非洲豬瘟的研究進(jìn)展及風(fēng)險分析

劉建利，李　宏，曹琛福，孫　潔，楊俊興，張彩虹，陳澤華，花群義，呂建強(qiáng)

（1.深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心，廣東 深圳 518405；2.伊金霍洛旗獸醫(yī)局，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000）

非洲豬瘟的研究進(jìn)展及風(fēng)險分析

劉建利1，李宏2，曹琛福1，孫潔1，楊俊興1，張彩虹1，陳澤華1，花群義1，呂建強(qiáng)1

（1.深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心，廣東 深圳 518405；2.伊金霍洛旗獸醫(yī)局，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000）

1　傳播歷史和地理分布

非洲是非洲豬瘟（ASF）的發(fā)源地，1921年肯尼亞首次報道ASF疫情。此后，ASF從非洲的東部、南部穿過非洲中部向西部蔓延到非洲絕大部分國家［1］，并且向外傳播至印度洋島。1998年傳到了馬達(dá)加斯加。2007年傳到了距馬達(dá)加斯加800公里的毛里求斯［2］。

1957年ASF第一次傳入歐洲葡萄牙后，ASF相繼在西班牙、意大利、法國、馬耳他、比利時、安道爾、荷蘭、德國、俄羅斯、烏克蘭（2012年）、白俄羅斯（2013年）［3］等國家流行暴發(fā)。2007年，處于歐亞接壤的高加索地區(qū)的亞美尼亞、格魯吉亞暴發(fā)ASF，并向鄰近的阿塞拜疆和俄羅斯聯(lián)邦車臣邊境地區(qū)、北奧賽梯、印古什共和國、奧倫堡等多地傳播。2015年OIE又報道ASF暴發(fā)于立陶宛、波蘭、拉脫維亞和愛沙尼亞。ASF已經(jīng)蔓延到整個波羅的海地區(qū)。

1971年，ASF首次傳入南美洲大陸的古巴，此后多米尼加共和國、海地、巴西相繼出現(xiàn)ASF疫情。目前其他大陸還沒有發(fā)生疫情的報道，但有繼續(xù)向世界各國蔓延的趨勢。

2　分子流行病學(xué)

ASFV是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)復(fù)制的復(fù)雜的雙鏈DNA大病毒。ASFV基因組大小在170～192 kbp之間，編碼多達(dá)165個基因。已被鑒定的結(jié)構(gòu)蛋白有28種，在被感染的巨噬細(xì)胞中能產(chǎn)生超過150余種蛋白質(zhì)，并且這些抗原有許多具有免疫原性［4］，其中至少50種能與感染豬或康復(fù)豬的血清反應(yīng)，40種能與病毒粒子相結(jié)合。

通過研究基因型差異，分析毒株在全球的分布以及流行趨勢。對B646L基因（該基因高度保守，它能編碼一個主要的結(jié)構(gòu)蛋白VP72）部分測序鑒定出ASFV至少有22個基因型，且每個基因型之間差異很小，其中有20個基因型僅存在于非洲東部和南部［5］。這些在不同地理區(qū)域發(fā)現(xiàn)和分離到的不同的毒株的異同與3種不同的ASFV傳播途徑的存在有關(guān)。通過分析B602L開放閱讀框里面的中部可變區(qū)域CVR（如E183L編碼的P54蛋白，CP204L編碼的P30蛋白），區(qū)分出了基因型里一些亞群［6-8］。以此用來追蹤疾病的暴發(fā)。

ASFV的有些基因型僅具有地方特異性，而有些毒株卻能跨域傳播［5］。ASFV-II型基因型很可能是從莫桑比克傳到馬達(dá)加斯加，此后這個病毒在馬達(dá)加斯加一直保持其獨特的基因型［9-10］。在毛里求斯分離到的病毒也被認(rèn)為是屬于另一種ASFV-II型基因型。而在非洲西部和中部分離到的所有的ASFV均屬于ASFV-I型基因型［9］。在非洲東部和南部的叢林宿主體內(nèi)也能分離到相同的ASFV-I型基因型毒株［5，11］。馬拉維和贊比亞流行基因型VIII型，高加索和俄羅斯流行基因型II型。Gallardo C等［12］從4頭臨床上感染ASFV的野豬體內(nèi)取樣進(jìn)行遺傳特征分析，從立陶宛和波蘭得到的ASFV病毒內(nèi)包含p72 II型基因型，與從歐洲東部獲得的ASFV序列具有100%的同源性。這個基因型自2007年傳入至格魯吉亞后一直流行于歐洲東部國家。

3　疫苗

2014年靳雯雯等［13］以巨細(xì)胞病毒極早期啟動子和經(jīng)水泡性口炎病毒G蛋白修飾過的pFastBacI桿狀病毒為載體構(gòu)建了ASFV VP73基因桿狀病毒載體疫苗，該重組桿狀病毒能夠介導(dǎo)ASFV VP73蛋白在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)。2014年Lacasta A等［14］構(gòu)建DNA疫苗（編碼了3個融合在泛素中的ASFV抗原：p54、p30和胞外域血細(xì)胞凝集素），包含4 000多個質(zhì)?？寺〉谋磉_(dá)文庫，每一文庫都隨機(jī)包含有一個病毒基因組的Sau3AI限制性片段。用強(qiáng)毒E75株攻毒用基因文庫免疫的豬場能夠獲得60%的保護(hù)率。2014年Blome S等［15］分別用佐劑PolygenTM和Emulsigen（?）-D制備ASFV病毒滅活疫苗“亞美尼亞08”，并免疫6頭斷奶仔豬，用ASFV同源強(qiáng)毒株攻毒，結(jié)果6頭豬都發(fā)生了嚴(yán)重的致死性的ASF，表明現(xiàn)代的佐劑不能提高制備的非洲豬瘟滅活疫苗的功效。

2013年Abrams C C等［16］從ASFV弱毒株OUR T88/3基因組中剔除兩個基因DP71L和DP96R，形成重組基因后的病毒OUR T88/3ΔDP2。用病毒重組體OUR T88/3ΔDP2和親代病毒OUR T88/3免疫兩組豬，然后用強(qiáng)毒株OUR T88/1攻毒。接種病毒重組體的一組中有4頭豬（66%）被保護(hù)，而接種親代病毒的一組的保護(hù)力為100%。從OUR T88/ 3毒株中刪除DP71L和DP96R基因能夠降低了豬對強(qiáng)毒株的防范能力，表明從強(qiáng)毒株中刪除這些基因能夠減少ASFV對家豬的毒性。2015年O′，Donnell V等［17］構(gòu)建重組病毒（ASFV-G-ΔMGF），刪除了MGF360和MGF505基因的ASFV-G對豬的毒性減弱并且對其親代病毒也能產(chǎn)生防御保護(hù)作用。2015年O′，Donnell V等［18］構(gòu)建一種重組ASFV，刪除了毒性相關(guān)基因9GL（B119L）的ASFV-G。當(dāng)使用較低劑量時，該病毒對豬的毒性減弱并誘導(dǎo)豬對該病毒的同源病毒產(chǎn)生有效的保護(hù)力。

4　檢測技術(shù)

2014年曹琛福等［19］純化ASFV p54蛋白作包被抗原，建立檢測ASFV p54抗體的間接ELISA方法，結(jié)果具有良好的特異性、敏感性。2014年靳雯雯等［20］以基因工程表達(dá)的ASFV VP73蛋白作為包被抗原，建立檢測豬血清中抗ASFV VP73蛋白的抗體的間接ELISA方法。該方法對ASF標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的檢測靈敏度可以達(dá)到1∶2 560。2014年張鑫宇等［21］純化出重組蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L，間接ELISA篩選最佳診斷抗原，發(fā)現(xiàn)pK205R、p54和pB602L血清學(xué)反應(yīng)良好，可用于ASFV感染后早期或中后期血清學(xué)診斷。2014年張鑫宇等［22］建立ASFV p54抗體的膠體金檢測方法。顯示在ASFV感染早期，膠體金試紙優(yōu)于OIE推薦間接ELISA檢測方法。2015年張彩虹等［23］以ASFV VP73融合蛋白作為抗原免疫蛋雞，制備抗非洲豬瘟病毒VP73蛋白的特異性IgY抗體。該抗體可與非洲豬瘟病毒VP73蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，具有免疫反應(yīng)原性。

2010年John McKillen等［24］建立了MGB PCR檢測方法，該方法能夠檢測全血、脾臟和肉漿里面的ASFV，其靈敏性與OIE推薦的Taq Man PCR的靈敏性相似，比OIE推薦的常規(guī)PCR靈敏性高10倍。2010年James H E等［25］針對拓?fù)洚悩?gòu)酶II基因建立的檢測ASFV的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法，最低可以檢測到330個拷貝DNA的病毒。2011年楊吉飛等［26］基于ASFV VP72基因設(shè)計引物，建立的PCR方法能夠成功擴(kuò)增非洲豬瘟病毒17個分離株的基因組，其敏感性與OIE參考的方法相當(dāng)。2012年崔尚金等［27］采用納米金顆粒作為熱導(dǎo)介子，建立ASFV的高效納米PCR檢測方法，可以同時檢測ASFV等7種病毒細(xì)菌。2013年苗富春［28］針對ASFV p72蛋白部分基因序列，采用簡并堿基提高檢測范圍建立TaqMan模式的并聯(lián)熒光定量PCR方法。檢測靈敏度均可達(dá)到103ng/ μL。2015年Grau F R等［29］建立了能同時鑒別ASFV、CSFV和FMDV的多重實時熒光PCR方法，ASFV在接種后第3天就能被檢測到，早于出現(xiàn)臨床癥狀2～3 d。

5　風(fēng)險分析

我國尚未見有非洲豬瘟病例的報道，但ASF一旦侵入，將對我國豬及其產(chǎn)品的生產(chǎn)帶來毀滅性的打擊。從我國周邊ASF的流行狀況、ASF的傳播媒介和我國與世界交流三個方面分析，ASF傳入我國的風(fēng)險性在不斷地加大。

首先處于歐亞接壤的高加索地區(qū)和俄羅斯聯(lián)邦多地已暴發(fā)ASF，我國與俄羅斯有著漫長的邊境線，存在攜帶ASFV的野豬跨境傳播病毒到我國無疫病區(qū)的可能；其次我國橫跨寒、溫、亞熱和熱帶地域，氣候條件多樣，具有ASF媒介蜱的生存條件。我國西南、華東和華中等地區(qū)為軟蜱高發(fā)生區(qū)［30］，動物與蜱接觸機(jī)會較多，具有ASF傳播的媒介條件；再者我國與世界的貿(mào)易往來和人員交流日益頻繁，很可能將污染的豬肉、豬肉制品或飼料產(chǎn)品通過機(jī)場、海港等渠道將ASFV帶到國內(nèi)。

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S852.65+1

A

0529-6005（2016）04-0077-03

2015-06-11

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃）（2012AA101-301）

劉建利（1982-），男，獸醫(yī)師，碩士生，從事動物檢疫工作，E-mail：56546521@qq.com

呂建強(qiáng)，E-mail：312899963@qq.com