薯莨鞣質(zhì)粗提物體外抗霉菌作用及對人腫瘤細胞生長的影響

鄧先擴　陳　明　許義紅　張林甦*

（貴州省黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校藥學教研室，貴州 都勻 558000）

· 實驗研究 ·

薯莨鞣質(zhì)粗提物體外抗霉菌作用及對人腫瘤細胞生長的影響

鄧先擴陳明許義紅張林甦*

（貴州省黔南民族醫(yī)學高等專科學校藥學教研室，貴州 都勻 558000）

目的 考查薯莨水提物的化學成分及其鞣質(zhì)粗提物的體外抗霉菌等藥理作用。方法 經(jīng)典鑒定方法鑒定薯莨的化學成分；紙片法考查薯莨鞣質(zhì)粗提物對大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉的作用；MTT法檢測其對人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞A2780、人胃癌細胞SGC-7901生長的影響。結(jié)果 薯莨水溶性成分包括蛋白類、糖類或苷類、鞣質(zhì)和有機酸等，未檢測到生物堿；薯莨鞣質(zhì)粗提物對大腸桿菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，對黑霉沒有抑制作用；薯莨鞣質(zhì)粗提物在體外對人肺癌細胞A549和人胃癌細胞SGC7901有刺激作用，對人卵巢癌細胞A2780生長沒有影響。結(jié)論 薯莨鞣質(zhì)粗提物具有一定的抗霉菌活性，對某些腫瘤細胞有刺激作用，作用機制還有待深入研究。

薯莨；成分分析；細菌；癌

薯莨（Dioscorea cirrhosa Lout.）是薯蕷科薯蕷屬的一種多年生藤本野生植物，分布在我國中、南部地區(qū)，藥用其塊莖。薯莨的化學成分主要是鞣質(zhì)，還含有酚類，苷類及蛋白質(zhì)、糖類、黏液等成分，具有止血、抗菌、抗氧化和清熱化瘀等功效，也有抗輻射和延緩衰老作用。但有關(guān)其藥理活性研究也僅基本上局限于傳統(tǒng)的民間用法，有效部位、有效成分尚不明確［1］。為了深入研究薯莨的藥理活性，我們對其鞣質(zhì)粗提物的抗霉菌、對腫瘤細胞生長的影響作用進行了研究。

1　資料與方法

1.1資料

1.1.1藥材：薯莨（干藥材）由貴州青草堂藥業(yè)有限責任公司提供，品種鑒定由貴陽醫(yī)學院藥學院覃容貴教授完成。

1.1.2供試菌種及腫瘤試劑：大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌種由貴州大學生命學院韓麗珍副教授惠贈。人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞A2780、人胃癌細胞SGC-7901由中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所藥理中心提供。

1.1.3試劑與儀器：YX-400智能型全自動不銹鋼立式電熱高壓滅菌鍋，常州諾基有限公司生產(chǎn)；DHP-2000型電熱恒溫培養(yǎng)箱，天津市華北試驗有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；HWS-24型電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科技儀器有限公司；VERT.A1倒置顯微鏡，ZEISS公司；HF 151UV二氧化碳培養(yǎng)箱，由上海力申科學儀器有限公司；VICTOR X3型酶標儀，PerkinElmer公司；無菌操作臺，江蘇蘇州潔凈技術(shù)研究所。噻唑藍（MTT）和胰蛋白酶為Sigma公司產(chǎn)品，PRMI-1640培養(yǎng)基GIBCO公司產(chǎn)品，胎牛血清杭州四季青公司產(chǎn)品，胰蛋白胨，酵母提取物，瓊脂粉為國產(chǎn)微生物培養(yǎng)用，氯化鈉、乙酸鋅、氨水、氯化銨、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA·2Na）、鉻黑T、乙醇等其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2方法

1.2.1薯莨水提物性質(zhì)鑒定：薯莨塊10 g磨粉加水浸沒，浸泡過夜，得水提物，按常規(guī)方法檢測氨基酸、蛋白質(zhì)，糖類、多糖、苷、皂苷、有機酸、生物堿、鞣質(zhì)等項目。

1.2.2提取與分離：薯莨塊100 g粉碎成粗粉，加75%的酒精250 mL， 4 ℃下浸泡2 d，過濾，得乙醇濾液220 mL，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀50 ℃濃縮，60 ℃水浴過夜，得干燥的深紅色鞣質(zhì)粗提物17.33 g。

1.2.3測定鞣質(zhì)含量：采用絡(luò)合滴定法［2］測定，利用鋅離子只與鞣質(zhì)反應(yīng)的特性，用鋅離子沉淀溶液中的鞣質(zhì)，剩余鋅離子以鉻黑T作指示劑，用EDTA-Na溶液滴定。稱取樣品適量50 mg，置100 mL量瓶中，精密移取配制好的0.05 mol/L的鋅滴定液10 mL及氨一氯化銨緩沖溶液（pH=10）10 mL，加入100 mL量瓶中，以蒸餾水定容至100 mL，超聲3 min，待沉淀穩(wěn)定后過濾，精密吸取續(xù)濾液10 mL，置錐形瓶中，加配制好的氨一氯化銨緩沖溶液（pH=10）10 mL、鉻黑T指示劑適量，用0.05 mol/L的EDTA-Na滴定液滴定至溶液顯藍綠色，即為終點。測得鞣質(zhì)純度為78.4%。

1.2.4抗霉菌實驗

1.2.4.1薯莨鞣質(zhì)粗提物用水溶解，配制成高劑量（100 mg/mL）和低劑量（25 mg/mL）組。

1.2.4.2菌液的制備：將大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌種的單個菌落分別接種于培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫增菌培養(yǎng)18～24 h，用無菌水配制成1×106～1×107CFU/mL的菌液（OD590=0.6）。

1.2.4.3藥敏紙片法：制作含有不同濃度薯莨且直徑為10 mm的藥敏紙片。將不同的菌種100 μL涂布于瓊脂培養(yǎng)基，當培養(yǎng)基表面干燥后，將紙片貼于培養(yǎng)基表面，37 ℃培養(yǎng)24 h后，觀察并測定抑菌環(huán)直徑。

1.2.5體外抗腫瘤實驗：按文獻方法培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長期，調(diào)節(jié)細胞濃度為1×105個/mL，各取100 μL加入96孔板，置5% CO2培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)48 h，加入不同濃度供試品，將薯莨鞣質(zhì)用DMSO溶解成高劑量100 μg/mL和低劑量20 μg/mL組，每組設(shè)3個平行，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，每孔加入10 μL 0.5 g/L MTT，4 h后終止反應(yīng)，傾棄培養(yǎng)液，加入100 μL DMSO，酶標儀上490 nm處測吸光值A(chǔ)，按下式計算細胞生長抑制率：細胞生長抑制率=｛［（陰性組OD值的平均值一空白組OD值的平均值）一（實驗組OD值的平均值一空白組OD值的平均值）］/（陰性組OD值的平均值一空白對照組OD值的平均值）｝×100%。

2　結(jié)　果

2.1薯莨化學成分鑒定結(jié)果：薯莨水溶性物質(zhì)含有蛋白類、糖類或苷類、鞣質(zhì)和有機酸，未檢測到生物堿類成分。

2.2薯莨主要成分鞣質(zhì)抑菌結(jié)果：薯莨鞣質(zhì)粗提物對大腸桿菌TG1、黑曲霉及木霉均有一定的抑菌作用，呈現(xiàn)劑量依賴性，但是對黑霉沒有抑制作用。

2.3薯莨主要成分鞣質(zhì)體外抗腫瘤實驗結(jié)果：MTT法檢測薯莨鞣質(zhì)粗提物對腫瘤細胞生長的影響，薯莨鞣質(zhì)粗提物在高劑量時對人肺癌細胞A549和人胃癌細胞SGC7901有刺激作用，而對人卵巢癌細胞A2780沒有影響。低劑量組對以上三種細胞的影響都不顯著（數(shù)據(jù)未展示）。

3　討　論

從薯莨鞣質(zhì)粗提物對大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌的抗菌作用來看，其對大腸桿菌TG1、黃曲霉、木霉菌有一定抗菌作用，而大腸桿菌TG1、黑霉、黃曲霉、木霉菌均與食品保鮮有關(guān)，這進一步證實薯莨可用于食品保鮮，其有效部位可能是鞣質(zhì)。當然薯莨鞣質(zhì)粗提物需進一步分離純化，抗菌有效部位需進一步確定，抗菌機制也需闡明，有報道認為薯莨鞣質(zhì)能與蛋白質(zhì)作用，凝固微生物體內(nèi)的原生質(zhì)而具有抑菌作用，這有待進一步探明［1-2］。

薯莨抗腫瘤作用目前未見報道，我們對薯莨鞣質(zhì)粗提物進行了體外抗腫瘤實驗探索，實驗結(jié)果證實一定劑量薯莨鞣質(zhì)粗提物在體外對A549人肺癌細胞株及人胃癌細胞株SGC-7901有刺激生長的作用，而對人卵巢癌A2780細胞株的生長則無明顯影響。鞣質(zhì)具有一定的抗癌活性［2］，但薯莨鞣質(zhì)粗提物表現(xiàn)出刺激A549人肺癌細胞株及人胃癌細胞株SGC-7901生長作用，究竟是薯莨鞣質(zhì)引起還是其他成分引起，或者是對哪些腫瘤細胞有抗癌活性，哪些腫瘤細胞沒作用這有待進一步研究。各種腫瘤細胞生長的微環(huán)境不同，受到不同因子的影響從而不斷生長。目前的認知中，鞣質(zhì)作為可以直接與蛋白作用的物質(zhì)，可能可以更加直接參與影響信號通路中的某些因子，從而刺激了某些腫瘤細胞的生長。

［1］ 王慶蓉，馬麗，雷呈祥.薯莨的藥用價值［J］.職業(yè)與健康，2009，25（6）:647-649.

［2］ 安靜波，郭健，宋文東等.薯莨提取物止血效果及化學成分的初步研究［J］.食品工業(yè)科技，2013（12）:344-346.

R282.710.5；R73

B

1671-8194（2016）29-0022-02

貴州省黔南州科技基金

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