免疫組化技術在病理診斷中的應用

康世瑾 安淑敏 劉志遠 李宇新 李冬玲

（雞西市人民醫(yī)院，黑龍江 雞西 158100）

免疫組化技術在病理診斷中的應用

康世瑾 安淑敏 劉志遠 李宇新 李冬玲

（雞西市人民醫(yī)院，黑龍江 雞西 158100）

免疫組化技術在臨床病理診斷中的應用已逐漸成熟，目前很多腫瘤都是采用免疫組化技術進行病理診斷，該技術對準確診斷及鑒別惡性腫瘤具有重要作用，但在應用過程中也存在一些問題。本文較深入地探討了免疫組化技術的相關理論，對應用免疫組化技術過程中的常見問題進行了分析，并有針對性地提出相應處置措施。

免疫組化；腫瘤診斷；臨床應用

在病理診斷中應用免疫組化技術始于20世紀70年代，現(xiàn)在已廣泛應用于病理診斷，并成為病理醫(yī)師工作中不可缺少的重要內(nèi)容，該技術在病理診斷尤其是診斷鑒別腫瘤方面具有十分重要的作用。應用該技術為治療有關腫瘤組織抗原及預后提供重要參考依據(jù)，但是也存在一些問題。

1　免疫組化技術原理

免疫組化技術在本質(zhì)上免疫組化染色技術，主要是對抗體結(jié)合組織中的一部分特殊抗原采用特別染色的技術［1］。相互結(jié)合的抗體抗原通常以結(jié)合抗體的酶元素顯示，主要是因不具有著色物質(zhì)特性，結(jié)合抗體而導致病原體、蛋白質(zhì)及多肽等有色物質(zhì)在結(jié)合抗體抗原的位置發(fā)生沉淀。一般情況下，只有采用光學顯微鏡才能觀察到有色物質(zhì)。在組織固定時，甲醛可促進蛋白凝固和交聯(lián)，使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生相應變化，但不會影響抗原決定鏃的結(jié)構(gòu)。采用蛋白酶消化時，將清除掉抗原決定鏃中的部分雜蛋白，進而使交聯(lián)打開，利用微波等熱抗原修復工具，最大化暴露抗原決定鏃，使免疫組化染色提高敏感性。免疫組化技術中的甲醛常規(guī)固定法目前應用的較多，尤其是在石蠟包埋組織切片病理診斷中應用。

2　應用免疫組化技術過程中的常見問題

基于免疫組化染色切片才能實現(xiàn)免疫組化染色技術的正確診斷和鑒定，利用病理醫(yī)師與技術人員之間的協(xié)調(diào)配合，才能順利完成免疫組化染色切片。但通常在免疫組化切片過程中容易產(chǎn)生假陽性、假陰性及背景著色與邊緣反應等一些常見問題［2］。

2.1假陽性：假陽性主要是指在實施免疫組化切片的過程中，全部切片都產(chǎn)生弱陽性反應，或在相同組織細胞中的胞核中某組抗體都產(chǎn)生陽性反應。而且，積壓區(qū)、壞死區(qū)、切片邊緣及刀痕區(qū)等部位也產(chǎn)生陽性染色現(xiàn)象，這都顯示出具有假陽性表現(xiàn)。產(chǎn)生假陽性的原因主要有：一是抗體具有較高的濃度；二是可能是多抗原與抗體之間產(chǎn)生相互交叉反應；三是進行一抗孵育的整個過程時間較長或處于較高的溫度中；四是DAB顯色與變質(zhì)需較長的產(chǎn)生時間，其中顯色只在5～10 min產(chǎn)生，并利用顯微鏡觀察達到最優(yōu)效果；五是切片浸泡在修復液或緩沖液中的時間超過24 h，時間相對較長；六是多克隆抗體具有抗變質(zhì)、質(zhì)量差的特點，應特別重視抗體有效期，產(chǎn)生過期的抗體一般都是背景著色或根本不會顯色。七是酸堿性（pH值）在緩沖液中的具體數(shù)值不合理，或洗滌過程不徹底等。

2.2假陰性：通常在免疫組化切片過程中，一般都會產(chǎn)生假陰性結(jié)果。假陰性的表現(xiàn)主要是，全部被標記過的抗體切片都產(chǎn)生陰性反應。但在臨床實際中真實情況并不是這樣，因此被稱為假陰性。假陰性產(chǎn)生的主要原因是，一是要檢查的細胞或組織在免疫組合染色切片中根本就不存在，這通常是因有關人員將抗體、切片或蠟塊等物品選錯；二是在實施染色過程中也許在某幾個環(huán)節(jié)中的步驟沒有嚴格遵循技術操作要求而產(chǎn)生一些問題；三是在處理標本的過程中，沒有采取比較科學合理的方法，或產(chǎn)生抗原丟失或弱化的現(xiàn)象，通常腫瘤細胞處于不同代謝和分化狀態(tài)，其抗原表達一般也容易在一致性方面產(chǎn)生不完全的情況［3］。腫瘤細胞在一般情況下，越低的分化就表現(xiàn)出越低的抗原表達，陽性表明越弱，在細胞數(shù)量方面陽性也相對較少。

2.3背景著色與邊緣反應：背景著色主要是對進行標記后的細胞以外的其他成分進行著色，間質(zhì)著色主要包括抗體具有過高的濃度，底物需要過長的顯色時間，或內(nèi)源性酶阻斷未完全等較多的原因。此外，純度不夠的抗體或被污染的抗體也容易產(chǎn)生間質(zhì)著色。切片邊緣表現(xiàn)出較強的陽性的主要原因是玻片沒有進行徹底的清潔處理，滴加液體試劑受表面張力作用影響固縮到組織切片邊緣及PBS沒有進行徹底沖洗等。

2.4免疫組化技術的標準化：在應用免疫組化技術時，通常會產(chǎn)生上述的三方面問題，對其歸納可知其最大原因就是免疫組染色切片不具有標準措施或步驟。所以，一定要對免疫組化技術標準化，一是規(guī)范有關行為的技術標準，推薦采用中性福爾馬林，一般不要超過7 d固定時間。標準化的組織制備流程使其狀態(tài)保持最佳，過高的烤片及埋蠟溫度或過長時間都會對抗原活性產(chǎn)生影響。二是陰性對應用照片特別重要，能夠降低內(nèi)源性過氧化物酶的干擾。三是抗原修復一致性，采用微波等作為熱抗原修復工具，可提高修復溫度與修復時間的精確性［4］。

3　結(jié) 語

總之，在臨床應用免疫組化技術的過程中，應特別注意存在的問題，并采取有針對性地措施進行妥善解決，主要是使有關環(huán)節(jié)達到標準化，并提高對標準化的重視程度，采取標準化程序進行操作，對免疫組化技術質(zhì)量進行科學控制，進而才能在病理診斷、預后判斷及臨床治療中發(fā)揮十分重要的作用。

［1］ 李向紅.醫(yī)學實驗室標準化的方向［J］.中華病理學雜志，2004，33（6）：591-592.

［2］ 魏兵，步宏.英國國家免疫細胞化學外部質(zhì)量評估方案及其乳腺病理應用模式［A］.全國乳腺疾病病理學診斷及研究進展研討會，2003.

［3］ 鄭杰，鄒萬忠，吳秉銓.成功開展免疫組織化學的關鍵是標準化［J］.中華病理學雜志，1996，25（6）：323-325.

［4］ 趙利珍，甄美華，耿麗萍.應用免疫組化技術的幾點體會［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學院學報，1998（4）：274-275.

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1671-8194（2016）28-0294-01