環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及其在雞病珍斷中的應(yīng)用

魏曉媛　李杰峰　顏國(guó)華　楊玉增　房國(guó)芳　符　樂(lè)

(河北省畜牧獸醫(yī)研究所,河北保定　071000)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)及其在雞病珍斷中的應(yīng)用

魏曉媛李杰峰顏國(guó)華楊玉增房國(guó)芳符樂(lè)

(河北省畜牧獸醫(yī)研究所,河北保定071000)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated Isothermal Amplification,簡(jiǎn)稱LAMP)是一種體外等溫?cái)U(kuò)增核酸片段的新技術(shù),利用4條特異性引物,在BstdNA聚合酶的催化下能夠有效地?cái)U(kuò)增出靶基因.與常規(guī)PCR法相比該法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速準(zhǔn)確以及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疾病檢測(cè)中.此文綜述了LAMP技術(shù)原理及其在雞傳染性疾病病原檢測(cè)中的應(yīng)用,旨在為該技術(shù)的深入研究和應(yīng)用提供參考。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)雞病檢測(cè)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated Isothermal Amplification,簡(jiǎn)稱LAMP),是2000年由日本Notomi[1]等人研發(fā)的一種新穎的恒溫核酸擴(kuò)增方法,其最大的優(yōu)勢(shì)是省去了煩瑣的熱變性過(guò)程,通過(guò)BstDNA聚合酶的鏈置換反應(yīng)在等溫條件下即可完成擴(kuò)增反應(yīng).由于針對(duì)靶基因的6/8個(gè)特異性區(qū)域設(shè)計(jì)4/6條引物使其具有高度的特異性.LAMP具有高效、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單和廉價(jià)簡(jiǎn)易等優(yōu)點(diǎn),在1 h左右就可將靶基因擴(kuò)增109～1010倍.通過(guò)肉眼觀察到的白色衍生物-在DNA延伸合成時(shí)產(chǎn)生的焦磷酸鎂,就可確定靶基因的擴(kuò)增與否.LAMP擴(kuò)增技術(shù)適合一些偏遠(yuǎn)的基層機(jī)構(gòu),因?yàn)樗恍枰嘿F的儀器設(shè)備,對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不高,并且對(duì)操作人員的技術(shù)水平要求不高,所以,具有廣泛的推廣價(jià)值和應(yīng)用前景。

1　LAMP技術(shù)基本原理

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)(LAMP)是在等溫條件及BstDNA聚合酶的催化下利用4條特異性引物高效擴(kuò)增靶基因DNA.其反應(yīng)體系包括模板dNA、dNTPs、引物、BstdNA聚合酶和緩沖液,在60℃～65℃保溫60 min左右,然后在高于80°C的溫度下加熱10 min即可終止反應(yīng)。

四條引物由內(nèi)引物FIP、BIP及外引物F3、B3組成,其中FIP又由F1c和F2組成,BIP又由B1c和B2組成.這四條引物針對(duì)靶基因上的六個(gè)特異性的區(qū)域進(jìn)行設(shè)計(jì),這六個(gè)特異性的區(qū)域分別是位于3'端的F3c區(qū)段、F2c區(qū)段、F1c區(qū)段和位于5'端的B1區(qū)段、B2區(qū)段、B3區(qū)段。

LAMP反應(yīng)過(guò)程包括啞鈴狀模板合成階段、循環(huán)擴(kuò)增階段、延伸和再循環(huán)階段.在LAMP啞鈴狀模板合成階段,內(nèi)引物FIP上的F2序列與模板DNA的F2c結(jié)合,在具有鏈置換活性的DNA聚合酶的作用下合成了DNA互補(bǔ)鏈,同時(shí)外引物F3與模板DNA的F3c互補(bǔ)引導(dǎo)合成模板DNA的互補(bǔ)鏈.此時(shí)由FIP引導(dǎo)合成的互補(bǔ)鏈因?yàn)橹脫Q反應(yīng)被釋放出來(lái),其Flc和F1區(qū)互補(bǔ)形成莖環(huán)狀結(jié)構(gòu).引物BIP的B2序列與該單鏈的另一端B2c區(qū)域互補(bǔ)配對(duì)引導(dǎo)合成該鏈的互補(bǔ)鏈,然后B3與B3c互補(bǔ)配對(duì)開(kāi)始類似于F3的反應(yīng).而這條被置換下來(lái)的由FIP/BIP引導(dǎo)合成的單鏈兩端存在堿基互補(bǔ)序列,使兩端自動(dòng)成環(huán)故其使整條鏈形成啞鈴狀結(jié)構(gòu)。

在LAMP循環(huán)擴(kuò)增階段,這種啞鈴結(jié)構(gòu)的DNA為循環(huán)反應(yīng)提供了原料,首先是以啞鈴形結(jié)構(gòu)中3'端的F1區(qū)段為起點(diǎn),并以自身為模板引導(dǎo)DNA的合成.同時(shí),引物FIP上的F2區(qū)段與莖環(huán)DNA的環(huán)狀結(jié)構(gòu)上的F2c結(jié)合,啟動(dòng)新一輪鏈置換反應(yīng),并解離先前由F1引導(dǎo)合成的DNA鏈,此DNA鏈也會(huì)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu).在延伸和再循環(huán)階段,引物BIP的B2區(qū)段與環(huán)上的B2c區(qū)段結(jié)合,開(kāi)始新一輪的鏈置換反應(yīng).經(jīng)過(guò)不斷地重復(fù)相同的循環(huán)過(guò)程,使莖環(huán)個(gè)數(shù)逐漸增加,最終形成大量大小長(zhǎng)度不一的結(jié)構(gòu)。

2　LAMP擴(kuò)增結(jié)果的檢測(cè)方法

常用的檢測(cè)方法一般有以下4種:

(1)肉眼觀察法:LAMP反應(yīng)過(guò)程中,在核酸大量生成的同時(shí)其衍生物也隨之而生,從dNTPs中析出的焦磷酸根離子和反應(yīng)液中的Mg2+結(jié)合,產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的白色焦磷酸鎂沉淀。

(2)瓊脂糖凝膠電泳的檢測(cè)方法:LAMP的反應(yīng)產(chǎn)物為大小不一的DNA片段,所以其擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)典型的梯形條帶,而不只是一條帶。

(3)熒光檢測(cè)法:SYBR green I是高靈敏的DNA熒光染料,其與雙鏈DNA的親和力非常高,一旦結(jié)合便會(huì)產(chǎn)生在紫外燈或日光下可見(jiàn)的綠色熒光信號(hào).反之,則保持橙色不變。

(4)濁度儀:研究表明,焦磷酸鎂沉淀在 400nm處有吸收峰,利用 LAMP 反應(yīng)中焦磷酸鎂沉淀與所合成dNA 量之間的線性關(guān)系,通過(guò)實(shí)時(shí)濁度儀監(jiān)測(cè)沉淀的形成量,對(duì)反應(yīng)中dNA 的合成量進(jìn)行反推,從而對(duì)AMP可進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量[2]。

3　LAMP技術(shù)在雞病毒性疾病檢測(cè)中的應(yīng)用

3.1禽流感

禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱,它是由A型流感病毒引起的一種急性傳染病,可感染許多種肉用禽類,也可感染人.王辰雨等[1]根據(jù)禽流感病毒的M基因設(shè)計(jì)了LAMP引物,初步建立了該病毒的LAMP檢測(cè)方法,結(jié)果表明該方法的檢測(cè)極限為100fg,且能夠特異性地檢出H9亞型禽流感病毒;同時(shí)還將該方法與病毒分離法和常規(guī)RT-PCR法用于排毒規(guī)律的研究并進(jìn)行比較分析,結(jié)果表明LAMP法與病毒分離法及RT-PCR法的符合率較高分別為96.7%、98.3%。

3.2雞新城疫

新城疫(Newcastledisease,ND)是由ND病毒引起的主要侵害雞和火雞等禽類的一種急性、高度接觸性傳染病,嚴(yán)重危害我國(guó)禽類養(yǎng)殖業(yè).杜景嬌等[2]將NDVF基因作為靶基因設(shè)計(jì)引物,并優(yōu)化反應(yīng)體系,建立了NDV的RT-LAMP快速檢測(cè)方法.該法在恒溫65℃條件下,反應(yīng)30min即可完成擴(kuò)增,且對(duì)傳染性法氏囊病病毒、傳染性支氣管炎病毒、禽流感病毒、傳染性喉氣管炎病毒的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性.該法比RT-PCR方法敏感100倍。

3.3雞傳染性支氣管炎

雞傳染性支氣管炎(Avian Infectious Broncheitis,IB)是由傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病.劉宇卓等[3]根據(jù)IBV衣殼蛋白M基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)了2對(duì)特異性引物,通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系的優(yōu)化建立了IBV的環(huán)介導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄等溫檢測(cè)方法.試驗(yàn)表明:該法對(duì)IBV的最小檢測(cè)量為12fg并且對(duì)雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒、坦布蘇病毒及正常雞胚尿囊液的檢測(cè)均為陰性;其特異性強(qiáng)、靈敏度高,可作為雞傳染性支氣管炎的快速診斷方法.羅思思等[4]根據(jù)LAMP原理所建立的IBV RTLAMP可視化檢測(cè)方法對(duì)IBV RNA最小檢測(cè)限為10fg,其靈敏度高于常規(guī)PCR法100倍.反應(yīng)可在1h內(nèi)全部完成,并通過(guò)在反應(yīng)體系中添加SYBR green I染料后,肉眼觀察有無(wú)熒光而直接判定結(jié)果。

3.4禽白血病

禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由白血病/肉瘤病毒群中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的總稱.夏永恒等[5]根據(jù)Genbank中公布的J亞群白血病NX0101株的保守區(qū)域運(yùn)用Primer Explorer Version3設(shè)計(jì)特異性的LAMP引物,包括內(nèi)引物(F3、B3)、外引物(FIP、BIP)、環(huán)引物(LF、LB),其環(huán)引物可加速反應(yīng)速度從而縮短反應(yīng)時(shí)間.其LAMP的靈敏度可達(dá)10個(gè)拷貝,比PCR靈敏度高10倍.將該方法用于臨床樣本檢測(cè)且與PCR方法進(jìn)行比較,結(jié)果表明LAMP檢測(cè)結(jié)果與PCR基本相符,但檢測(cè)的陽(yáng)性率高于PCR.康忠惠[6]分別對(duì)GenBank中A亞群禽白血病病毒及B亞群禽白血病病毒序列進(jìn)行比對(duì),同時(shí)比較其他亞群的相應(yīng)區(qū)域,最終選擇gp85區(qū)段進(jìn)行引物設(shè)計(jì).通過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化使得LAMP方法對(duì)A、B亞群白血病通過(guò)相應(yīng)的引物設(shè)計(jì)均可成功擴(kuò)增,且對(duì)C、E、J亞群及其他禽類常見(jiàn)傳染病的檢測(cè)結(jié)果為陰性,證明該方法的特異性極強(qiáng).所建立的ALV-A LAMP體系在45min內(nèi)可檢測(cè)出20個(gè)拷貝的病毒核酸,比PCR敏感100倍;所建立的ALV-B LAMP體系在80min內(nèi)可檢測(cè)出4000個(gè)拷貝的病毒,與PCR敏感度相當(dāng).此研究在反應(yīng)液配制過(guò)程中直接加入熒光染料FDR,故在反應(yīng)結(jié)束后可根據(jù)顏色的變化直接判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果,大大降低假陽(yáng)性的發(fā)生概率。

3.5雞傳染性貧血病

雞傳染性貧血病(Chicken Infectious Anemia,CIA)是由雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)引起雛雞的以再生障礙性貧血和全身性淋巴組織萎縮為特征的一種免疫抑制性疾病,對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害很大.鄧顯文等[7]基于CIAV的VP2基因序列設(shè)計(jì)了6條特異性引物,可在50min內(nèi)快速檢測(cè)雞傳染性貧血病,通過(guò)在反應(yīng)體系中加入Calcein+MnCl2使擴(kuò)增產(chǎn)物呈肉眼可見(jiàn)的翠綠色,而陰性對(duì)照組呈橘紅色.吳煥榮等[8]根據(jù)雞傳染性貧血病毒基因序列cux-1:M55918設(shè)計(jì)了6條特異性引物,結(jié)果表明,LAMP能檢測(cè)出最低DNA量約為0.245pg/μl,而PCR能檢測(cè)出最低DNA量約為2.45pg/μl;用此方法對(duì)其他相關(guān)雞病病原進(jìn)行檢測(cè),均未發(fā)生非特異性擴(kuò)增反應(yīng)。

3.6雞傳染性喉氣管炎

雞傳染性喉氣管炎(ILT)是由傳染性喉氣管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)引起的雞的一種高度接觸性上呼吸道傳染病.謝志勤等[9]根據(jù)ILTV的TK基因序列設(shè)計(jì)了6條特異性引物,同時(shí)優(yōu)化了反應(yīng)條件,成功建立了該病毒的LAMP檢測(cè)法.用該方法對(duì)梅里亞株、廣西分離株、IL-TV北京株、永順K317株的DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性而對(duì)照組的MDV、Mass 41、E.coli O2、MG、Lasota、S1133、C48-1、、C79213的DNA/ RNA檢測(cè)結(jié)果均為陰性,證明所建立的LAMP方法對(duì)ILTV具有高度的特異性.此研究同樣也進(jìn)行了敏感性試驗(yàn),結(jié)果表明該方法比常規(guī)ILTV PCR高10倍。

3.7雞傳染性法氏囊病

傳染性法氏囊病(Infectious Bursaldisease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursaldisease Virus,IBDV)引起的危害雛雞的一種急性、高度接觸性、病毒性傳染病,主要侵害雞的中樞免疫器官--法氏囊.楊作豐等[10]針對(duì)雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)VP1基因保守區(qū)域的6個(gè)特異性部位利用Primer ExplorerV4軟件設(shè)計(jì)了4條引物,從而建立了IBDV的反轉(zhuǎn)錄環(huán)媒恒溫檢測(cè)方法.在65℃等溫條件下反應(yīng)1h后,其反應(yīng)產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠電泳可得特有的階梯狀條帶.此方法對(duì)IBDV的最低檢出量是10-6稀釋倍數(shù),敏感性極強(qiáng)是普通RT-PCR的100倍.在檢測(cè)臨床樣品方面,其與普通RT-PCR方法的符合率為93.8%。

3.8網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥

網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(Reticuloendotheliosis,RE)是禽類一種重要的免疫抑制性和致瘤性疾病.在養(yǎng)殖場(chǎng)中REV常與雞貧血病毒、J-亞群禽白血病病毒和馬立克氏病病毒混合感染,這使得雞群免疫力下降,從而導(dǎo)致新城疫、禽流感等疫苗免疫失敗,還將導(dǎo)致繼發(fā)感染,這使疫病的診斷和防控難度加大.鄧小蕓等[11]根據(jù)REV pol基因的6個(gè)特異性位點(diǎn)設(shè)計(jì)了4條引物,建立了針對(duì)該病毒的LAMP檢測(cè)方法.該法比常規(guī)PCR方法靈敏25倍并且與常見(jiàn)的感染雞群的DNA病毒及ALV-J不發(fā)生交叉反應(yīng).其操作簡(jiǎn)單,無(wú)須復(fù)雜儀器,簡(jiǎn)單水浴鍋即可且臨床樣品檢測(cè)效率與PCR方法相當(dāng),肉眼可觀察檢測(cè)結(jié)果。

3.9禽呼腸孤病毒感染

禽呼腸孤病毒感染(Avian reovirus infection,ARV)是呼腸孤病毒感染并引起雞的多種疾病,包括呼吸道疾病、病毒性關(guān)節(jié)炎、腸道疾病、矮小綜合征和吸收不良綜合征.王瑩[12]在ARV的S1基因序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)了3對(duì)引物,分別為內(nèi)引物、外引物和環(huán)引物,從而建立了檢測(cè)AVR的LAMP方法.試驗(yàn)結(jié)果表明:該法能檢測(cè)出1個(gè)拷貝的pMD-18T-S1陽(yáng)性質(zhì)粒,敏感性很高.將該法與RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR及半套式RT-PCR進(jìn)行比較,結(jié)果表明RT-PCR最低能檢測(cè)到103個(gè)拷貝/μl的質(zhì)粒, 10pg的RNA,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、半套式RT-PCR、RT-LAMP均能最低檢測(cè)到100個(gè)拷貝/μl的質(zhì)粒,lOfg的RNA.由此可以得出,核酸檢測(cè)方法中,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、半套式RT-PCR、LAMP的敏感度極高。

4　LAMP技術(shù)在雞細(xì)菌性疾病檢測(cè)

4.1用于金黃色葡萄球菌的檢測(cè)

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表,屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus),是引起細(xì)菌性食物中毒的重要病原菌之一.由于其廣泛存在于自然界中,故中毒食物的種類非常多,如人們?nèi)粘Ｊ秤玫娜?、蛋、?因此,建立一種快速、有效的檢測(cè)方法可提高人類的健康水平.唐夢(mèng)君[15]等根據(jù)金黃色葡萄球菌nuc基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物,所建立的LAMP體系在65℃的等溫條件下,僅需45min即可擴(kuò)增出LAMP所特有的階梯狀條帶且用該方法對(duì)240份雞蛋樣品進(jìn)行檢測(cè),12份蛋殼金黃色葡萄球菌檢測(cè)陽(yáng)性,蛋內(nèi)容物均未檢出,其檢測(cè)結(jié)果與國(guó)標(biāo)方法相符合。

4.2腸出血性大腸桿菌的檢測(cè)

腸出血性大腸桿菌是一種人畜共患病病原,該菌的傳播途徑有食源性、水源性及接觸傳播,類型多且血清型復(fù)雜,而傳統(tǒng)的檢測(cè)方法如酶聯(lián)免疫技術(shù)、免疫磁珠分離法、蛋白芯片技術(shù)等免疫學(xué)檢測(cè)方法及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)等分子生物學(xué)難以快速檢測(cè)出該菌.張雪寒[16]等針對(duì)rfbE基因設(shè)計(jì)引物并建立反應(yīng)體系,該體系在1h內(nèi)便可通過(guò)肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果.試驗(yàn)結(jié)果表明該體系對(duì)0157菌液和模擬陽(yáng)性樣品的檢測(cè)靈敏度分別為1CFU/ml和1CFU/g.用沙門(mén)桿菌及其他血清型大腸桿菌DNA作為模板對(duì)rfbE基因進(jìn)行特異性試驗(yàn)的檢測(cè),其特異性為100%。

4.3單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌

單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌是一種能夠引起人畜共患疾病的食源性致病菌.袁耀武[17]等基于單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的李氏溶血素基因(Hly),設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物,并通過(guò)LAMP技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增.運(yùn)用LAMP對(duì)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌純培養(yǎng)進(jìn)行檢測(cè),其方法的靈敏度為7.3X101cfu/ml;而利用LAMP檢測(cè)人工污染的雞肉中的單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌,檢出限為8.9X101cfu/g.張亞爽[18]分別用LAMP法和PCR法檢測(cè)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:PCR和LAMP方法的靈敏度分別為1.47X102cfu/ml和7.3X10cfu/ml.利用PCR技術(shù)和LAMP技術(shù)直接檢測(cè)人工污染的雞肉中的單增李斯特,檢出限分別為9.6X102cfu/g和8.9X10cfu/g。

5　LAMP技術(shù)用于雞支原體疾病檢測(cè)中的應(yīng)用

5.1雞滑液支原體

滑液支原體(Mycoplasma synoviae,MS)以侵害雞關(guān)節(jié)滑液、腱鞘膜和氣囊為主,引起雞亞臨床型的上呼吸道感染和關(guān)節(jié)滑液囊炎.鄧顯文等[19]建立了MS的LAMP可視化檢測(cè)方法,該方法所使用的引物是根據(jù)GenBank中MS熱休克ATP依賴蛋白酶基因的保守序列所設(shè)計(jì)的.將反應(yīng)體系在62℃水浴鍋中反應(yīng)1h,最低可檢測(cè)到100拷貝的目的DNA,其敏感性比常規(guī)PCR法高10倍.而且此研究使用的染料為Calcein+MnCl2,它可在配制LAMP反應(yīng)液時(shí)直接加入從而避免了傳統(tǒng)的LAMP方法需要在反應(yīng)結(jié)束后加入熒光染料SYBR greenI所造成的二次污染.反應(yīng)結(jié)果肉眼即可觀察,陽(yáng)性樣品為翠綠色,陰性為橘紅色。

5.2雞毒支原體強(qiáng)毒和弱毒株檢測(cè)

雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)是雞及其他禽類慢性呼吸道疾病的主要病原,感染雞群常出現(xiàn)噦音、咳嗽、流鼻涕等癥狀,可引起雞生長(zhǎng)速度下降,肉雞胴體品質(zhì)下降和種雞產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率下降等,給養(yǎng)禽業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[20-21].MG強(qiáng)毒株和弱毒疫苗株的鑒別檢測(cè)對(duì)于MG的防治非常重要.羅思思等[22]根據(jù)MG強(qiáng)弱毒株堿基保守性與差異設(shè)計(jì)了MG強(qiáng)弱毒株通用的LAMP引物序列及MG弱毒的LAMP引物序列.其強(qiáng)弱毒通用LAMP方法對(duì)雞毒支原體的強(qiáng)弱毒株均可檢測(cè),弱毒LAMP方法只可檢測(cè)到弱毒.兩種檢測(cè)方法與常見(jiàn)的禽類呼吸道病和其他支原體均不存在交叉反應(yīng),具有特異性強(qiáng)、靈敏度高適于基層快速鑒別MG強(qiáng)、弱毒株的檢測(cè)方法。

6　展望

LAMP技術(shù)是一種新型的核酸擴(kuò)增技術(shù),該方法對(duì)實(shí)際操作人員的技術(shù)水平要求不高且不需要昂貴的儀器設(shè)備,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可通過(guò)肉眼觀察直接得出.因其快速、高效且廉價(jià)的特性被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域.但在實(shí)際操作中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性的問(wèn)題,若在此方面進(jìn)一步優(yōu)化和改善,該技術(shù)必將在食品微生物檢測(cè)、動(dòng)物疫病檢測(cè)及耐藥性基因等方面發(fā)揮不可替代的重要作用。

[1]王辰雨.禽流感病毒LAMP檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.

[2]劉宇卓,韓凱凱,李銀,等.雞傳染性支氣管炎病毒RT-LAMP檢測(cè)方法的建立[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(4):818-821.

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魏曉媛(1987-),女,河北元氏人,獸醫(yī)師,碩士,主要從事畜禽傳染病防治研究。