PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應(yīng)用研究

李春杰（盤錦市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 盤錦 124010）

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PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應(yīng)用研究

李春杰
（盤錦市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 盤錦 124010）

目的 分析PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應(yīng)用及價值。方法 選擇2013年7月至2015年6月之間來我院接受檢查和治療的117例人乳頭瘤病毒感染患者作為觀察對象。應(yīng)用PCR與第二代雜交式捕獲法HC 2對117例患者進行臨床檢查，結(jié)合病理學(xué)結(jié)果對兩種方式的診斷準確性及特異性結(jié)果予以對比。結(jié)果 熒光PCR法相對于第二代雜交式捕獲法HC 2對于CIN-HPV以及鱗狀上皮病變的檢出率更高，差異結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；此外，熒光PCR法的診斷特異性及敏感度均高于HC 2，差異結(jié)果同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。結(jié)論 PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中具有很高的應(yīng)用價值，對于臨床治療方案的確定具有較高的應(yīng)用價值。

PCR檢驗；HC 2；高危型人乳頭瘤病毒；CIN-HPV

人乳頭瘤病毒（HPV）感染據(jù)當(dāng)前認為的引發(fā)宮頸癌及癌前病變的主要因素，且大部分宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）伴隨有人乳頭瘤病毒感染［1］。據(jù)相關(guān)資料統(tǒng)計，90%以上的宮頸癌病理標本中都能夠檢出人乳頭瘤病毒DNA，在高危型感染中更為常見。因此，加強相關(guān)人群關(guān)于人乳頭瘤病毒感染的篩查與診斷，能夠在一定程度上促進宮頸疾病的防治，對于促進女性健康具有非常重要的價值［2］。臨床中高危型人乳頭瘤病毒有15種左右，主要檢查方法為HC 2。隨著技術(shù)的進步，熒光PCR在疾病診斷中產(chǎn)生積極作用。本文對117例人乳頭瘤病毒感染進行研究，探討PCR檢驗的臨床價值。

1　資料與方法

1.1一般資料：選擇2013年7月至2015年6月之間來我院接受檢查和治療的117例人乳頭瘤病毒感染患者作為觀察對象，患者的年齡在27～61歲，平均年齡為（34.7±6.2）歲；根據(jù)病理學(xué)結(jié)果有高度上皮內(nèi)鱗狀病變患者31例、不典型鱗狀細胞特征患者49例、低度上皮內(nèi)鱗狀病變37例。

1.2方法：在檢查之前，使用窺陰器將患者宮頸暴露出來，使用棉拭子對宮頸口分泌物進行擦拭，使用專用HPV宮頸刷對宮頸口進行收集，輕輕轉(zhuǎn)動4～5圈后獲得足量的上皮細胞樣本。隨后慢慢將宮頸刷取出，折斷后放入專用保存液中浸泡，標記之后送檢［4］。

PCR檢測方法：對117例患者的宮頸脫落細胞標本進行PCR檢驗，以13000轉(zhuǎn)/分的速度離心處理1 min之后，在沉淀物中加入50 μL裂解液，水浴加熱10 min后再次離心處理，去上層清液作為PCR模板。嚴格按照試劑盒上的說明書進行操作。HC 2法：首先對得到的宮頸上皮細胞標本DNA進行雙鏈解鏈處理，然后使用RNA探針進行雜交，得到的雜交體與特異性抗體結(jié)合、根據(jù)發(fā)光的強度與大小進行定量測定，計算得到雜交體的含量。HPV負荷量超過1.0 pg/mL的情況下可以判定為炎性，同樣嚴格按照說明書上的操作進行。

1.3統(tǒng)計分析：采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS22.0對文中得到的數(shù)據(jù)資料進行處理，檢驗結(jié)果等計數(shù)資料均使用百分比（%）的形式表示，比較通過χ2值檢驗。以P＜0.05代表不同檢測方法之間的結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義［5］。

2　結(jié) 果

2.1高危型HPV陽性檢出率結(jié)果差異：病理學(xué)檢測結(jié)果中，CIN Ⅰ有35例、CIN Ⅱ有21例、CIN Ⅲ有10例，鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者31例；通過熒光PCR法檢測得到的CIN Ⅰ有33例（94.29%）、CIN Ⅱ有19例（90.48%）、CIN Ⅲ有10例（100%），鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者17例（54.84%）；應(yīng)用HC 2檢驗結(jié)果顯示，CIN Ⅰ有30例（85.71%）、CIN Ⅱ有17例（80.95%）、CIN Ⅲ有10例（100%），鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者10例（32.26%）。熒光PCR法檢測宮頸病變的符合率為93.94%，對于炎性病變的檢出率為54.84%；HC 2對于宮頸病變的診斷符合率為86.36%，炎性病變檢出率為32.26%。對比兩組差異結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2兩種方法的診斷特異性與靈敏度對比：PCR法診斷高危HPV的特異度為91.4%、靈敏度為88.3%；而HC 2的特異度與靈敏度分別為72.1%和69.6%。對比兩種方法的診斷特異性與靈敏度差異結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3　討 論

宮頸癌是對女性健康威脅巨大的惡性腫瘤，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤占據(jù)第二位。其中人乳頭瘤病毒感染，是造成宮頸癌的主要致病因素，有研究提示，超過99.7%的宮頸癌患者存在人乳頭瘤病毒感染［6］。根據(jù)病毒與宮頸癌之間的關(guān)系，臨床中將HPV分為高危型和低危型，可引發(fā)外生殖器濕疣以及宮頸上皮內(nèi)病變。盡早發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒感染，加強對病毒情況的監(jiān)測是防治宮頸癌的主要手段［7］。大量的臨床研究證實，第二代雜交捕獲法對于人乳頭瘤病毒DNA具有較好的檢測效果，但是該方法的價格高昂，操作程序較為繁瑣，其應(yīng)用受到一定的限制。隨著技術(shù)的進步與創(chuàng)新，PCR則得到了更為廣泛的應(yīng)用，相對于HC 2，該方法的自動化程度更高、檢測的周期較短且具有較高的特異性，能夠為疾病的診斷與治療提供科學(xué)的臨床依據(jù)［8］。

本組中，應(yīng)用熒光PCR法對117例患者進行檢查，對于高危型HPV感染的診斷結(jié)果與病理學(xué)結(jié)果非常接近，對于炎性病變也具有較好的檢出率。此外，該技術(shù)手段的特異性和靈敏度均較高，對于HC 2的差異顯著，提示PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中具有較高的價值，值得推廣。

［1］ 南京柱,李秀娟,楊秀,等.6319例高危型人乳頭瘤病毒核糖核酸定量檢測的結(jié)果分析［J］.標記免疫分析與臨床,2012,19（2）：74-77.

［2］ 向華國,黎國,曾錦婷,等.PCR-反向點雜交技術(shù)在女性下生殖道人乳頭瘤病毒感染分型檢測的應(yīng)用研究［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2012,33（8）：916-917.

［3］ 蔡蘭蘭,李振雪,樊冰,等.人乳頭瘤病毒檢測在宮頸疾病中的診斷價值［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7（16）：1741-1742.

［4］ 涂海健,李勵軍,謝志勇,等.高危型及低危型人乳頭瘤病毒感染在宮頸病變的分布特征［J］.分子診斷與治療雜志,2012,4（2）：100-102.

［5］ 張海平,穆會君,謝平,等.多重實時熒光PCR技術(shù)檢測高危型人乳頭瘤病毒的臨床應(yīng)用分析［J］.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013,34（17）：2256-2258.

［6］ 陳炎添,陳青龍,熊燕,等.HR-HPV DNA PCR聯(lián)合TCT檢測對宮頸癌前病變的診斷價值［J］.檢驗醫(yī)學(xué),2013,28（6）：516-518.

［7］ 王洪珍,李峰,劉大標,等.鎮(zhèn)江地區(qū)女性高危型人乳頭瘤病毒感染的流行病學(xué)現(xiàn)狀與宮頸病變患病率調(diào)查［J］.中國婦幼保健,2014,2 9（31）：5141-5144.

［8］ 張立冬,張慧敏,劉美玲,等.細胞圖像DNA倍體分析結(jié)合高危型HPV、支原體和衣原體檢查與宮頸上皮內(nèi)瘤變相關(guān)性研究［J］.中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,2014,28（6）：433-436.

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1671-8194（2016）20-0103-02