新城疫病毒的最新研究進(jìn)展

肖華平黃 忍魏 培楊瑞峰范建華

（1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 26104；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，江蘇揚(yáng)州 225125）

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新城疫病毒的最新研究進(jìn)展

肖華平1黃 忍1魏 培1楊瑞峰1范建華2

（1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 26104；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，江蘇揚(yáng)州 225125）

［摘 要］本文從新城疫病毒的理化特性、生物學(xué)特性，以及目前主要的診斷、鑒定方法等多方面進(jìn)行了綜述，為今后進(jìn)一步開(kāi)展該病毒的防控技術(shù)研究，提供了科學(xué)的參考和依據(jù)。

［關(guān)鍵詞］新城疫病毒理化特性生物學(xué)特性

新城疫（Newcastledisease，ND）也稱亞洲雞瘟，是由血清1型禽副黏病毒（即新城疫病毒）引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為主要病變特征的高度接觸性、急性敗血性傳染病。除家禽外，至少有236種鳥(niǎo)可以自然或?qū)嶒?yàn)室感染，是危害養(yǎng)禽業(yè)最重要的傳染病之一，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部在2008年頒布的動(dòng)物疫病病種目錄中，也將其列為一類動(dòng)物疫病。

1　理化特性

新城疫病毒屬于副黏病毒科、副黏病毒亞科、腮腺炎病毒屬的成員，是Ⅰ型禽副粘病毒的代表株。

1.1形態(tài)結(jié)構(gòu)

病毒顆粒在電鏡下呈多形性，直徑為100～250 nm，常見(jiàn)有橫斷面100 nm左右的細(xì)絲。囊膜上的纖突長(zhǎng)約8 nm，纖突能刺激宿主產(chǎn)生中和抗體。核衣殼直徑為17～18 nm，呈多盤繞的竹狀結(jié)構(gòu)，圍繞中央孔中心軸呈螺旋對(duì)稱排列，主要成分是病毒、RNA及與其相連的蛋白質(zhì)，其中RNA位于核衣殼中央。

1.2抵抗力

一般來(lái)說(shuō)新城疫病毒對(duì)理化因素的抵抗力較強(qiáng)，37℃可存活7～9d，雞糞內(nèi)病毒50℃可存活5個(gè)半月，雞肉內(nèi)的病毒15℃可存活98d，骨髓內(nèi)病毒可存活134d。NDV對(duì)酸、堿的耐受力較強(qiáng)，在pH2和pH10條件下可存活數(shù)小時(shí)；在ND爆發(fā)后經(jīng)28周仍能從蛋殼、羽毛和雞舍及雞舍內(nèi)物品中分離到NDV。3%～5%來(lái)蘇爾、酚和甲醛等化學(xué)試劑5min可將裸露的病毒粒子滅活，在37℃孵化器內(nèi)，0.1%福爾馬林熏蒸6h便可將其滅活。

1.3培養(yǎng)特性

新城疫病毒易在9～11日齡雞胚絨毛尿囊膜上或尿囊腔中生長(zhǎng)，特別是SPF雞胚經(jīng)常用來(lái)分離和復(fù)制病毒。因毒力不同，新城疫病毒致死雞胚的時(shí)間差異較大，強(qiáng)毒株常在24～72 h內(nèi)致死雞胚，呈現(xiàn)全身性出血性病變及腦炎。

2　生物學(xué)活性

2.1血凝性

由于新城疫病毒其囊膜表面的HN糖蛋白與紅細(xì)胞表面的受體結(jié)合，新城疫病毒可凝集所有兩棲類、爬行類、禽類及小鼠、豚鼠的紅細(xì)胞，但凝集牛、綿羊、豬、馬及人O型血紅細(xì)胞的能力則隨毒株或血清型的不同而異。

2.2神經(jīng)氨酸酶活性

神經(jīng)氨酸酶是HN蛋白的一部分，該酶的明顯作用是將病毒逐漸從紅細(xì)胞上洗脫下來(lái)。有研究指出該酶還可作用于受體位點(diǎn)，使F蛋白充分接近細(xì)胞而發(fā)生病毒與細(xì)胞膜的融合。根據(jù)病毒凝集的雞紅細(xì)胞洗脫率可將新城疫病毒分離株分為快洗脫型和慢洗脫型。

2.3細(xì)胞融合與溶血活性

新城疫病毒和其他副粘病毒可通過(guò)同一機(jī)制引起紅細(xì)胞溶解或細(xì)胞融合。在病毒復(fù)制時(shí)，病毒囊膜附著于細(xì)胞表面的受體位點(diǎn)，進(jìn)而引起病毒囊膜與細(xì)胞膜的融合，進(jìn)而導(dǎo)致兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的融合。僵硬紅細(xì)胞膜常因與病毒之間的膜融合而導(dǎo)致溶解。同血凝活性一樣，細(xì)胞融合與溶血活性也可被特異性抗血清所抑制。

2.4其他生物學(xué)活性

新城疫病毒不僅有誘導(dǎo)干擾素生成的作用，還具有抗腫瘤免疫、引起細(xì)胞凋亡的特性。因此這使NDV在腫瘤治療及有關(guān)衰老機(jī)理的研究等方面?zhèn)涫苤匾暋?/p>

3　新城疫的診斷與鑒定

3.1血清學(xué)診斷

引起家禽傳染病的某些病毒，例如雞新城疫病毒、A 型禽流感病毒，由于具有血凝素，可以使雞或其他一些動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，稱為紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。如果在這些病毒懸液中先加入特異性的免疫血清，則病毒凝集紅細(xì)胞的作用被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制現(xiàn)象。紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)常用于測(cè)定病毒的含量，例如常用于新城疫病毒初步診斷的HA和HI試驗(yàn)。

3.2單克隆抗體技術(shù)

Alexander 等應(yīng)用針對(duì)表面糖蛋白的單克隆抗體來(lái)進(jìn)行強(qiáng)毒株的鑒定和分型，以及區(qū)別抗原性的變異。曹殿軍等用單克隆抗體對(duì)強(qiáng)、弱毒株的鑒定進(jìn)行了研究。他們所建立的單克隆抗體1F10、6G2、2A7及1F1與中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F48E9、6 株分離的黑龍江強(qiáng)毒株及Ⅰ系毒呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，而與LaSota 和V4 等弱毒株呈陰性反應(yīng)，證明所建立的單抗是具有強(qiáng)毒特異性的單抗。于圣青、陳昌海和盧建紅等建立了從臨床樣品中快速診斷NDV 強(qiáng)毒感染的單抗夾心ELISA。吳紅專等在單抗夾心ELISA 和單抗PEG2ELISA 的基礎(chǔ)上首次建立了快速診斷NDV 強(qiáng)毒感染的EL ISA 試劑盒。單克隆抗體試劑盒能快速確定雞群中是否存在強(qiáng)毒感染而不進(jìn)行病毒分離和生物學(xué)試驗(yàn)，且操作方便。因此，它在非典型新城疫的確診、強(qiáng)毒感染檢測(cè)及新城疫流行病學(xué)研究等方面具有廣闊應(yīng)用前景。

3.3RNA 指紋圖譜法

Mcmillar 等首先用RNA 指紋圖譜法對(duì)LaSota 株進(jìn)行了分析。其方法是用T1Rnase 酶降解病毒RNA，然后在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行二維電泳并放射自顯影，得到RNA 各片段的分布圖。隨后他們又對(duì)許多株進(jìn)行了分析，確定了其圖譜和同源性。由此提出，RNA 指紋圖譜法可作為NDV 檢測(cè)和分析的一種手段。

3.4核酸探針技術(shù)

JareckiBlack 設(shè)計(jì)了2 個(gè)探針，該探針的長(zhǎng)度為21 個(gè)堿基，與強(qiáng)毒株的F 蛋白裂解位點(diǎn)基因互補(bǔ)，可與11 個(gè)速發(fā)性毒株、5 個(gè)中發(fā)性毒株的RNA 雜交，而不與所有7 個(gè)弱毒株的RNA 雜交，說(shuō)明該探針能將弱毒株從強(qiáng)毒和中毒中區(qū)分出來(lái)。Angela利用RTPCR 擴(kuò)增出362 bp 的包括F 蛋白裂解位點(diǎn)序列的片段，制備成了相應(yīng)的探針，并用PCR 產(chǎn)物同型特異性探針來(lái)區(qū)分德國(guó)流行的強(qiáng)、弱毒株。賀東生等根據(jù)F0基因的高度區(qū)特異位點(diǎn)，設(shè)計(jì)并合成了一段含48 bp 的寡核苷酸，經(jīng)光生物素標(biāo)記后制備探針，成功地雜交檢測(cè)了NDV 強(qiáng)毒株和弱毒株。用核苷酸探針?lè)椒ㄨb別NDV 毒株，關(guān)鍵在于被標(biāo)記的寡核苷酸的設(shè)計(jì)，要求寡核苷酸處于高變區(qū)并與弱毒株的同源性差別大。寡核苷酸探針能特異地鑒別強(qiáng)、弱毒株，在臨床診斷和進(jìn)出口檢疫等方面都有較大的潛在用途。

3.5RT-PCR 技術(shù)

Kant 等用RT-PCR 對(duì)11個(gè)新城疫強(qiáng)毒株、4 個(gè)新城疫弱毒株進(jìn)行擴(kuò)增，該方法與傳統(tǒng)方法檢測(cè)結(jié)果基本吻合，且不需要雞胚接種，節(jié)省了時(shí)間，24 h 內(nèi)可出結(jié)果，為新城疫毒株的區(qū)別診斷提供了手段。閻玉河等根據(jù)新城疫毒株基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及毒株F0蛋白裂解位點(diǎn)的序列差異設(shè)計(jì)了2 對(duì)引物，建立了快速診斷新城疫并能鑒別新城疫強(qiáng)、弱毒株的RT-PCR 技術(shù)；該法不僅可以對(duì)雞胚尿囊液進(jìn)行檢測(cè)，還可以直接用病雞組織勻漿進(jìn)行檢測(cè)，并具有較好的特異性和靈敏性。曹殿軍等根據(jù)新城疫毒株的F 基因的核苷酸序列差異，分別設(shè)計(jì)合成了兩組引物，建立了可以迅速鑒別NDV強(qiáng)、弱毒株的RT-PCR 方法，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程可在5 h 內(nèi)完成；他們還進(jìn)一步建立了直接從組織病料中檢測(cè)并鑒別強(qiáng)、弱毒株的方法。RT-PCR技術(shù)由于靈敏度高，特異性好，能夠區(qū)別強(qiáng)、弱毒株，在新城疫的診斷和流行病學(xué)普查方面頗具潛力。

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