DNA倍體定量分析聯(lián)合TCT在宮頸癌篩查中的應(yīng)用

陳麗艷（云南省曲靖市婦幼醫(yī)院病理科，云南 曲靖 655000）

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DNA倍體定量分析聯(lián)合TCT在宮頸癌篩查中的應(yīng)用

陳麗艷
（云南省曲靖市婦幼醫(yī)院病理科，云南 曲靖 655000）

【摘要】目的 探討聯(lián)合應(yīng)用DNA倍體定量分析聯(lián)合宮頸薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價值。方法 回顧性分析我院自2011年8月至2013年12月開展DNA倍體定量分析，5020例患者進(jìn)行TCT和DNA倍體定量分析，同時進(jìn)行陰道鏡下取活檢的184例患者為研究對象，以術(shù)后病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，計算兩種方法對宮頸病變的檢出陽性率。結(jié)果 DNA倍體定量分析中見異倍體的179例，病理診斷陽性率為54.89%；TCT檢測陽性者140例，病理診斷陽性率為50.54%；TCT結(jié)合DNA倍體定量分析，總病理診斷陽性率為56.52%。結(jié)論 聯(lián)合TCT和DNA倍體定量分析應(yīng)用于宮頸癌篩查，可提高宮頸病變的檢出率，提高細(xì)胞學(xué)檢查的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】DNA倍體定量分析；TCT；宮頸癌

宮頸癌（cervical cancer，CC）是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐漸年輕化、增多化的趨勢[1]。我院自2011年8月2013年12月開展DNA倍體定量檢測及TCT檢查對宮頸病變進(jìn)行檢測，以病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)，探討TCT聯(lián)合DNA倍體定量分析在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇我院2011年8至2013年12月進(jìn)行DNA倍體定量分析及TCT檢查的患者5020例，如DNA倍體定量分析檢測異倍體細(xì)胞≥3個或DNA倍體定量分析檢測異倍體細(xì)胞1～2個同時TCT診斷ASCUS及以上病變或未發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞而TCT診斷LSIL及以上病變的，再行宮頸多點組織活檢的共184例患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑：用麥克奧迪（廈門）全自動細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)、TDZ5-WS多管架自動平衡離心機(jī)、MX-S（F）混勻儀、CJJ78-1磁力加熱攪拌器、電熱恒溫培養(yǎng)箱、保存液、Feulgen染色試劑。

1.2.2 標(biāo)本采集與處理：婦科臨床醫(yī)師使用窺陰器暴露宮頸后，用棉球輕輕擦去宮頸表面分泌物，然后用與標(biāo)本瓶配套的專用刷從宮頸外口插入宮頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)3～5圈取出，再將刷頭放入裝有固定液的標(biāo)本瓶中，蓋上瓶蓋，貼上標(biāo)簽送檢。

1.2.3 制片方法：標(biāo)本確認(rèn)并編號；排列玻片；添加細(xì)胞分散劑；將采集的細(xì)胞液在震蕩器上震蕩5 s，倒在離心管中，離心沉淀（離心機(jī)轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/分鐘）5 min，倒去上清液，稀釋細(xì)胞沉淀，轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液，分別滴2張薄片（以便一張進(jìn)行巴氏染色做常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷（TCT），另一張用Feulgen DNA染色做DNA定量檢測），晾干。

1.2.4 DNA倍體定量檢測：用麥克奧迪（廈門）全自動細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)，對已進(jìn)行Feulgen DNA染色玻片上的每一個細(xì)胞核進(jìn)行掃描分析，測量所有宮頸上皮細(xì)胞核DNA含量并分析其倍體。判定標(biāo)準(zhǔn)：①正常：正常2倍體細(xì)胞為主（DNA指數(shù)為1），未見異倍體細(xì)胞及異倍體細(xì)胞峰。②少量DNA異倍體細(xì)胞：出現(xiàn)1～2個DNA指數(shù)＞2.5的細(xì)胞。③異常：DNA指數(shù)＞2.5時，或2倍體與4倍體之間的細(xì)胞數(shù)超過被測細(xì)胞總數(shù)的10%時。以②～③為陽性。

1.2.5 細(xì)胞學(xué)診斷TBS分類：根據(jù)1991年美國國家腫瘤研究學(xué)會制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)為[2]：①正常范圍（NILM），②意義不明確的不典型鱗狀上皮細(xì)胞或腺細(xì)胞（ASCUS或AGC），③鱗狀上皮內(nèi)低度病變（LISL）；④鱗狀上皮內(nèi)高度病變（HSIL）；⑤鱗癌（SCC）/腺癌。以②～⑤為陽性。

1.2.6 病理診斷：①正常范圍（慢性宮頸炎）；②CINⅠ（輕度宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變）；③CINⅡ（中度鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變）；④CINⅢ（重度宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變或原位癌）；⑤CA（浸潤性宮頸鱗癌或腺癌），以②～⑤為陽性。

1.2.7 統(tǒng)計方法：數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料比較采用方差分析，以P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCT和DNA倍體定量分析分別與病理診斷的關(guān)系：184例研究對象中，DNA倍體定量檢測檢出陽性179例，檢出率97.28%（179/184）；DNA倍體定量分析中見異倍體細(xì)胞數(shù)量為1～2個的有20例患者中，病理診斷為CIN 和宮頸癌者11例，陽性檢出率為55.0%。DNA倍體定量分析中見異倍體細(xì)胞數(shù)量≥3個的有159例患者中，病理診斷為CIN和宮頸癌者90例，陽性檢出率為56.6%。其中CINⅠ37例，占23.27%；CINⅡ19例，占11.95%；CINⅢ26例，占16.35%，浸潤癌6例，占3.77%；腺癌2例，占1.26%，正常（宮頸炎）69例，占43.39%，則DNA倍體定量檢測總的病檢陽性率54.89%（101/184）。TCT檢出陽性140例，檢出率為76.09%（140/184），其中ASCUS74例，檢出CIN和宮頸癌42例，占56.76%；LSIL41例，檢出CIN和宮頸癌29例，占70.73%；HSIL17例，檢出CIN和宮頸癌14例，占82.35%。ASC-H4例，檢出CIN和宮頸癌4例，占100%，AGC2例，檢出CIN和宮頸癌2例，占100%，SCC2例，檢出CIN和宮頸癌2例，占100%，則TCT總的病檢陽性率50.54%（93/184）（P＜0.05）。

2.2 聯(lián)合TCT和DNA倍體定量分析與病理診斷的關(guān)系：DNA倍體定量檢測異倍體細(xì)胞≥3個而TCT無改變者44例，病理診斷陽性11例，未能檢出DNA異倍體細(xì)胞而細(xì)胞學(xué)診斷為LSIL者5例，病理診斷陽性2例。而TCT結(jié)合DNA倍體定量檢測總病檢陽性率56.52% （93+11/184）（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 DNA倍體定量分析在宮頸癌篩查中的作用：DNA倍體定量分析技術(shù)作為21本世紀(jì)一種新的宮頸癌檢測方法，具有準(zhǔn)確度高、敏感性強(qiáng)和重復(fù)性好的優(yōu)點，可作為大規(guī)模宮頸癌篩查的一種新方法，主要原理是通過測量細(xì)胞核內(nèi)DNA含量的變化，在形態(tài)改變不明顯前即可檢測出那些病變細(xì)胞。本研究采用DNA倍體定量分析系統(tǒng)聯(lián)合TCT檢查，進(jìn)行婦女宮頸癌的篩查，以人群自愿參與普查為基礎(chǔ)，共采集宮頸細(xì)胞樣本5020份，發(fā)現(xiàn)184例需進(jìn)行陰道鏡下取活檢，這部分人是我們重點調(diào)查跟蹤對象?？偟牟z陽性率54.89%高于TCT總的病檢陽性率50.54%（有統(tǒng)計學(xué)差異P＜0.05）。且當(dāng)宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中出現(xiàn)大量的DNA異倍體細(xì)胞（異倍體細(xì)胞數(shù)量≥3個），其CIN和宮頸癌陽性檢出率更高（56.6%）。且在DNA倍體定量分析中見異倍體細(xì)胞數(shù)量≥3個，病檢陽性90例的患者中，有53例均為高級別上皮內(nèi)病變，表明DNA倍體異常細(xì)胞的數(shù)量與CIN和宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，對宮頸癌的臨床診斷有重要指導(dǎo)意義。其可以作為宮頸癌篩查的手段之一。

3.2 聯(lián)合DNA倍體定量檢測和TCT檢查在宮頸癌篩查中的應(yīng)用：本組研究顯示，聯(lián)合DNA倍體定量檢測和TCT檢查，DNA倍體定量檢測異倍體細(xì)胞≥3個而TCT無改變者44例，病理診斷陽性11例，也就是說在本次研究184例患者中，TCT漏診11例，漏診率0.06%（11/184）；且在漏診的11例患者中，有6例CINⅠ，2例CINⅡ，3例CINⅢ，還有1例是鱗癌。這是因為TCT的診斷存在人為經(jīng)驗不足且?guī)в兄饔^判斷標(biāo)準(zhǔn)，還受制片質(zhì)量、標(biāo)本本身因素影響。而未能檢出DNA異倍體細(xì)胞而細(xì)胞學(xué)診斷為LSIL者5例，病理診斷陽性2例，則DNA倍體定量檢測漏診2例，漏診率0.01%（2/184）。且病檢結(jié)果1例為HPV感染，另1例為局灶CINⅠ。而TCT結(jié)合DNA定量檢測總病檢陽性率56.52%，則避免了上述漏診率的存在。因此將TCT檢測與DNA倍體定量分析相結(jié)合，能有效減少漏診、誤診，彌補(bǔ)TCT檢查的不足，其陽性率更高。但因本次研究未發(fā)現(xiàn)TCT無改變及DNA倍體無異常的患者行陰道鏡取病理組織活檢，因此，對二者聯(lián)合篩查宮頸癌未做漏診率統(tǒng)計，有待隨訪完善資料。

因此，應(yīng)用自動細(xì)胞DNA倍體定量分析系統(tǒng)可以對涂片內(nèi)的所有細(xì)胞核進(jìn)行定量檢測分析，可避免人為疏漏、經(jīng)驗不足和只從單一的細(xì)胞形態(tài)改變來診斷的缺陷，能發(fā)現(xiàn)肉眼所不能觀察到的細(xì)微改變，可彌補(bǔ)細(xì)胞學(xué)診斷的缺陷，從而提高了診斷技術(shù)。而結(jié)合液基細(xì)胞學(xué)檢查和病理活檢可以早期診斷宮頸癌前病變及宮頸癌，對宮頸癌前病變及宮頸癌能減少漏診、誤診，可提高宮頸病變的檢出率，提高細(xì)胞學(xué)檢查的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 朗景和.子宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷和治療[J].中華婦產(chǎn)科雜志, 2001,36(5):261.

[2] 顧美皎.TBS系統(tǒng)中異常上皮細(xì)胞的診斷和處理[J].中國實用婦科與產(chǎn)科學(xué),2003,19(8):466-467.

中圖分類號：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）09-0169-02