金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測(cè)定

張翠蘭馬 榮

（1 徐州市銅山區(qū)中醫(yī)院藥劑科，江蘇 徐州 221116；2 江蘇頤海藥業(yè)化驗(yàn)室，江蘇 徐州 221116）

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金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測(cè)定

張翠蘭1馬 榮2

（1 徐州市銅山區(qū)中醫(yī)院藥劑科，江蘇 徐州 221116；2 江蘇頤海藥業(yè)化驗(yàn)室，江蘇 徐州 221116）

【摘要】目的 探討金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測(cè)定。方法 制備金雞顆粒處方，選擇TLC法對(duì)處方中功勞木、金櫻根以及穿心蓮進(jìn)行鑒別，選擇HPLC方法對(duì)功勞木中含有的鹽酸小檗堿進(jìn)行測(cè)定，對(duì)測(cè)定結(jié)果以及鑒別效果進(jìn)行分析。結(jié)果 金雞顆粒的薄層鑒別方法具有良好的分離度，且專屬性比較強(qiáng)，簡(jiǎn)單方便；0.0197～0.1471 μg（r=0.9998）是鹽酸小檗堿的線性范圍，計(jì)算平均回收率為99.7%，RSD=0.9%。結(jié)論 所選擇的方法適用于金雞顆粒的質(zhì)量控制，可廣泛推廣使用。

【關(guān)鍵詞】鹽酸小檗堿；薄層鑒別；金雞顆粒

金雞顆粒主要是由功勞木、雞血藤、金櫻根、穿心蓮、兩面針等中藥材中提取出來(lái)的，具有健脾利濕、活血通絡(luò)、清熱解毒的重要功效，針對(duì)濕熱下注導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、附件炎等具有良好的治療效果［1］。為成品質(zhì)量有所保障，本文采用HPLC法對(duì)功勞木中的鹽酸小檗堿進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)采用TLC法對(duì)穿心蓮、金櫻根、功勞木等中藥材進(jìn)行鑒別。上述方法重復(fù)使用性較強(qiáng)，可充分保證產(chǎn)品質(zhì)量控制［2］。

1 實(shí)驗(yàn)操作部分

1.1 儀器準(zhǔn)備和試藥方法：采用Waters1515型高效液相色譜儀系統(tǒng)以及北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的TU-1901雙波束紫外分光光度儀作為本次實(shí)驗(yàn)的設(shè)備［3］。鹽酸小檗堿對(duì)照品和穿心蓮、金櫻根、功勞木等有關(guān)對(duì)照藥材；分析純作為試劑；水選擇重蒸餾水；乙晴作為色譜純。

1.2 金雞顆粒的基礎(chǔ)方以及制備的基本方法。金雞顆?；A(chǔ)方：雞血藤1000 g，穿心蓮150 g，蔗糖粉2000 g，功勞木525 g，千斤拔525 g，兩面針200 g，金櫻根525 g。上述藥材稱好之后，以水煎煮4 h左右，待合并濾液之后，將其濃縮至適量，向其中加乙醇，直至含醇量高達(dá)60%后方可停止，攪拌均勻，安靜放置24 h后，進(jìn)行再次過(guò)濾，將乙醇回收，并將其濃縮至溫度在40～50 ℃的相對(duì)密度為1.3～1.4的浸膏，加入2000 g蔗糖進(jìn)行充分混合，利用制粒機(jī)將其制作成只能通過(guò)1-2號(hào)的篩網(wǎng)顆粒狀，并將其放置在溫度在60 ℃以下的烘箱之中進(jìn)行干燥，采用1-3號(hào)對(duì)整粒進(jìn)行篩選，待分裝結(jié)束后即可得到實(shí)驗(yàn)中需要的樣品。

1.3 薄層鑒別情況

1.3.1 鑒別穿心蓮：將作為對(duì)照組藥材的穿心蓮取1 g進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在其中加入15 mL甲醇，對(duì)其進(jìn)行回流加熱15 min左右，待濾液完全蒸干之后，取出殘?jiān)⒃谄渲屑尤? mL甲醇，確保其充分溶解之后，將得到的溶液直接作為對(duì)照藥材溶液。參照《中國(guó)藥典》附錄ⅥB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［4］，將10 μL供試品溶液取出之后，直接將其點(diǎn)在規(guī)定的硅膠G薄層板上面，展開(kāi)劑采用氯訪-甲醇，逐漸展開(kāi)、取出并充分晾干之后，噴上2%二硝基苯甲酸乙醇溶液同時(shí)混合5%氫氧化鈉乙醇溶液。在供品色譜中，在和對(duì)照藥材色譜與之相應(yīng)的位置之上，會(huì)呈現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)。

1.3.2 鑒別功勞木：選擇一定量的金雞顆粒研制成細(xì)末狀，取出3 g細(xì)末并與30 mL甲醇充分融合，對(duì)其進(jìn)行15 min加熱回流，待過(guò)濾之后將濾液完全蒸干，選擇其中的20 mL殘?jiān)蜐舛葹?%的鹽酸溶液進(jìn)行充分融合，進(jìn)而進(jìn)行過(guò)濾。采用分液漏斗作為濾液的裝置，使用濃氨試液將其調(diào)制成pH=10，同樣經(jīng)過(guò)氯仿加以提取，待其完全與氯仿融合之后將溶液取出，進(jìn)行蒸干，取其殘?jiān)? mL甲醛融合，以將其作為實(shí)驗(yàn)需要的供試品溶液。另外還需要取0.4 g功勞木當(dāng)做對(duì)照藥材，加入甲醇15 mL，加熱回流15 min，進(jìn)而過(guò)濾，將濾液蒸干之后取殘?jiān)尤? mL甲醛溶解，以此作為對(duì)照藥材溶液。取鹽酸小檗堿對(duì)照品，在其中加入甲醛之后使之成為實(shí)驗(yàn)需要的對(duì)照品溶液。嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》附錄ⅥB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)要求選取其中的10 μL作為供試品溶液之一，直接將其點(diǎn)在規(guī)定的硅膠G薄層板上面，展開(kāi)劑采用丁醇-冰醋酸水，逐漸展開(kāi)、取出并充分晾干之后，將其直接放置在紫外光燈下，然后進(jìn)行檢視。通過(guò)和試品色譜進(jìn)行對(duì)比分析，并在于該試品色譜中與之相對(duì)應(yīng)的位置上面，會(huì)體現(xiàn)出黃色的熒光斑點(diǎn)。

1.3.3 鑒別金櫻根：取適量金雞顆粒，將其研成細(xì)末狀，取3 g融合30 mL甲醇，利用超聲進(jìn)行處理，并將得到的濾液進(jìn)行蒸干，取適量殘?jiān)蠛?0 mL氫氧化鈉溶液進(jìn)行融合，通過(guò)微熱的方式使之完全溶解，在其中放入乙醚10 mL，振搖之后進(jìn)行提取，然后放棄乙醚提取液，繼續(xù)采用乙酸乙酯10 mL再次進(jìn)行振藥提取，進(jìn)而提取1 mL醋酸乙酯濃縮液，并將其作為實(shí)驗(yàn)需要的供試品溶液。另外要提取對(duì)照藥材2.5 g，制作方法和上述方法相一致。參照《中國(guó)藥典》附錄ⅥB薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取10 μL供試品溶液，將其分別點(diǎn)在同一硅膠G薄層板之上，采用氯仿-甲醇作為展開(kāi)劑，依次展開(kāi)、取出、晾干之后，噴上10%硫酸乙醇溶液，將其放置在105 ℃加熱，直至斑點(diǎn)清楚顯色為止。在試品色譜中，在和對(duì)照藥材色譜與之相應(yīng)的位置之上，會(huì)呈現(xiàn)紫紅色斑點(diǎn)。

1.4 測(cè)定鹽酸小檗堿

1.4.1 確定色譜需要條件：色譜柱是Diamonsil C18（4.6 mm×150 mm， 5 μm），流動(dòng)相設(shè)置為0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（70∶30），檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm；流速1 mL/min，柱溫為30 ℃［4］。

1.4.2 制備溶液：精密稱取適量鹽酸小檗堿對(duì)照品，加入乙醇制成10 μg/mL對(duì)照溶液。采用相同工藝將其制備成金雞顆粒（不含功勞木），以同樣的方法制成陰性對(duì)照品溶液。取適量金雞顆粒，將其研成細(xì)粉，過(guò)100目篩，以精密稱取的方式稱取0.2 g，放置在25 mL量瓶中，加入20 mL鹽酸-甲醇溶液，采用超聲處理20 min，放冷之后加入甲醇定容，經(jīng)過(guò)濾之后取續(xù)濾液進(jìn)行離心，進(jìn)而得到供試品溶液。

1.4.3 方法專屬性分析：嚴(yán)格按照上述色譜條件，分別對(duì)陰性對(duì)照、鹽酸小檗堿以及供試品對(duì)照溶液進(jìn)行測(cè)定。若看見(jiàn)色譜基線未發(fā)生任何異常，分離度基本保持良好，則充分表示陰性對(duì)照情況并沒(méi)有受到嚴(yán)重干擾。

1.4.4 對(duì)線性關(guān)系進(jìn)行分析：準(zhǔn)確量取鹽酸小檗堿，將劑量為10 μg/mL甲醇融入制成溶液進(jìn)行對(duì)照，之后針對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行精密吸入，控制劑量為2 μL、8 μL、12 μL以及15 μL。對(duì)上述色譜條件進(jìn)行詳細(xì)研究，針對(duì)峰面積進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。最終將得出的峰面積當(dāng)作縱坐標(biāo)，選擇μg當(dāng)作橫坐標(biāo)，實(shí)施線性回歸分析，最終回歸方程為：Y=7.117 ×106X-1.483×104（r=0.9998），最終結(jié)果表明，鹽酸小檗堿線性范圍為0.0197～0.1471 μg（r=0.9998），同峰面積之間表現(xiàn)出顯著的線性關(guān)系。

1.4.5 對(duì)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行分析：選擇供試品共計(jì)6份，對(duì)其進(jìn)行精密稱定之后，通過(guò)上述方法測(cè)定其中含有的鹽酸小檗堿數(shù)量，其平均值界定為1.4.1 mg/g，RSD=1.8%，這足以說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中采用的分析方法精密度符合良好標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)異常。

1.4.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)情況：精密吸取10 μL制定好的供試品溶液，在0、2、4、8、16 h時(shí)進(jìn)樣，對(duì)鹽酸小檗堿峰的面積進(jìn)行測(cè)定，RSD=1.6%，這充分表明供試品溶液在16 h內(nèi)至少比較穩(wěn)定。

2 結(jié) 果

金雞顆粒的薄層鑒別方法具有良好的分離度，且專屬性比較強(qiáng)，簡(jiǎn)單方便；0.0197～0.1471 μg（r=0.9998）是鹽酸小檗堿的線性范圍，計(jì)算平均回收率為99.7%，RSD=0.9%。

3 討 論

金雞顆粒原標(biāo)準(zhǔn)中已經(jīng)相應(yīng)的記錄了有關(guān)功勞木、穿心蓮等TLC鑒別以及與之相關(guān)的理化鑒別，但對(duì)含量控制卻并沒(méi)有多少報(bào)道。若想使成品質(zhì)量得到保障并充分保證其臨床使用性能的安全可靠性，就需要改變?cè)|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文不僅對(duì)功勞木、穿心蓮進(jìn)行鑒別，同時(shí)還增加了對(duì)金櫻根的TLC鑒別，將鹽酸小檗堿作為其中的重要指標(biāo)之一，使用HPLC法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，所采用的方法具有良好的重復(fù)性，可將其推廣為金雞顆粒質(zhì)量控制的有效方法［5-6］。

參考文獻(xiàn)

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［6］ 余志剛，程培秀.金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測(cè)定［J］.華西藥學(xué)雜志，2010，25（1）:90-92.

中圖分類號(hào)：R282.710.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）03-0045-02