每孔吸光值。為了保證檢測準(zhǔn)確性，可分別用刺五加提取物對MCF-7細(xì)胞處理24 h、48 h、72 h后重復(fù)上述操作，測量每孔吸光值。

1.2.3 TUNEL法 根據(jù)試劑盒說明書操作，檢測細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果采用熒光顯微鏡進(jìn)行拍照記錄。

1.2.4 劃痕實(shí)驗(yàn) 在24孔板上接種MCF-7細(xì)胞，在37℃、濃度為5％的二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，隨后用10 μl吸頭在每孔中央劃一無細(xì)胞劃痕區(qū)，寬度3～5 mm。將1 ml的DMEM完全培養(yǎng)液計(jì)入實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)，并加刺五加提取物加入；對照組加入等體積的培養(yǎng)液；均繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。劃痕實(shí)驗(yàn)完成后48 h在顯微鏡輔助下觀察劃痕寬度變化情況并進(jìn)行拍照記錄。

2 結(jié)果

2.1 在乳腺癌細(xì)胞增殖中刺五加的抑制作用分析

結(jié)果顯示，生長狀態(tài)良好的MCF-7細(xì)胞經(jīng)DMEM培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度為80％，將刺五加提取物加入培養(yǎng)24 h后，其MCF-7細(xì)胞生長形態(tài)出現(xiàn)變化，細(xì)胞體細(xì)長，細(xì)胞生長密度變細(xì)，其中有少量細(xì)胞出現(xiàn)死亡。

2.2 在乳腺癌細(xì)胞凋亡中刺五加的作用分析

結(jié)果顯示，對細(xì)胞增殖影響中刺五加提取物濃度越高，效果越明顯。對細(xì)胞采用藥物濃度為2 mg/ml進(jìn)行處理后檢測，細(xì)胞核位置由DAPI染色顯示，凋亡的細(xì)胞由TUNEL染色顯示，對照組細(xì)胞數(shù)量多且屬于TUNEL染色陰性細(xì)胞；經(jīng)刺五加處理過的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞適量少，TUNEL染色有散在陽性點(diǎn)，由此可知，刺五加提取物可促使MCF-7細(xì)胞核內(nèi)DNA斷裂，最終凋亡。

2.3 在降低乳腺癌細(xì)胞遷移中刺五加的作用

劃痕36 h后對照組MCF-7細(xì)胞劃痕將兩側(cè)逐漸向中心遷移愈合；實(shí)驗(yàn)組遷移速度緩慢，造成劃痕愈合速度也下降，表示刺五加提取物能夠一定程度抑制癌細(xì)胞遷移，有良好的抗癌能力。

3 討論

刺五加屬于野生植物的一種，屬于常見的野生蔬菜及中草藥，也可進(jìn)行人工栽培，各部位化學(xué)成分不同，生理活性強(qiáng)，有保健、營養(yǎng)及藥用等價(jià)值［3-4］。刺五加的抗腫瘤作用已經(jīng)越來越受相關(guān)學(xué)者關(guān)注［5］。研究顯示［6-7］，刺五加葉皂苷對HepG2細(xì)胞株的VEGF mRNA表達(dá)有良好抑制作用，說明可利用刺五加抑制VEGF介導(dǎo)血管的腫瘤血管新生來抑制腫瘤細(xì)胞生長、增殖及轉(zhuǎn)移。且刺五加水提取物對巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞有良好的激活作用，所以在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時(shí)，還能抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［8］。

本研究以乳腺癌細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞為基礎(chǔ)從細(xì)胞增殖、遷移及凋亡等方面分析刺五加提取物在抗乳腺癌中的作用。結(jié)果表明，刺五加對乳腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移有良好的抑制作用，從而可減緩癌細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移，并促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。

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Acanthopanax Extracts Inhibit Breast Cancer Cell Proliferation and Migration While Promoting Apoptosis Research

XU Liwei Department of Tumor and Hematology，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun Jilin 130117，China

【Abstract】Objective To study the acanthopanax extracts inhibit breast cancer cell proliferation，migration and apoptosis of value.Methods MCF-7 breast cancer cell lines were cultured and treated with siberian ginseng extract，inhibition of cell growth in breast cancer in acanthopanax by MTT assay，by TUNEL assay of apoptosis in acanthopanax promotion，role in cell migration by scratch assay ciwujia.Results MTT results showed that the experimental group was more pronounced in cell proliferation.TUNEL assay showed that the experimental group apoptosis，scratch test results showed that the experimental group cell migration is slow.Conclusion The inhibition of breast cancer cell proliferation，migration siberian ginseng extract has a good inhibition．

【Key words】Acanthopanax extract，Breast cancer，Cell proliferation，Migration，Apoptosis

【中圖分類號】R242

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）07-0130-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．100

作者單位：長春中醫(yī)藥大學(xué)腫瘤血液科，吉林 長春 130117