免疫膠體金技術(shù)及其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用探討

許 麗

（南充市高坪區(qū)長(zhǎng)樂畜牧獸醫(yī)站，四川南充 637100）

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免疫膠體金技術(shù)及其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用探討

許 麗

（南充市高坪區(qū)長(zhǎng)樂畜牧獸醫(yī)站，四川南充 637100）

［摘 要］免疫膠體金技術(shù)起源于20世紀(jì)80年代，是一種新式免疫標(biāo)記技術(shù)，憑借成本低、反應(yīng)快的優(yōu)點(diǎn)在獸醫(yī)臨床上獲得了廣泛的應(yīng)用。本文結(jié)合免疫膠體金技術(shù)的基本原理，探討了在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用。

［關(guān)鍵詞］免疫膠體金獸醫(yī)臨床技術(shù)應(yīng)用

免疫膠體金技術(shù)具有簡(jiǎn)便、靈敏、無污染的優(yōu)點(diǎn)，是現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)上常用的免疫標(biāo)記技術(shù)。免疫膠體金技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用主要是借助免疫層析法（CGEIA）和斑點(diǎn)免疫金滲濾法（DIGFA），檢測(cè)肝臟表面的抗原和絨毛膜促性腺激素等，該技術(shù)不斷發(fā)展的過程中，臨床應(yīng)用也越來越廣泛，具有較大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

1　免疫膠體金技術(shù)概述

1.1免疫膠體金技術(shù)的基本原理

在實(shí)際應(yīng)用中，免疫膠體金技術(shù)以膠體金為重要的示蹤標(biāo)志物，在抗原抗體反應(yīng)中加以應(yīng)用。氯金酸（HAuCl4）在高效還原劑的作用下逐漸凝聚成金顆粒，形成一種疏水膠溶液，這種疏水膠溶液會(huì)帶有負(fù)電荷。疏水膠溶液在靜電的作用下成為一種更加穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。在弱堿環(huán)境下，膠體金會(huì)帶有明顯的負(fù)電荷，而動(dòng)物體內(nèi)的蛋白質(zhì)分子帶有明顯的正電荷基團(tuán)，兩者牢固結(jié)合后不會(huì)影響蛋白質(zhì)原有的生物特性。膠體金離子會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)分子形成較強(qiáng)的吸附作用，可以和免疫球蛋白、糖蛋白、抗生素和激素等形成非共價(jià)結(jié)合物，用于臨床疫病等的檢驗(yàn)，在實(shí)際試驗(yàn)中較高的價(jià)值。

免疫膠體金的標(biāo)記方法主要是應(yīng)用金顆粒的電子密度特性，在顯微鏡下觀察，蛋白質(zhì)的結(jié)合位置會(huì)呈現(xiàn)出明顯的黑褐色顆粒，這些標(biāo)記物大量聚集后，呈現(xiàn)出紅色或粉紅色的斑點(diǎn)，可以進(jìn)行快速免疫檢測(cè)［1］。

1.2免疫膠體金技術(shù)的制備方法

化學(xué)還原法被廣泛應(yīng)用于免疫膠體金制備中，在一定濃度的金溶液中加入還原劑，在還原劑的作用下，金離子變成金原子。通過對(duì)還原劑種類和劑量的控制，可以制備出不同大小顆粒的膠體金顆粒。實(shí)際應(yīng)用中，主要的制備方法有白磷還原法、檸檬酸三鈉還原法等。以檸檬酸三鈉為例，在制備時(shí)控制氯金酸溶液的濃度為0.01%，之后將溶液加熱至沸騰，快速攪拌，加入濃度為1%的檸檬酸三鈉水溶液，加熱后變?yōu)槌吻逋该鞯募t色溶液，這種方法簡(jiǎn)便可靠，形成的膠體金顆粒大小較為均勻。

1.3免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)

常用的免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)有快速免疫層析法（CGEIA）和斑點(diǎn)免疫金滲濾法（DIGFA），兩種檢測(cè)方法的相同之處是，在抗原或者抗體中加入一定量的待檢驗(yàn)標(biāo)本，在毛細(xì)管或者滲濾的作用下，兩者會(huì)牢固結(jié)合，之后再應(yīng)用膠體金標(biāo)記。在DIGFA應(yīng)用中，微孔濾膜會(huì)吸附蛋白質(zhì)，在滲濾和標(biāo)記的過程中與抗原和抗體結(jié)合，免疫反應(yīng)的速度將會(huì)逐漸加快，膠體金的顏色變化也更加明顯。在CGEIA應(yīng)用中，借助免疫層析條，免疫層析條中包含玻璃纖維膜、硝酸纖維膜等，將它們按照一定的順序粘貼在支持物上，切成條狀后可以用于檢測(cè)。在檢測(cè)過程中，將層析條插入待檢液，觀察顏色變化。其主要原理為：液體中的抗原與免疫層析條發(fā)生反應(yīng)，形成一種復(fù)合物，復(fù)合物在毛細(xì)作用下達(dá)到硝酸纖維膜，形成新的檢驗(yàn)區(qū)。該方法簡(jiǎn)便快捷，具有較高的敏感性，應(yīng)用十分廣泛。

2　免疫膠體金技術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

2.1免疫膠體金技術(shù)用于家禽疫病診斷

利用免疫膠體金試驗(yàn)，對(duì)病死鴿棉試子樣品進(jìn)行檢測(cè)，判斷鴿群的發(fā)病原因，排除禽流感病原，進(jìn)一步鑒定后發(fā)現(xiàn)鴿群患副黏病毒病。針對(duì)禽Ⅰ型副黏病毒感染的鵝群，應(yīng)用免疫膠體金試驗(yàn)診斷，結(jié)果表現(xiàn)為禽流感陰性，結(jié)合實(shí)際臨床癥狀和病變的情況，對(duì)病毒進(jìn)行分離和鑒定，實(shí)現(xiàn)了對(duì)副黏病毒病的快速鑒別診斷。選擇15nm的膠體金顆粒進(jìn)行診斷，作為標(biāo)記物后，植被出雞減蛋綜合征病毒檢驗(yàn)試條，可以快速檢驗(yàn)出雞減蛋綜合征病毒。采用膠體金標(biāo)記純化的羊抗鼠IgG，應(yīng)用加強(qiáng)免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)判斷雞傳染性支氣管炎病毒，具有快速、敏感、簡(jiǎn)易的特點(diǎn)。應(yīng)用免疫膠體金試膜檢測(cè)傳染性法氏囊病毒，可以快速識(shí)別出不同的毒株，為病毒檢測(cè)開辟了新的路徑［2］。

2.2免疫膠體金技術(shù)用于犬病毒診斷

應(yīng)用檸檬酸三鈉法制備出膠體金顆粒，對(duì)純化的犬細(xì)小病毒的單克隆抗體進(jìn)行可靠標(biāo)記，將犬細(xì)小病毒多克隆抗體加在玻璃纖維膜上，制作成犬細(xì)小病毒的快速診斷試條，研制出犬細(xì)小病毒抗原的快速診斷方法，對(duì)犬糞便進(jìn)行檢測(cè)，與血凝試驗(yàn)的結(jié)果相比，試條檢驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)為陽性，試條與犬瘟熱病毒和肝傳染性病毒并沒有出現(xiàn)交叉反應(yīng)，試條保存一段時(shí)間后，檢測(cè)結(jié)果與之前的檢測(cè)結(jié)果相比具有較高的重復(fù)性。另外，應(yīng)用檸檬酸三鈉還原的方法植被出免疫膠體金顆粒，對(duì)狂犬病毒的單克隆抗體進(jìn)行可靠標(biāo)記，制作成免疫層析試條，在實(shí)際研究中發(fā)現(xiàn)，診斷試條與狂犬病毒的抗原產(chǎn)生特異性反應(yīng)，不會(huì)與肝傳染性病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)。與酶聯(lián)免疫法相比，該診斷試條對(duì)可疑狂犬病毒檢測(cè)后的重復(fù)率為90%，該診斷試條適用于狂犬病毒抗原的檢測(cè)。

3　結(jié)束語

目前，獸醫(yī)臨床檢測(cè)中以血清檢測(cè)方法為主，但是該方法耗時(shí)較長(zhǎng)、操作過程中復(fù)雜，適用性較低。免疫膠體金技術(shù)具有方便快捷、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，在近代醫(yī)學(xué)上受到了廣泛的關(guān)注，在動(dòng)物疾病診斷過程中，免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。在不同標(biāo)記方法不斷發(fā)展的過程中，免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)的靈敏度也在不斷提高，同時(shí)也會(huì)實(shí)現(xiàn)多元化檢測(cè)，增強(qiáng)了在獸醫(yī)臨床方面的應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

［1］ 張鳳珍.免疫膠體金技術(shù)的基本原理及其在獸醫(yī)臨床中應(yīng)用的研究進(jìn)展［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2012，（1）：7.

［2］ 藺俐仲，徐春志，靳朝，等.免疫膠體金技術(shù)及其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，28（2）：10.

作者簡(jiǎn)介：許麗（1979-），女，四川省南充市高坪區(qū)人，大專學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，現(xiàn)在四川省南充市高坪區(qū)長(zhǎng)樂畜牧獸醫(yī)站從事畜牧獸醫(yī)工作。